免疫球蛋白含量的检测与分离技术探讨

王 娟,焦小杰

免疫球蛋白含量的检测与分离技术探讨

王 娟1,焦小杰2

目的 探讨免疫球蛋白含量的检测与分离技术。方法 选取武警北京总队医院2013-10至2016-10收集的90份免疫球蛋白异常血清，运用单扩法对血清IgG含量进行检测，将90份血清分为3组，每组30份，分别运用单扩法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法对血清IgG、IgA、IgM含量进行检测，然后对3种检测方法测定IgG、IgA、IgM的异常情况、免疫球蛋白含量进行统计分析。结果 单扩法测定IgG、IgA、IgM的异常率分别为22.6%、12.4%、7.9%；免疫散射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率分别为20.3%、14.0%、9.2%；免疫透射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率分别为8.0%、1.5%、6.2%。单扩法、免疫透射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率均显著高于免疫透射比浊法(P<0.05)，但单扩法、免疫散射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率之间的差异均无统计学意义；单扩法、免疫散射比浊法测定IgA、IgM含量均显著高于免疫透射比浊法(P<0.05)，而免疫散射比浊法测定IgA、IgM含量又均显著高于单扩法(P<0.05)，但3种检测方法测定IgG含量之间的差异均无统计学意义。结论 单扩法、免疫透射比浊法测定免疫球蛋白含量效果较免疫透射比浊法好。

免疫球蛋白；含量；检测与分离技术

免疫球蛋白(Ig)具有抗体活性，同时能够结合相应的抗原发生特异性反应[1]。迄今为止，临床共有5种免疫球蛋白，即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE[2]。免疫球蛋白检测，指将免疫球蛋白各个成分的含量检测出来，在此过程中将一定的技术充分利用起来；免疫球蛋白分离，指将免疫球蛋白从血液中提取出来，在此过程中严格依据蛋白质的分子大小、免疫学特征等因素[3]。本研究探究免疫球蛋白含量的检测与分离技术。

1 材料与方法

1.1 材料 选取武警北京总队医院2013-10至2016-10收集的90份免疫球蛋白异常血清，在-20 ℃的温度下保存备检。购买重庆医学院试剂研究所提供的彩扩板(批号：20050709)、意大利ARCO公司生产的全自动生化分析仪(BT-2245型)、伊利康生物技术有限公司生产的免疫透射比做法试剂(批号：20050217)。

1.2 方法

1.2.1 检测技术 将90份血清分为3组，每组30份，分别运用单扩法、免疫散射比浊法、免疫透射比浊法对血清IgG、IgA、IgM含量进行检测。IgG、IgA、IgM的参考范围分别为(12.87±1.35)g/L、(2.35±0.34)g/L、(1.08±0.24)g/L[4]。

1.2.2 分离技术 应用硫酸铵盐试剂、进行盐析法，应用乙醇试剂、进行有机溶剂沉淀法对免疫球蛋白进行分离。

2 结 果

2.1 IgG、IgA、IgM测定异常情况比较 单扩法、免疫透射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率均显著高于免疫透射比浊法(P<0.05)，但单扩法、免疫散射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率之间的差异均无统计学意义。见表1。

表1 3种检测方法测定IgG、IgA、IgM的异常率比较 (%)

2.2 免疫球蛋白测定含量比较 单扩法、免疫散射比浊法测定IgA、IgM含量均高于免疫透射比浊法(P<0.05)，而免疫散射比浊法测定IgA、IgM含量又均高于单扩法(P<0.05)，但3种检测方法测定IgG含量之间的差异均无统计学意义，见表2。

表2 3种检测方法测定免疫球蛋白含量比较 (g/L；±s)

3 讨 论

临床在诊断多种疾病、观察期疗效、评定其预后的过程中通常将免疫球蛋白的检测作为重要指标，尤其是骨髓瘤患者，这是因为不同病因和病程发展患者的免疫球蛋白含量之间的差异均有统计学意义[5]。本研究表明，单扩法、免疫透射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率均高于免疫透射比浊法，但单扩法、免疫散射比浊法测定IgG、IgA、IgM的异常率之间的差异均无统计学意义，说明在IgG、IgA、IgM的检测中，免疫透射比浊法较单扩法、免疫散射比浊法值小。本研究还表明，单扩法、免疫散射比浊法测定IgA、IgM含量均显著高于免疫透射比浊法，而免疫散射比浊法测定IgA、IgM含量又均显著高于单扩法，但3种检测方法测定IgG含量之间的差异均无统计学意义，说明在IgA、IgM的检测中，免疫透射比浊法具有较大的误差，发生这一现象的原因可能是：(1)可溶性复合物在抗原或抗体过剩的情况下出现，引发测量误差；(2)血脂浓度对其造成了直接而深刻的影响，特别是脂蛋白的小颗粒在低稀释的情况下会有浊度形成，进而提升测量假性[6-8]。

盐析法进行的前提为将抗体和杂质对盐浓度的敏感性的不同充分利用起来，将一定范围的盐溶液浓度选取出来，使一些杂质、抗体成分分别处于沉淀、溶解状态[9]。盐析常数、pH等很多因素均会对盐析法的分离结果造成直接而深刻的影响，如果蛋白质具有较好的分离效果，那么通常情况下其就会具有极大的盐析常数，同时具有显著较大的盐析范围，而如果蛋白质具有较差的分离效果，那么通常情况下其就会具有极小的盐析常数，同时具有显著较小的盐析范围[10-12]。在蛋白质剂的生产过程中，有机溶剂沉淀法得到了极为广泛的应用，乙醇是最常用的有机溶剂[13]。现阶段，在国际范围内，在对免疫球蛋白进行提取的过程中，低温乙醇Cohn6法是临床通常采用的冷乙醇分离法，用来对IgG进行制备[14-16]。运用低温乙醇法能够分血清蛋白为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ六个组分，其中Ⅱ、Ⅲ组分中主要分布着免疫球蛋白IgG，Ⅴ组分中主要分布着白蛋白[17]。

总之，单扩法、免疫透射比浊法测定免疫球蛋白含量效果较免疫透射比浊法好，值得在临床推广。

[1] 张晓晖.60例多发性骨髓瘤免疫固定电泳及免疫球蛋白分析[J].现代中西医结合杂志，2012,21(6):608-609.

[2] 张 慧，周莉莉，李 荣，等.免疫球蛋白重/轻链检测在IgG型多发性骨髓瘤患者微小残留病监测中的作用[J].中华血液学杂志，2015,36(2):95-98.

[3] 张小杰，周 健.免疫固定电泳技术在多发性骨髓瘤诊断中的应用[J].中国实用医刊，2013,40(14):71-73.

[4] 柏丹丹，李红卫，潘莉莉，等.荧光高效液相色谱法测定血清中总唾液酸含量的分析[J]. 中国儿童保健杂志，2012，20(11)1022-1025.

[5] 阳 洋,苏梦宁,杨如意.母婴血清和母乳中免疫球蛋白含量的检测分析与检验学研究[J].中华医学检验杂志,2015,38(1):68-69.

[6] 满江红,吴俊贵,苏 畅.母亲和婴儿血清与母乳中免疫球蛋白含量分析与临床检验学研究[J].中华医学检验杂志,2015,38(2):91-93.

[7] 江 山,苏 宁,阳 洋.母婴血清和母乳中免疫球蛋白含量的检测与临床意义[J].国外医学,临床生物化学与检验学分册,2015,36(3):178-182.

[8] 熊 政,崔玉波,田玉旺.提高细胞化学染色的方法与应用[J].医学研究通讯,2014,42(1):33-36.

[9] 王 燕,高惠红,王海鹰,等.临床细菌检验与预防医院感染[J].标记免疫分析与临床,2015,22(2):21-22.

[10] 熊 政.免疫组织化学中抗原修复的研究进展[J].中华病理学杂志,2015,44(1):42-44.

[11] 李金明,郑怀竞.临床ELISA试剂盒的选用和质检[J].临床检验信息导报,2015,22(2):57-58.

[12] 李健斋.血液载脂蛋白免疫测定及其标准化问题[J].中华医学检验杂志,2014,37(4):253-255.

[13] Bendo L,Casanova M,Figueira A C,etal.Nanostructured sensors containing immobilized nuclear receptors for thyroid hormone detection[J]. J Biomed Nanotechnol, 2014, 10 (5):744-750.

[14] Heinrich J. Huber, Paul Holvoet.Exosomes: emerging roles in communication between blood cells and vascular tissues during atherosclerosis[J].Current Opinion in Lipidology, 2015, 26 (5):412-419.

[15] Maria Giovanna Danieli，Federica Pulvirenti, Valeria Rocchi,etal.Self-administered hyaluronidase-facilitated subcutaneous immunoglobulin therapy in complicated primary antibody deficiencies[J].Immunotherapy, 2016, 8 (9):995-1002.

[16] Carne E,Ponsford M,ElShanawany,etal.Five years of self-administered hyaluronidase facilitated subcutaneous immunoglobulin (fSCIg) home therapy in a patient with primary immunodeficiency[J].J Clin Pathol, 2016, 69 (1):87-88.

[17] Raja J,Nihtyanova S I,Murray C D,etal.Sustained benefit from intravenous immunoglobulin therapy for gastrointestinal involvement in systemic sclerosis[J].Rheum, 2016, 55 (1):115-119.

(2016-09-20收稿 2017-02-10修回)

(责任编辑 岳建华)

Detection of immunoglobulin contents and separation technology

WANG Juan1and JIAO Xiaojie2.

1.Department of Clinical Laboratory, Beijing Municipal Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100027, China;2.Department of Clinical Laboratory, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Force, Beijing 100039, China

Objective To explore the detection methods of contents of immunoglobulin and separation technology.Methods Ninety cases of abnormal serum immunoglobulin treated in our hospital between October 2013 and October 2016 were collected and their serum samples were equally divided into three groups. The contents of IgG, IgA and IgM were detected by the immunodiffusion method, immune nephelometry method, and immune turbidimetric method respectively, while the abnormalities of IgG, IgA, IgM, and the content of immuneglobulin determined with the three detection methods were statistically analyzed.Results The abnormal rates of IgG, IgA and IgM by immunodiffusion method were 22.6%, 12.4% and 7.9% respectively, those by immune nephelometry method were 20.3%, 14% and 9.2% respectively, and those by immune turbidimetric method were 8%, 1.5% and 6.2% respectively.The abnormal rates of IgG, IgA and IgM detected by the single diffusion method and immune turbidimetric method were significantly higher than those by the immune turbidimetric method (P<0.05), but the difference of the abnormal rates of IgG, IgA and IgM between the single expansion method and immunoturbidimetry determination was not significant. The IgA, IgM contents detected by the single expansion method and immune turbidimetric method were significantly higher than those by the immune turbidimetric method (P<0.05), and the IgA and IgM contents detected by the immune nephelometry method were significantly higher than those by the single expansion method (P<0.05), but the difference of IgG contents between the three detection methods was not significant.Conclusions The effect of single expansion method and immune transmission turbidity method is better than that of immune transmission turbidity method.

immunoglobulin; content; detection and separation technology

王 娟,本科学历,技师。

1.100027，武警北京总队医院检验科；2.100039 北京，武警总医院检验科

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