ErbB2基因rs1058808位点多态性与延边地区HBV相关肝细胞肝癌的关系及民族差异

崔文豪，李成浩，朴熙绪，许东元，刘兰

(1延边大学附属医院,吉林延吉133000；2 延边大学医学院)

ErbB2基因rs1058808位点多态性与延边地区HBV相关肝细胞肝癌的关系及民族差异

崔文豪1，李成浩1，朴熙绪1，许东元2，刘兰1

(1延边大学附属医院,吉林延吉133000；2 延边大学医学院)

目的 观察延边地区乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞肝癌(HCC)患者ErbB2基因rs1058808位点多态性，探讨rs1058808位点多态性与HBV相关HCC的关系及民族差异。方法 选取66例(朝鲜族28例、汉族38例)HBV相关HCC患者(病例组)和150例(朝鲜族68例、汉族82例)单纯HBV携带者(对照组)，采用双脱氧链末端终止法检测ErbB2基因rs1058808位点多态性，并分析两组及不同民族基因型和等位基因的分布情况。结果 病例组ErbB2基因rs1058808位点的CC、CG和GG基因型所占比例分别为15.2%、46.9%、37.9%，对照组分别为14.7%、62.7%、22.7%，观察组GG基因型所占比例高于对照组 (P<0.01)。病例组朝鲜族和汉族人群ErbB2基因rs1058808位点GG基因型所占比例分别为35.7%、36.8%，均高于对照的23.5%、22.0%(P均<0.01)；两组同民族CC、CG基因型及C、G等位基因分布差异无统计学意义，病例组汉族和朝鲜族人群CC、CG和GG基因型及C、G等位基因分布差异无统计学意义(P均>0.05)。结论 ErbB2基因rs1058808位点GG基因型可能是延边地区人群HBV相关HCC发生的主要遗传易感因素，且汉族和朝鲜族间不存在民族差异。

肝细胞肝癌；ErbB2；基因多态性；乙型肝炎病毒；民族差异；延边

原癌基因ErbB2在多种肿瘤中起着非常重要的调控作用[1]，有望成为临床治疗的靶点。研究表明，肝癌组织中ErbB2高表达[2,3]，并且ErbB2在肝癌的发生过程中与乙型肝炎病毒(HBV)X抗原有相互作用[4]。HBV相关的肝细胞肝癌(HCC)是常见的恶性肿瘤，HBV携带者发生HCC的频率非常高，且延边地区朝鲜族HBV感染率也很高，但是ErbB2表达与HBV感染的相关性尚不清楚。近年研究表明，ErbB2基因多态性与肿瘤的发生密切相关。2013年1月～2014年5月，我们观察了延边地区朝鲜族和汉族HBV携带者和HBV相关HCC患者中ErbB2基因rs1058808位点的多态性分布，探讨ErbB2基因rs1058808位点多态性与HBV相关HCC的关系及民族差异。

1 资料与方法

1.1 临床资料 遵循知情自愿原则，在延边大学临床学院消化内科住院及门诊就诊的人群中选取HBV相关HCC患者66例(病例组)、单纯HBV携带者150例(对照组)。病例组中男36例、女30例，年龄(53.46±12.79)岁；朝鲜族28例，汉族38例；血清HBV均阳性，均经术后病理检查确诊为HCC；采血前均未行放射和抗癌药物治疗，并除外继发性肝癌及其他肿瘤者。对照组中男82例、女68例，年龄(54.82±12.27)岁；朝鲜族68例，汉族82例；仅为单纯HBV携带者，采血前未行抗病毒治疗。

1.2 ErbB2基因rs1058808位点多态性检测方法 留取两组血样，利用全血基因组DNA提取试剂盒 (北京艾德莱生物科技有限公司)提取基因组DNA，并用核酸定量分析仪进行DNA含量及纯度检测。参照人类基因数据库资料设计，在位点两侧设计PCR引物，上游引物序列为5′-GTGAACCAGCCAGATGTTCG-3′，下游引物序列为5′-TAGAGGTTGTCGAAGGCTGG-3′，引物由上海捷瑞公司合成。PCR反应体系(总量25 μL):10×PCR 缓冲液2.5 μL，50 mmol/L MgCl20.8 μL，10 mmol/L dNTP 混合液 0.5 μL，5 μmmol/L上下游引物各1 μL，DNA模板1 μL,Platinum®Taq DNA聚合酶 0.2 μL,ddH2O 18 μL。将上述样品混匀后，置入PCR仪(Gene Amp PCR System 9700型，Life公司)中进行扩增。反应条件：94 ℃预变性2 min，94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s,72 ℃延伸50 s，共循环35次，于72 ℃继续延伸。PCR产物鉴定并纯化后用ABI 3730XL型DNA测序仪(上海Invitrogen公司)完成测序，测序结果用Chromas 2.3软件显示，人工校读并分析重复序列。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。数据比较行χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组ErbB2基因rs1058808位点多态性比较 见表1。

表1 病例组与对照组ErbB2基因rs1058808位点多态性比较(例)

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.2 两组朝鲜族人群ErbB2基因rs1058808位点多态性比较 见表2。

表2 两组朝鲜族人群ErbB2基因rs1058808位点多态性比较(例)

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.3 两组汉族人群ErbB2基因rs1058808位点多态性比较 见表3。

表3 两组汉族人群ErbB2基因rs1058808位点多态性比较(例)

注：与对照组比较，*P<0.05。

2.4 病例组中汉族和朝鲜族ErbB2基因rs1058808位点多态性比较 病例组汉族和朝鲜族人群ErbB2基因rs1058808位点CC、CG和GG基因型及C、G等位基因分布无差异统计学意义(P均>0.05)。见表4。

表4 病例组中朝鲜族与汉族的ErbB2基因rs1058808位点多态性比较(例)

3 讨论

HCC恶性程度极高、预后差、转移早、扩散快，是危害人类健康的恶性肿瘤之一。目前HCC诊断和治疗有所发展，但其预防及早期诊断仍是难题。

已有大量文献报道，ErbB2基因编码产物的过表达与多种肿瘤的发生及预后有关[5]，但国内外对HCC与ErbB2基因相关性报道较少。Carver等[6]在动物实验中发现，ErbB2表达的蛋白仅在胚胎的肝实质中被检测到，且在出生后第3周就消失，即使肝部分切除术也不能被诱导产生。黄必军等[7]研究发现，HCC患者细胞核中ErbB2基因的扩增和17号染色体有关，21.4%的HCC患者癌ErbB2基因发生扩增。

ErbB2基因编码的膜糖蛋白具有促进肿瘤细胞浸润、转移的功能，ErbB2基因扩增患者的肿瘤直径比无扩增患者的肿瘤直径有增大的倾向。Heinze等[8]用ELISA法检测ErbB2蛋白呈高表达，ErbB2与HCC患者性别、临床分期、肿瘤大小、术后复发无关，但与年龄、AFP水平和HBV感染有关。曾志武等[9]采用免疫组化法检测到正常肝组织、肝硬化及HCC组织中ErbB2蛋白表达，其表达率依次为0、10.0%和37.5%;其表达与肿瘤包膜侵犯、病理分级及肿瘤转移有关，而与AFP水平、肿瘤大小及肝硬化程度无关，认为ErbB2基因可作为HCC发生的危险因素。Huang等[10]研究指出，ErbB2基因扩增与HCC的肿瘤大小有关。但是，ErbB2外显子区域位点多态性与HCC相关的研究尚未见报道。我们对ErbB2外显子区域位点的多态性进行了研究，发现rs1058808位点多态性与延边地区HCC发生之间存在关联。ErbB2基因rs1058808多态性可引起氨基酸编码的改变，可能影响前体蛋白的结构修饰和出胞过程。ErbB2基因在HCC中过量表达，且这种表达与HCC的发展、并发症及肿瘤分化水平有关[11]。研究证实,肝硬化患者血、组织中ErbB2基因高表达时，更易发展为HCC且发展迅速[12]。其中，ErbB2基因过量表达与ErbB2基因单核苷酸多聚化及5′端外显子区核苷酸转化有关。这种单核苷酸多态性可能导致外显子半衰期延长，进而使ErbB2基因呈过量表达[13]。因此，ErbB2基因可成为治疗HCC的潜在靶标。

ErbB2基因多态性在不同肿瘤、国家、民族的易感性有不同报道，甚至同一肿瘤的研究结论也不尽相同。吴洪文等[14]研究表明，ErbB2在HCC组织中呈高表达，是HCC发生、发展和转移的重要促进因素。Tong等[15]经过研究得出结论，认为ErbB2基因的rs1058808位点的CG、GG两种基因型有可能是韩国女性子宫内膜癌发生的危险因素。本研究结果表明,病例组ErbB2基因rs1058808位点的GG基因型所占比例高于对照组，且两组同一民族中也存在这种差异，但在病例组中朝鲜族和汉族间各基因型和等位基因的分布差异均无统计学意义。这在一定程度上提示ErbB2基因 rs1058808位点单核苷酸多态性与HBV相关HCC的易感性有关，GG基因型可能是延边地区人群HBV相关HCC发生的主要遗传易感因素，且汉族和朝鲜族间不存在民族差异。

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Relationship of ErbB2 gene rs1058808 polymorphism with HBV-related hepatocellular carcinoma in Yanbian area and ethnic difference

CUIWenhao1,LIChenghao,PIAOXixu,XUDongyuan,LIULan

(1YanbianUniversityHospital,Yanji133000,China)

Objective To investigate the rs1058808 polymorphism of ErbB2 gene in hepatitis B virus (HBV)-related hepatocellular carcinoma (HCC) in Yanbian area, and to explore the correlation between rs1058808 polymorphism and HBV-related HCC and ethnic differences.Methods The gene polymorphisms of rs1058808 in ErbB2 of 66 cases of patients with HBV associated HCC (the experimental group, including 28 cases of Korean nationality and 38 cases of Han nationality) and 150 cases of pure HBV carriers (the control group, including 68 cases of Korean nationality and 82 cases of Han nationality) were detected by dideoxy chain-termination method. We analyzed the genotype and allele distribution in the two groups.Results Both the two groups had rs1058808 ErbB2 gene loci of CC, CG and GG genotypes, and G gene was the most allele. The proportions of CC, CG and GG genotypes of ErbB2 gene rs1058808 loci in the experimental group were 15.2%, 46.9% and 15.2%, while in the control group they were 14.7%, 62.7% and 22.7%; the proportion of GG genotype in the experimental group was higher than that of the control group (P<0.01). The proportions of rs1058808 ErbB2 gene loci GG genotype in the Korean nationality and Han nationality of the experimental group were 35.7%, 36.8%, which were higher than those of the control group (23.5%, 22.0%) (allP<0.01). There was no statistically significant difference between the two national groups in CC, CG genotypes, C and G allele distribution. In the experimental group, there was no statistically significant difference in CC, CG and GG genotypes and C and G allele distribution between Han and Korean patients (allP>0.05).Conclusion The GG genotype of rs1058808 in ErbB2 may be the main genetic risk factor for HBV-associated HCC in Yanbian area, and there is no national differences between Han and Chinese-Korean patients.

hepatocellular carcinoma; ErbB2; gene polymorphism; hepatitis B virus; ethnic difference; Yanbian area

国家自然科学基金资助项目(81560400)；吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目(2013-13)。

崔文豪(1987-)，男，硕士，住院医师，主要研究方向为病毒性肝炎的发病机制。E-mail： 348833431@qq.com

刘兰(1977-)，女，博士，副教授，主要研究方向为肿瘤病因与诊断。E-mail： lliu@ybu.edu.cn

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.002

R735.7

A

1002-266X(2017)10-0005-03

2016-12-11)