中国沙棘与丰宁雄叶中芦丁含量的比较

张洋洋，杨雪芳，王斌，张琼姝，郭海利，张小民

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

中国沙棘与丰宁雄叶中芦丁含量的比较

张洋洋1，杨雪芳1，王斌1，张琼姝1，郭海利2，张小民1

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

试验利用高效液相色谱法测定不同月份中国沙棘（雄）与丰宁雄叶中芦丁含量，所用的色谱柱为Diamonsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm，柱温是30℃。结果表明，中国沙棘♂叶中芦丁含量在4—11月依次为0.317，0.492，0.424，0.897，0.981，0.387，1.462，0.441 mg/g；丰宁雄叶中芦丁含量在4—11月依次为0.394，0.557，0.719，0.770，0.540，0.869，0.722，0.855 mg/g。通过比较2个品种的芦丁含量，可为沙棘叶采摘时间的确定以及进一步有效开发和利用提供依据。

高效液相色谱法；中国沙棘（雄）叶；丰宁雄叶；芦丁

沙棘（Hippophae rhamnoides L.）又名醋柳、酸刺，是胡颓子科沙棘属的一种生态幅度广、适应能力强的落叶浆果灌木或小乔木，雌雄异株[1]。就种植规模而言，山西省的野生沙棘面积约占全国的1/2，位居首位，主要分布在右玉苍头河流域、五台山区、太岳山区、芦芽山、云中山区、吕梁山中部和吕梁山南部。据保守估计，山西省沙棘总面积达到13万hm2以上[2]，主要品种为中国沙棘亚种。

丰宁雄的原始材料来源于河北省丰宁县，在辽宁省阜新县做无刺株系的无性系测定，后经选育而确定为比较稳定的中国沙棘无刺雄无性系。该品种为中国沙棘亚种的良种，可作沙棘造林的配伍雄株，也是营造饲用沙棘林的理想栽植材料，其适用范围为中国沙棘的全分布区。目前，其在新疆北疆、甘肃、内蒙古、北京、辽宁等地试种，均表现良好[3]。

目前，研究沙棘叶化学成分的文章较多，刘洪章[4]利用HPLC对沙棘中总黄酮及主要黄酮类成分异鼠李素、槲皮素、山奈酚和香豆素、齐墩果酸进行了定性、定量研究；陈海芳[5]对沙棘叶中总黄酮进行提取并确定其化学成分；刘锡建等[6]利用HPLC对沙棘叶中的异鼠李素和槲皮素进行测定；翁佳燕等[7]用HPLC法测定沙棘叶的黄酮配基含量；张益娜[8]对沙棘叶中总黄酮进行提取及测量；付文婷[9]利用HPLC法分离、鉴定了沙棘中熊果酸、齐墩果酸和异鼠李素等10种化合物；赵二劳等[10]测定了沙棘叶中绿原酸和芦丁的含量；郁长治等[11]利用HPLC法同时测定沙棘叶中槲皮素、山奈素、异鼠李素含量；李敏等[12]通过HPLC法同时测定中亚沙棘中的原儿茶酸、芦丁和异鼠李素的含量；李德鑫等[13]利用HPLC法初步测定了沙棘颗粒中的芦丁含量；安乐等[14]利用HPLC法研究沙棘叶中总黄酮的提取纯化工艺；李淑珍等[15]利用分光光度法测定了沙棘叶中总黄酮的含量。但通过高效液相色谱法对不同月份的中国沙棘叶及丰宁雄叶中芦丁含量的比较尚未见报道。

本试验用高效液相色谱法测定不同月份中国沙棘叶及丰宁雄叶中芦丁的含量，并进行2个品种芦丁含量的比较，旨在为进一步开发利用沙棘以及种植推广提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

供试材料中国沙棘叶（雄）于2015年采自山西省祁县来远镇，丰宁雄叶、杂优2号沙棘叶于2015年采自山西省太谷县，将其置干燥箱60℃干燥后粉碎备用。

1.2 仪器

岛津SPD-15C高效液相色谱仪（日本，岛津公司）；N-3000色谱工作站（浙江大学）；BG-01超声波清洗机（广州邦洁超声波设备有限公司）；循环真空水泵（SHZ-D（III）型，上海楚柏实验室）；电子分析天平（上海电平仪器厂）；Heal Force SMART-N超纯水机（上海康雷分析仪器有限公司）

1.3 试剂

芦丁对照品（购买自国家标准物质网）；甲醇为色谱纯（天津市大茂化学试剂厂）；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.4 方法

1.4.1 色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱（150mm× 4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇-0.5%磷酸（33∶67），流速为1.0 mL/min，检测波长254 nm，柱温是30℃。进样量20 μL，进样前经0.22 μm的针头过滤器过滤。

1.4.2 溶液的配制

1.4.2.1 标准品溶液的配制准确称取干燥至恒质量的芦丁标准品31.25 mg，加甲醇适量，超声溶解后冷却，置于25 mL容量瓶中，定容，摇匀，即得标准品溶液。在1.4.1色谱条件下，测得的芦丁标准品色谱如图1所示。

1.4.2.2 供试样品的配制准确称取中国沙棘叶（雄）及丰宁雄干叶粉末各5 g，置50 mL具塞锥形瓶内，准确加入甲醇50 mL，称质量，超声波辅助提取40 min（功率80 W，频率40 kHz），待其冷却至室温，再称其质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，过滤，取滤液。测定时再取适量滤液，经0.22 μm有机微孔滤膜过滤，取滤液各自备用，即得16种供试样品。

2 结果与分析

2.1 线性关系的考察

分别准确吸取芦丁对照品溶液1，5，10，15，20 μL。在1.4.1色谱条件下，分别注入液相色谱仪测定。以芦丁的进样量（X，μg）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，得到回归方程为：Y＝1.0×106X（r＝0.992 4，n＝5），结果表明，对照品进样量在0.25～5 μg时，芦丁进样量与峰面积呈现良好的线性关系（图2）。

2.2 精密度试验

分别准确吸取1.25 μg/mL芦丁标准溶液各20 μL，重复进样5次，结果表明，芦丁峰面积的RSD为1.37%（n＝5），精密度较好。

2.3 稳定性试验

取中国沙棘（雄）9月的供试样品，分别于0，2，4，6，8，12 h进样，在1.4.1条件下测定，确定试液的稳定性。结果表明，芦丁峰面积的RSD为1.12%（n＝6），中国沙棘叶供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4 重复性试验

取杂优2号沙棘叶9月的供试样品5份，每份约5 g，按1.4.2.2的方法制备样品溶液，在1.4.1色谱条件下分别进样测定，以测试其稳定性。结果表明，RSD为1.43%，重现性良好。

2.5 加样回收试验

准确称取已知芦丁含量的供试品粉末5份，每份约5 g，分别置于50 mL具塞锥形瓶中，分别加入1 mL浓度为1.25 mg/mL的芦丁对照品溶液，按照1.4.2.2供试品溶液的制备方案制备成5份供试液，在1.4.1色谱条件下测定，结果表明，测得的平均回收率为97.56%，RSD为0.94%，回收结果良好（表1）。

表1 沙棘叶芦丁回收率测定结果

2.6 样品含量测定

取不同月份的中国沙棘（雄）叶和丰宁雄叶在1.4.2.2的方法下制备好供试样品，分别进样20 μL，按照1.4.1色谱条件测定峰面积，计算样品中芦丁的含量。

从图3可以看出，中国沙棘♂叶中各月份芦丁含量差异较大，芦丁最低值为0.317 mg/g，最高值为1.462 mg/g，即在4月26日中国沙棘♂叶中芦丁含量最低，在10月16日中国沙棘♂叶中芦丁含量最高，为何时采摘、提取中国沙棘♂叶获得最高含量的芦丁提供参考。同时，9月12日中国沙棘♂叶芦丁含量为0.387 mg/g，即中国沙棘♂叶芦丁含量为0.146 6%，对比赵二劳等[10]通过高效液相色谱法所测定的忻州市宁武县同样质量下的野生中国沙棘芦丁含量为0.14%，其芦丁含量基本一致。

由图4可知，丰宁雄叶各月份芦丁含量虽有变化，但与中国沙棘♂叶相比，各月份芦丁含量变化较小，最低值为0.394 mg/g，最高值为0.869 mg/g，即在4月16日丰宁雄叶中芦丁含量最低，在9月12日丰宁雄叶中芦丁含量最高，为何时采摘、提取丰宁雄叶获得最高含量的芦丁提供参考。

通过比较图3，4可知，11月3日中国沙棘♂叶芦丁含量为0.441 mg/g，丰宁雄叶为0.855 mg/g。落叶中芦丁含量丰宁雄叶远高于中国沙棘♂叶，几乎为中国沙棘♂叶的1倍，分析原因可能是由于丰宁雄是中国沙棘♂的良种，加上丰宁雄地处开阔，通风、日照情况较好，落叶干燥较快，但其具体原因还有待进一步考察。

3 讨论

目前，对于沙棘叶总黄酮量的测定研究较多，最初有化学方法，如肖蓉等[16]根据黄酮类化合物与金属离子形成稳定的呈色螯合物这一性质，从而测定沙棘中总黄酮含量。此后，采用分光光度法进行测定，如付桂香等[17]根据黄酮类化合物与铝离子在甲醇中形成稳定的呈色螯合物这一性质，采用分光光度计测定沙棘中总黄酮含量。随后，付桂香等[18]运用高效液相色谱法测定沙棘中芦丁、槲皮素、异鼠李素的含量，为以后的芦丁含量测定提供技术参考。随后，通过超声波法、搅拌法和回流法提取沙棘中的黄酮，如刘树英等[19]通过这3种方法测定沙棘叶中的总黄酮量。但是通过高效液相色谱法测定野生中国沙棘及丰宁雄叶中各月份芦丁含量并进行比较尚未见报道。

芦丁是一种具有代表性的黄酮类化合物，有降低毛细血管通透性和脆性的作用，保持及恢复毛细血管的正常弹性，同时具有抗炎、抗病毒、抑制醛糖还原酶的作用，可用于防治高血压脑溢血，糖尿病视网膜出血和出血性紫癜等，也用作食品抗氧化剂和色素。

沙棘作为食药两用植物，具有较高的食用及药用价值，且沙棘中黄酮含量较高，富集于叶中，所以，本研究首次采用高效液相色谱法测定了山西野生中国沙棘（雄）叶及其良种丰宁雄叶中芦丁的含量，并进行2个品种间的芦丁含量比较，为进一步开发利用沙棘及种植推广提供参考。

综上所述，中国沙棘雄叶在10月16日芦丁含量最高，为1.462 mg/g，丰宁雄叶在9月12日芦丁含量最高，为0.869 mg/g，中国沙棘雄叶芦丁含量的最大值高于丰宁雄叶。但是丰宁雄作为中国沙棘♂的良种，通过观察可以得出，11月3日中国沙棘♂落叶的芦丁含量为0.441 mg/g，丰宁雄落叶为0.855 mg/g，并且各月份丰宁雄叶中芦丁含量变化较小，落叶中芦丁含量远高于中国沙棘♂叶，芦丁含量损失较少，为以后沙棘品种推广以及沙棘叶中芦丁的提取提供理论依据。

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《山西农业科学》编辑部

Comparison of Rutin Content in Chinese Seabuckthorn and Fengningxiong Leaves

ZHANGYangyang1，YANGXuefang1，WANGBin1，ZHANGQiongshu1，GUOHaili2，ZHANGXiaomin1
（1.College ofLife Science，Shanxi University，Taiyuan 030006，China；2.Shanxi Jinkehai Biological TechnologyCo.,Ltd.，Taiyuan 030006，China）

HPLC method was used to determine the content of rutin in Chinese seabuckthorn（male）leaves and Fengningxiong leaves in different months,and compare the results.The column was a Diamonsil C18column（150 mm×4.6 mm,5μm）,the mobile phase consisted ofmethanol-0.5%phosphoric acid（33∶67）,the flowrate was 1.0 mL/min,the detection wavelength was 254 nm,and the column temperature was 30℃.The result showed that the content of rutin in leaves of China seabuckthorn from April to November were 0.317,0.492,0.424,0.897,0.981,0.387,1.462,0.441 mg/g,respectively.Rutin content of Fengningxiong leaves from April to November were 0.394,0.557,0.719,0.770,0.540,0.869,0.722,0.855 mg/g,respectively.By comparing the rutin content of 2 varieties, it can provide the basis for the determination ofthe harvest time and the further development and utilization ofseabuckthorn leaves.

HPLC;Chinese seabuckthorn（male）leaves;Fengningxiongleaves;rutin

10.3969/j.issn.1002-2481.2017.05.13

S793.6

：A

：1002-2481（2017）05-0725-04

2016-11-29

张洋洋（1991-），男，河北辛集人，在读硕士，研究方向：植物化学与药理。张小民为通信作者。