金边蚂蟥提取物大鼠亚急性毒性试验

许振朝，宋茹雪，宋延坤，張雄胜，覃 壬，侥伟源

(1.广西南宁市净雪皇生物工程有限公司研究中心，广西 南宁 530000；2.广西中医药研究院药理所，广西 南宁 530000)

金边蚂蟥提取物大鼠亚急性毒性试验

许振朝1，宋茹雪1，宋延坤1，張雄胜1，覃 壬1，侥伟源2

(1.广西南宁市净雪皇生物工程有限公司研究中心，广西 南宁 530000；2.广西中医药研究院药理所，广西 南宁 530000)

金边蚂蟥收载于广西壮族自治区药材标准第二卷。本文为第一次报道金边蚂蟥的亚急性毒性试验结果，供临床及实验研究参考。方法实验以金边蚂蟥提取物1.0 g、0.5 g/kg/d分别给大鼠灌胃给药（分别相当于临床拟用日剂量0.01 g/kg/d的100倍、50倍），连续1个月。结果动物的外观体征、行为活动无异常，各组动物饲料日消耗量无明显差异；体重增长正常，各组无明显差异；血液学检查、血液生化学检查、主要脏器组织学检查，未发现明显的毒性反应发生。提示金边蚂蟥提取物对大鼠灌胃给药安全剂量是1.0 g/kg体重。结论按此剂量应用应是安全的。

金边蚂蟥；提取物；大鼠亚急性毒性试验

Phnom Penh contained in the Guangxi Zhuang Autonomous Region medicinal leech standard in second volumes.The test results of subacute toxicity experiments are reported for the first time in Phnom Penh leech and reference for clinical and experimental research.Methods Phnom Penh leech exteact at the dose of 1.0 g/kg/d、0.5 g/kg/d were given to rats by gastric perfusion (Respectively is equivalent to clinical decodes daily dose of 0.01 g/kg/d 100 times,50 times ), for a month.Results No abnormal behavior and the appearance of the animal signs,each animal feed consumption had no significant difference; the weight growth is normal,there was no significant difference between groups;hematological examination,blood biochemistry examination,main organs,found no significant toxicity.Phnom Penh leech extract on rats intragastric administration of safe dose is 1 g/kg (weight). Conclusion the dosage should be safe.

1 背 景

金边蚂蟥的基原菲牛蛭（Hirudinaria manillensis Lesson）隶属无吻蛭目，是一种珍贵的医用水蛭。有破血通经逐瘀消癥之功效，用于血瘀经闭，癥瘕痞诀，中风偏瘫。未见有关金边蚂蟥亚急性毒性试验的文献报道，本实验考察连续重复给药对动物所产生的毒性反应及其严重程度，实验结果可供临床及实验研究参考。（金边蚂蟥提取物由南宁市净雪皇生物工程有限公司提供）

试验目的：考察本品连续重复给药对动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药提供参考。

受试物：金边蚂蟥提取物，批号：20140910，抗凝血活性为4000 ATU/g。设临床日剂量为金边蚂蟥提取物0.6 g（2400 ATU）/d，即0.01 g（40 atu）/kg/d。金边蚂蟥提取物为棕灰色粉末，临用時以蒸馏水配成溶液供试验用。

受试物的制备：取广西南宁市郊所产金边蚂蟥，水洗净，匀浆，以10倍及8倍水提取两次，分别提取2 h及1 h，取水提液，加少量淀粉后冷凍干燥即得金边蚂蟥提取物。按抗凝血活性计，金边蚂蟥提取物毎g相当于原生药材18.2 g。

试验剂量设计:经预试，设定大鼠ig剂量为1.0 g/kg、0.5 g/kg金边蚂蟥提取物，相当于临床拟用日剂量的100倍、50倍。连续ig1个月。

试验动物：Wistar雌雄大白鼠，普通级，广西医科大学实验动物室提供（SCXK桂2009-0002），每笼10只，喂标准颗粒料，实验室温度（23±2）℃，相对湿度（70±5）%。

2 试验方法

选取健康雌性大白鼠60只（雌雄各半），体重180～300 g，随机分为3个组，每组20只。给药方法模拟本品临床给药途径（口服），采用灌胃给药，每天一次，每次20 ml/kg体重。剂量设置分别为临床日剂量的100倍、50倍，即1 g/kg/日、0.5 g/kg/日2个剂量组。另设对照组给水。药后每周称一次体重，按体重调整给药量。给药期间观察动物进食、活动、粪便等一般表现及毒性反应情况。给药满1个月时，末次药后第二天，每组处死10只大鼠，取血检测血液学和血液生化学指标。用BC1800型全自动血细胞分析仪测血液学指标；用罗氏7600型全自动生化分析仪测定血液生化学指标。并取各动物的主要脏器称重，计算每100 g体重相应脏器系数。同时留取各动物的主要脏器作病理组织学检查。剩余动物停药观察2周按同样方法检测上述指标。各给药组测定值与蒸馏水组比较，用t值法或校正t值法进行统计学分析，测定结果综合评价药物的安全性。

试验周期：亚急性毒性试验时间为1个月（恢复期停药观察2周）。

3 观察指标

3.1 一般表现

外观体征、行为活动、腺体分泌、呼吸、粪便、饲料日消耗量、体重、给药局部反应等。

3.2 血液学指标

红细胞计数（RBC）、红细胞压积（HCT）、平均红细胞容积（MCV）、血红蛋白（HB）、平均红细胞血红蛋白（MCHC）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCH）、网织红细胞计数（RC）、血小板计数（PLT）、白细胞计数（WBC）及其分类：淋巴细胞（LYM）、单核细胞（MID）、粒细胞（Gran）、凝血酶原时间（PT）。

3.3 生化学指标

谷丙转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）、血清总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血清总胆红素（TBIL）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、总胆固醇（CHOL）、碱性磷酸酶（ALP）、葡萄糖（GLU）、甘油三脂（TG）、肌酸磷酸激酶（CK）。

3.4 病理组织学检查

主要脏器心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、大肠、肾上腺、胸腺、子宫卵巢、睾丸的肉眼和组织学检查。并对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、子宫、卵巢、睾丸称重，计算其脏器系数（脏器重量/体重）。

4 试验结果

4.1 一般情况

给药组动物的外观体征、腺体分泌、呼吸、粪便、饲料日消耗量、给药局部反应等均未见异常。饲料日消耗量随体重增长而增加，随体重增大和时间的延长而趋于稳定或减少（高剂量组平均（14.9±2.1）g/只/日、低剂量组平均（15.4±2.0）g/只/日）。给药组体重增长正常（表1）。

4.2 血液学检查

给药1个月和停药2周，给药组指标在正常值范围。凝血酶原时间PT（秒）有延长。见表2。

4.3 血液生化学检查

给药1个月及停药2周，各检测值给药组指标在正常值范围。对照组血清总蛋白（TP）、甘油三脂TG（mmol/L）、总胆固醇CHOL（mmol/L）均有所降低；但都尚在正常范围內。见表3。

表1 金边蚂蟥提取物1个月大鼠体重增长情况（s，g）

表1 金边蚂蟥提取物1个月大鼠体重增长情况（s，g）

组别 药前体重 药后体重增加值1 W 2 W 3 W 4 W 停药2周高剂量 237±63 25±10 59±20 66±28 87±22 102±29低剂量 242±70 28±9 61±18 76±23 95±15 110±32对照组 241±61 29±11 63±21 76±29 93±25 107±33

表2 金边蚂蟥提取物血液学测定值（s）

表2 金边蚂蟥提取物血液学测定值（s）

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续表2.1

续表2.2

表3 金边蚂蟥提取物大鼠血液生化测定值（s）

表3 金边蚂蟥提取物大鼠血液生化测定值（s）

组 别 T-P（g/L） ALB（g/L） TBIL（umol/L） ALT（u/L） CK（u/L）高剂量 76.4±4.0 31.1±3.9 3.20±0.35 44.5±4.0 139±22给药结束 低剂量 79.0±3.5 34.5±4.3 3.69±0.36 44.8±8.9 142±40对照组 82.3±4.6 33.7±4.9 3.69±0.36 44.8±8.9 142±40高剂量 75.9±4.6 40.1±3.0 3.80±0.17 52.5±15.1 138±16恢复期 低剂量 74.5±3.5 38.0±2.2 3.42±0.27 50.2±12.2 139±42对照组 80.6±4.2 39.1±2.9 3.53±0.31 50.9±14.4 141±39

续表3.1

续表3.2

4.4 脏器系数检查

给药1个月及停药后2周，给药组大鼠的脏器系数差异无显著性意义。见表4。

4.5 主要脏器的病理组织学检查

未见因药物毒性引起的病理改变。

5 结 语

金边蚂蟥收于广西壮族自治区药材标准第二卷，原药材金边蚂蟥含量测定项规定抗凝血活性不低于220 atu/g。本金边蚂蟥提取物分别以1.0及0.5 g/kg/d（分别相当于临床拟用日剂量40 atu/kg/d的100倍、50倍）给大鼠灌胃给药，连续1个月。结果给药组外观体征、腺体分泌、呼吸、粪便、饲料日消耗量、给药局部反应等均未见异常。饲料日消耗量随体重增长而增加，随体重增大和时间的延长而趋于稳定或减少。给药组体重增长正常，血常规及血液生化检查、主要脏器的病理组织学检查，均未见因药物毒性引起的明显改变。以上结果提示金边蚂蟥提取物对大鼠灌胃给药的安全剂量是1 g药材/kg。

表4 金边蚂蟥提取物大鼠主要脏器系数值（s，g/100 g体重）

表4 金边蚂蟥提取物大鼠主要脏器系数值（s，g/100 g体重）

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续表4.1

[1] 广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准第二卷[C].2011.12.

[2] 国家食品药品监督管理局.中药、天然药物长期毒性试验技术指导原则[M].2005.

[3] 中华人民共和国卫生部药政管理局.新药(中药)临床前研究指导原则[M].1993.

[4] 袁伯俊,王治乔.新药临床前安全性评价与实践[M].北京:军事医学科学出版社,1997:24.

本文编辑：吴 卫

S948

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ISSN.2095-8242.2017.14.2759.03