苦荞茶总黄酮的抗氧化作用

清源

摘要：采用乙醇浸提法提取苦荞茶中抗氧化物质，测定其中黄酮类物质含量，并通过体外抗氧化评价方法研究其抗氧化能力。结果表明：苦荞茶的乙醇提取物具有抗氧化活性，并且与总黄酮含量呈正相关性，与对照品 VC 标准溶液的抗氧化趋势一致。而苦荞茶总黄酮的总抗氧化能力和清除羟基自由基能力，与对照品VC差距较大。

关键词：苦荞茶；乙醇提取物；总黄酮；抗氧化

目前，在凉山州本地，以苦荞为原料从事苦荞系列食品加工生产的企业众多，产品形式以苦荞茶等最多也最为常见，而产品宣传着力点均涉及其抗氧化性能，有着主导市场消费的重要作用。因此，开展苦荞茶抗氧化活性研究，对于产品的进一步推广和应用有着重要的现实意义。

1 材料与方法

1.1 试验材料

芦丁标准品（A0103-20 mg，纯度≥98%UV，批号：MUST-14082710）；没食子酸标准品，成都科龙化工试剂厂；Folin-Ciocalteu试剂；DPPH（1，1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl），Sigam公司；总抗氧化能力测定试剂盒、羟自由基试剂盒，南京建成生物工程研究所；95%乙醇、氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、碳酸钠等均为分析纯。

1.2 试验设备

SHA-C水浴恒温振荡器，津达公司；722型可见分光光度計，上海菁华科技仪器有限公司；抽滤装置，津腾公司；KQ5200D型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；JD400-3电子分析天平，ESJ210-4B电子天平，沈阳龙腾电子有限公司。

1.3 方法

1.3.1 总黄酮含量的测定。采用NaNO2-Al（NO3）3方法测定[1，2]。以芦丁为标样，在510 nm波长处测定吸光度。以吸光度值为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线（如图1所示），建立回归方程：Y=9.5982 x-0.0007，相关系数 r=0.9991。

1.3.2 待测溶液制备。准确称取苦荞茶样品试样2.000 g（设3次重复），直接置于150 mL具塞三角瓶中，加入80%乙醇60 mL，70℃恒温水浴条件下，浸提时间4 h，趁热抽滤，滤液定容至50 mL。

1.3.3 总抗氧化能力的测定。依照总抗氧化能力测定的试剂盒说明书进行操作。采用722型分光光度计于520 nm处测定吸光度，以Vc（抗坏血酸）为对照，评价各苦荞茶的总抗氧化活性[3]。抗氧化能力单位定义为：在 37℃下，每分钟每毫升测定液使反应体系吸光度增加 0.01 为一个总抗氧化能力单位。每个质量浓度测定重复3次。

1.3.4 DPPH自由基清除率的测定。参考Sahreen等人方法并作适当调整。将50 mg DPPH溶于100 mL甲醇溶液中，DPPH储备液于冰箱中保存，用时稀释100倍为工作液。2 mLDPPH工作液与2 mL不同质量浓度的苦荞茶总黄酮提取物反应30 min，517 nm处测定吸光值。以2 mLDPPH工作液与2 mL甲醇溶液为对照反应为对照。样品对DPPH清除率（%）=A对照-A样品/A对照×100%。

1.3.5 羟基自由基清除率的测定。依照羟自由基测定试剂盒的说明书进行操作。采用722型分光光度计于550 nm处测定吸光度，以Vc为对照。将苦荞茶总黄酮溶液用80%乙醇稀释成0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2、2.25 mg/mL测定液，每个质量浓度测定重复3次。

2 结果与分析

2.1 苦荞茶乙醇提取物总黄酮含量

黄酮类化合物是苦荞最主要的成分，是苦荞中最重要的生物活性物质，具有很强的抗氧化作用。因此，研究苦荞茶中黄酮类物质的含量，是进一步探明产品功能的物质基础。

2.2 苦荞茶总黄酮对DPPH的清除效果

由图3可知，Vc和苦荞茶样品均有较好的清除DPPH的能力。其中，Vc质量浓度达0.07 mg/mL后清除率基本不变为92.73%。苦荞茶总黄酮浓度在0.005-0.09 mg/mL范围内，清除率随总黄酮质量浓度的增加而增加。当总黄酮浓度达0.1 mg/mL时，样品5和样品9对DPPH清除率分别达到91.46%和91.74%，而样品8对亦可达到72.58%。

3 结论

苦荞茶总黄酮的总抗氧化能力与其质量浓度都呈正相关性，随着质量浓度增大，总抗氧化能力也增加，这与Vc 标准溶液的趋势一致。但是，与 0.10 mg/mL 质量浓度条件下Vc总抗氧化力相差较大。

苦荞茶总黄酮清除DPPH自由基能力与其质量浓度都呈正相关性，且各苦荞茶样品对DPPH自由基清除率均可达70%以上。其中，样品5和样品9在总黄酮浓度达0.1 mg/mL时，与对照品Vc清除率基本一致可达90%以上。

苦荞茶总黄酮清除羟基自由基能力与其质量浓度都呈正相关性。在0.75-2.25 mg/mL范围内Vc对羟基自由基清除率可达96%以上，苦荞茶样品清除能力仅为30%-40%。

参考文献

[1]旷春桃，李湘洲，汪玉霞，等. 大叶冬青叶中总黄酮测定方法和提取工艺研究[J]. 食品科学，2009，30（6）：49-51.

[2]薛晓丽. 荷叶总黄酮的提取研究[J]. 安徽农业科学，2009，37（12）：5500-5501，5503.

[3]张 滨，栗登权，曾 丹，等. 响应面法提取沙棘抗氧化成分工艺优化[J]. 食品工业，2013 （5）： 75 -79.