高效液相色谱法测定不同烤烟品种中绿原酸的含量

张伟娜　刘勇　庞立峰　朱先志　刘莉　王希玲　徐蕊　高强

摘要：该文采用高效液相色谱法对5个不同烤烟品种中绿原酸含量进行测定。结果表明：使用高效液相色谱法测定不同烤烟品种中绿原酸的含量，精密度好，平均回收率高。各品种中绿原酸含量差异较大，叶片中绿原酸含量的分布范围4.7～9.3mg/g，花中绿原酸含量的分布范围5.3～12.4mg/g。烤烟中绿原酸含量在不同品种不同部位间含量分布有差异，高效液相色谱法简便、快速、准确，可用于烤烟中绿原酸含量的测定。

关键词：高效液相色谱法；烤烟；绿原酸；品种

绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸形成的酯，具有清除体内自由基、抗氧化、抗病毒、抗菌消炎、降血脂和保肝利胆等多种功效。茄科烟属植物烤烟中富含绿原酸类化合物。但不同品种以及不同部位的烤烟中绿原酸含量差异较大。本文采用高效液相色谱法（以下简称HPLC法）对5个烤烟品种中绿原酸含量进行分析，为不同烤烟品种中绿原酸含量的测定及分离、纯化提供参考，为烤烟资源的进一步综合开发利用提供依据。

1.材料与方法

1.1仪器与试剂 仪器：KQ-100DE型数控超声波清洗器；Agilent1100组合式高效液相色谱仪；ALC-1104电子天平。试剂：绿原酸标准品，乙腈为色谱纯，乙醇、磷酸为分析纯。

1.2试验材料 5个烤烟品种：NC89、NC196、豫烟6号、鲁烟1号、韭菜坪2号，分别于2015年采于山东省临沂市沂水烟叶试验站。洗净后低温烘干，备用。

1.3色谱条件 Ultimate AQ-C18（250mm×4.6mm，5um）色谱柱；流动相为25%甲醇+75%磷酸氢二钠缓冲溶液（pH4.0）；流速1.0mL/min；柱温30℃；进样量20uL；检测波长326nm。

1.4溶液制备 标准溶液制备：称取绿原酸标准品0.02g，用95%乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶，作为原液，摇匀备用。再分别稀释到0.08mg/mL、0.05mg/mL、0.03mg/mL、0.005mg/mL。待测液制备：称取烤烟粉末1.0g，加入60%乙醇10 mL，超声波辅助提取65min，作为样品待测液。

2.结果与分析

2.1HPLC法测定绿原酸的稳定性考察 将一系列不同浓度的标准品溶液按色谱条件进行分析，建立线性回归方程为y=61302x-158.79，相关系数r=0.9999。表明绿原酸在0.05-0.2mg/mL范围内呈良好的线性关系。取0.05-0.2mg/mL的绿原酸标准品溶液，每隔2h进样，测定标准品峰面积，结果表明绿原酸标准品的峰面积在24h内稳定。

2.2HPLC法测定绿原酸的精密度考察 HPLC法测定绿原酸的精密度考察見表1。测定其峰面积RSD为0.13%，结果表明HPLC法测定绿原酸含量精密度良好。

2.3HPLC法测定绿原酸的加样回收率考察 PLC法测定绿原酸的加样回收率考察见表2。在样品中分别加入一定浓度的绿原酸标准品溶液，分别计算加样回收率，绿原酸的平均回收率为98.54%。

2.4样品含量的测定 分别称取5个烤烟品种叶片和花粉末，按“1.4”的方法制备样液，对5个烤烟品种的叶片和花中绿原酸含量的测定，结果见表3。结果表明，各品种含量差异较大，花中绿原酸含量明显高于叶片中绿原酸含量。叶片中绿原酸含量的分布范围4.7-9.3mg/g，花中绿原酸含量的分布范围5.3-12.4mg，g，其中鲁烟1号中绿原酸含量最高，叶片中含量9.3mg/g，花中绿原酸含量为12.4mg/g。NCl96中绿原酸含量最低，叶片中含量4.7mg/g，花中绿原酸含量为5.3mg/g。

总之不同品种及不同部位的烤烟中活性成分-绿原酸含量的分布范围是4.7-12.4mg/g，差异较大。使用该高效液相色谱法测定不同烤烟品种中绿原酸的含量，简便、快速、准确，可用于烤烟中绿原酸含量的测定。