针刺“足三里”穴干预胃肠功能紊乱-腹泻模型大鼠胃肠激素GAS、MTL水平的影响

李方高纺

1.温州医科大学附属第一医院 浙江，温州 325000 2.安徽中医药大学省部共建新安医学实验室

针刺“足三里”穴干预胃肠功能紊乱-腹泻模型大鼠胃肠激素GAS、MTL水平的影响

李方1高纺2

1.温州医科大学附属第一医院 浙江，温州 325000 2.安徽中医药大学省部共建新安医学实验室

[目的］探讨针刺足三里穴治疗胃肠功能紊乱-腹泻（functional gastrointestinal disorders-diarrhea，FGIDs-D）的机制。［方法］将40只大鼠分为正常对照组、模型组、足三里组（针刺双侧足三里）、非经非穴组（针刺大鼠臀部两处非经非穴点），每组各10只。采用寒冷-束缚、饥饱失常综合法复制FGIDs-D动物模型。采用放免方法观察各组大鼠血清及胃组织中胃泌素(Gastrin,GAS)、胃动素（Motilin,MTL）的含量。［结果］与正常组比较，模型组大鼠血清及胃组织中GAS、MTL的含量显著降低,差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，足三里组大鼠血清及胃组织中GAS、MTL的含量显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）；与非经非穴组比较，足三里组大鼠血清及胃组织中GAS、MTL的含量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。［结论］针刺足三里穴对FGIDs-D具有明显的改善作用，其作用机制与GAS、MTL有密切关系。

胃肠功能紊乱；腹泻；足三里；针刺；GAS；MTL；机制

刺足三里穴治疗FGIDs-D的作用机制，同时为临床治疗提供更好的选穴依据。

1 实验材料

胃肠功能紊乱（functional gastrointestinal disorders, FGIDs）又称胃肠神经官能症，是一组胃肠综合征的总称，主要包括功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)、肠易激综合征(irritable bowel Syndrome，IBS)。胃肠道的发病数在各种脏器的神经官能症中最高,多见于青壮年。而对于其治疗，则给社会、家庭带来巨大的经济压力和负担[1]。另外，目前对本症的发病机制尚无统一认识，其机理则均处于假说阶段，尤其脑-肠之间的联系及相关理论尚不清楚。因此，寻求治疗该病的有效方法及探究该病的发生机制成为医学界的热门话题。本研究以观察针刺足三里穴对胃肠功能紊乱（functional gastrointestinal disorders-diarrhea，FGIDs-D）大鼠血清及胃组织中胃泌素（Gastrin, GAS）、胃动素（Motilin,MTL）含量的影响，来探讨针

1.1 实验动物 选取健康、清洁级SD大鼠40只，雌雄不拘，体质量180-200g，由南京医科大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK(苏)2008-0004。

1.2 主要仪器 XD-20制冰机(宁波新芝)，超纯水机（美国密理博 Milli-Q Refrence）。GAS、MTL放免试剂盒由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。T25高速分散匀浆机（德国 IKA），2-16PK台式高速冷冻离心机（德国 Sigma），MDF-U5386S超低温冰箱(日本三洋)，SN-694B放射免疫γ测量仪（中国科学院上海原子能研究所），PCE-A型程控电针治疗仪（安徽天恒有限公司制）。

1.3 实验药品 水合氯醛（天津市光复精细化工研究所），批号20150403，GAS、MTL放免试剂盒由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。

2 实验方法

2.1 分组与模型复制 40只大鼠随机分为正常对照组、模型组、非经非穴组和足三里组，每组各10只。采用改良寒冷-束缚、饥饱失常综合法复制FGIDs-D动物模型[2]。应用多种刺激方法，使大鼠长期处于应激状态。①束缚敷冰法：用细棉线绑住大鼠的四肢，并固定于小铁笼盖上1h，将棒棒冰置于大鼠腹部，期间密切观察大鼠的生命状态，束缚不宜过紧，待接触的棒棒冰有融化时，移至未融化的另一端。②冰水灌胃法：取出冰箱中冷冻的蒸馏水，待其融化至冰水混合物时，每只大鼠按10mL·kg-1的剂量灌胃。③冰水游泳法：把大鼠放进灌有15cm高度0℃冰水透明玻璃装置中5 h，期间对大鼠实时动态观察，以防大鼠疲倦淹死。④饥饱失常法：逢单日给食，双日禁食，均正常饮水。以上4种方法，3d为1轮，除饥饱失常法每天使用外，其余均与束缚敷冰法交替使用。即第1天束缚敷冰、给食，第2天冰水灌胃、禁食，第3天冰水游泳、给食，刺激6轮共计18天。造模期间，每天密切观察大鼠的一般状况及体质量变化。第18天刺激结束后，①出现便溏，四肢无力,动作迟缓,反应迟钝,毛发失去正常光泽而枯槁、疏散，②模型组体质量在造模前后比较有统计学意义(P＜0.05)，满足①②条件的大鼠作为模型复制成功并纳入实验。除正常对照组外，其他组均造模。模型复制评价成功后，立即针刺，非经非穴组和足三里组连续针刺7天，正常对照组、模型组不予针刺。

2.2 针刺方法 腧穴定位参照《实验针灸学》[3]：足三里穴，后肢膝关节下方，当腓骨小头内约5mm处，直刺进针深度约7mm；非经非穴：选取大鼠臀部非经非穴点两处（臀大肌外上象限内，按文献[3]无经络和穴位处），用Φ0.30×25mm毫针分别各刺入2根，并联连至电针治疗仪。两组刺激参数一致电流均为1.1mA，频率均为2Hz，连续电针20min。约24h 1次，共7次。正常对照组、模型组不予电针。

2.3 观察指标及检测方法 于末次针刺完禁食12h后取血和取胃窦组织一块。用放免法检测血清中GAS、MTL和胃组织中GAS、MTL。（1）血液:经10%水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主动脉取血，置于含有7.5%乙二胺四乙酸二钠和抑肽酶500U·mL-1试管中轻缓混匀，静置 30 min后，4℃，3500r/min离心10min，收集血清，取上清测定，-70℃低温保存。待标本收集完毕，按放免药盒说明严格操作。血样测量值的计算是将血样的放射性记数与标准曲线对比后确定，由自动γ计数仪预编程序，直接给出有关参数,标准曲线及样品浓度。（2）组织:取大鼠胃窦组织一块，放入称量瓶中，称重后加入生理盐水1ml，沸水煮10 min，加0.1moL·L-1醋酸1.0mL，倒入匀浆管中，用离散器匀浆，取上清液0.1mL·L-1Na0H滴定pH至7.4，离心(4℃,4000r/min 20min)，-70℃保存待测激素。

3 结果

3.1 针刺对模型大鼠血清GAS、MTL的影响 与正常对照组比较，模型组大鼠血清中GAS、MTL的含量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，非经非穴组大鼠血清中GAS、MTL的含量变化无统计学意义（P＞0.05），而足三里组是显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与非经非穴组比较，足三里组大鼠血清中GAS、MTL的含量显著升高,差异有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

3.2 针刺对模型大鼠胃组织GAS、MTL的影响 与正常对照组比较，模型组大鼠胃组织中GAS、MTL的含量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，非经非穴组大鼠胃组织中GAS、MTL的含量变化差异无统计学意义（P＞0.05），而足三里组的含量变化显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）；与非经非穴组比较，足三里组大鼠胃组织中GAS、MTL的含量显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。见表2。

4 讨论

祖国医学根据胃肠功能紊乱疾病临床表现，将其归属于“郁证”、“嗳气”、“泄泻”、“便秘”、“胃脘痛”、“腹痛”、“呕吐”等范畴之中。其病位在胃肠，治疗当以针刺足三里穴为主，足三里为足阳明胃经之合穴、胃的下合穴，是治疗胃肠疾病的要穴，具有调理脾胃、通腑导滞等功效，凡一切胃肠疾病，不论虚、实、寒、热之证，都可针灸足三里治疗。在临床实践中，足三里穴为临床应用最广泛的穴位，已有研究表明，针灸足三里穴可以增加白细胞总数，且增强其吞噬能力[4]。另外可提高机体各种特异性和非特异性的免疫力，增强人体防御能力[5]。故本研究选取足三里作为针刺腧穴。

表1 针刺对FGIDs-D模型大鼠血清GAS、MTL的影响（±s，pg·mL-1）Tab.1 Effects of electroacupuncture on levels of serum Motilin and Gastrin in FGIDs-D model rats（±s，pg·mL-1）

表1 针刺对FGIDs-D模型大鼠血清GAS、MTL的影响（±s，pg·mL-1）Tab.1 Effects of electroacupuncture on levels of serum Motilin and Gastrin in FGIDs-D model rats（±s，pg·mL-1）

注：与正常对照组比较，**P＜0.01；与模型组比较，##P＜0.01；与非经非穴组比较，△△P＜0.01。Note:Compared with normal group,**P＜0.01;Compared with model group,##P＜0.01;Compared with non-acupuncture point group,△△P＜0.01.

组别 n GAS MTL正常对照组模型组非经非穴组足三里组10 10 10 10 72.38±6.83 54.09±6.16**56.55±8.59 71.83±8.10##△△478.66±29.27 357.06±44.89**355.46±31.38 491.74±18.18##△△

表2 针刺对FGIDs-D模型大鼠胃组织GAS、MTL的影响（±s,pg·mL-1）Tab.2 Effects of electroacupuncture on levels of stomach tissue Motilin and Gastrin in FGIDs-D model rats（±s，pg·mL-1）

表2 针刺对FGIDs-D模型大鼠胃组织GAS、MTL的影响（±s,pg·mL-1）Tab.2 Effects of electroacupuncture on levels of stomach tissue Motilin and Gastrin in FGIDs-D model rats（±s，pg·mL-1）

注：与正常对照组比较，**P＜0.01；与模型组比较，##P＜0.01；与非经非穴组比较，△△P＜0.01。Note:Compared with normal group,**P＜0.01;Compared with model group,##P＜0.01;Compared with non-acupuncture point group,△△P＜0.01.

组别 n GAS MTL正常对照组模型组非经非穴组足三里组10 10 10 10 219.72±18.36 95.69±10.39**99.26±11.25 216.97±28.75##△△90.77±13.33 49.91±8.58**55.04±8.68 87.90±6.46##△△

胃肠道功能紊乱的发生与胃肠激素分泌关系密切[6]。GAS能使胃粘膜血流加强，促使粘膜上皮细胞中DNA的合成，使细胞分裂增快，泌酶、泌酸功能增强。GAS也可促进胃肠道的运动。近年来研究显示，针刺对GAS的分泌也有调节作用。 如滕金艳等[7]电针“百会”“印堂”提高抑郁模型大鼠的结肠黏膜脑肠肽GAS的分泌。王昕等[8]针刺“足三里”，结果显示针刺“足三里”可使脾虚大鼠血清中GAS、皮质醇、睾酮的水平升高。李彤彤等[9]针刺不同穴位对脾气虚大鼠能显著升高鼠血清GAS，有效改善脾气虚证。MTL作为一种重要的脑肠肽和胃肠激素，对胃肠运动和某些消化液的分泌具有重要的生理意义。如针刺胃俞募穴可明显增强大鼠胃运动，且采用俞募配穴进行针刺，其作用更为显著，且血清中MTL、GAS分泌水平发生明显变化[10]。羊燕群等[11]研究针刺足三里对FD胃排空及血清MTL和GAS影响,发现针刺足三里对胃肠动力具有促进作用，此与恢复FD大鼠的MTL、GAS分泌水平有关。到目前为止,临床上西医采用药物治疗FGIDs-D疗效不甚理想,然针刺治疗该病疗效显著并被推广，但该病发病机制尚无统一认识,故本研究希望通过针刺腧穴调节胃肠激素GAS、MTL的分泌治疗FGIDs-D作进一步探讨。

本实验研究结果显示，造模后各组大鼠血清及胃组织中GAS、MTL的含量明显降低，而针刺足三里穴能明显提高其含量，对胃肠功能紊乱腹泻模型大鼠胃肠激素具有良性调节作用。同时证明足三里穴与胃肠有着特异性关系，具有穴位的特异性。

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Effects of Electroacupuncture at ST36 on Levels of Gastrointestinal Hormone Motilin and Gastrin in FGIDs-D Model Rats

LI Fang1,GAO Fang21. Rehabilitation Medicine Institute of the First Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University,ZheJiang(325000);2.Key Laboratory of Xin’an Medicine,Ministry of Education,AnHui University of TCM

[Objective]To explore the mechanism of acupuncture at Zusanli point(ST36)in the treatment of functional gastrointestinal disorders(FGIDs). [Methods]A total of 40 Wistar rats were randomized into normal(n=10),model(n=10),Zusanli point(ST36),non-acupuncture point(n=10).FGIDs model was established by exerting the factors of cold-constraint stimulation and hunger disorder synthesis.And the content of rats serum and stomach tissue Gastrin (GAS)and Motilin(MTL)was observed by radioimmuno-assay.[Results]Compared with the normal group,the content of rats serum and stomach tissue GAS and MTL of the model group was significantly reduced(P＜0.01);Compared with the model group,the content of rats serum and stomach tissue GAS and MTL of ST36 group was significantly ascended(P＜0.01);Compared with the non-acupuncture point group,the content of rats serum and stomach tissue GAS and MTL of ST36 group had statistically significant differences(P＜0.01).[Conclusion]Acupuncture at ST36 had obvious improvement in FGIDs,its mechanism was closely related to GAS and MTL.

FGIDs;diarrhea;ST36;acupuncture;GAS;MTL;mechanism

R245.9

A

1005-5509（2017）04-0271-03

10.16466/j.issn1005-5509.2017.04.002

2016-11-22）

安徽中医药大学科研项目（2014zr002）

Fund project:Scientific research project program of AnHui University of TCM（2014zr002）

高纺，E-mail:gf19840920@126.com