不同炮制工艺对大黄成分含量的影响

赵莹

摘 要：本文对不同炮制工艺对大黄中成分含量的影响进行研究。固定相为：依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u ），甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）为流动相，检测波长为254nm；大黄素在50～950μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。本法简便、重现性好、回收率高，可用于不同大黄炮制品中大黄素的含量测定。

关键词：大黄；炮制；测定

大黄始载于《神农本草经》，列为下品。大黄具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经等功效。大黄常用于实热便秘，积滞腹痛，血热吐衄，肠痈腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸，痈肿疔疮，瘀血经闭等。《本草经解》记载：“入手太阳小肠经、手少阴心经。手少阳三焦经，兼入足阳明胃经、手阳明大肠经。”不同的大黄炮制品具有不同的功效。生大黄沉降，气味重浊，走而不守，直达下焦，泻下作用峻烈，易伤胃气。醋大黄活血解毒作用较强，以消积化瘀为主。酒大黄善清上焦血分热毒。大黄炭泻下作用极弱，有凉血化瘀止血止泻的功效。熟大黄泻下力缓，泻火解毒。本文对不同炮制工艺对大黄中成分含量的影响进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器：PURIST超纯水系统（上海瑞枫生物科技有限公司）；PHS-550智能型台式酸度计（杭州陆恒生物科技有限公司）；JF2004北京电子分析天平（北京金泰科仪检测仪器有限公司）；HX-06超声波清洗器（武汉恒信世纪科技有限公司）；HWS24电热恒温水浴锅（北京慧龙环科环境仪器有限公司）；DR5000台式紫外可见分光光度计（北京创誉科技有限公司）；iChrom 5100高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）。

1.2 试药：乙腈（上海斯信生物科技有限公司）、盐酸（南京大唐化工有限公司）、氯仿（南京大唐化工有限公司）、醋酸钠（广州自力色譜科仪有限公司）、甲醇（上海斯信生物科技有限公司）、冰乙酸（南京科捷分析仪器有限公司）、磷酸（南京大唐化工有限公司）。

2 含量测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱（4.6*250*5u）；甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）为流动相；检测波长为254nm；流速1.0mL·min-1；柱温：30℃。理论板数按大黄素峰计算应不得低于2000。

2.2 炮制品的制备

2.2.1 生大黄。取大黄，除去杂质，水适量洗净，时间不宜太长，以水尽药透为度，切块或片，焖润至内外湿度均匀，低温干燥，筛去碎屑备用。

2.2.2 熟大黄。取大黄片或块，置蒸制容器内，隔水蒸至大黄内外均呈黑色，取出干燥。取大黄片或块，用黄酒拌匀，闷1～2h至酒被吸尽，置适宜容器内密闭，隔水炖24～32h至内外均呈黑色时，取出干燥（黄酒用量：大黄100kg用黄酒30kg）。

2.2.3 酒大黄。取大黄片或块，加黄酒喷淋搅拌均匀，稍闷，待酒被吸尽后，用文火微炒，不断翻动，眼观断面浅棕色时，水分已干，取出摊晾凉，筛去碎屑（黄酒用量：大黄100kg用黄酒10kg）。

2.2.4 醋大黄。取大黄片或块，加米醋喷淋搅拌均匀，闷润至透，待米醋被吸尽后，置炒锅内用文火加热炒干，不断翻动，炒至色泽加深，取出晾凉，筛去碎屑。

2.2.5 大黄炭。取大黄片或块，置炒制容器，武火炒至片面焦黑色，内部焦褐色，如有火星时当喷洒水粒，灭尽火星，文火炒干，取出晾干。

2.3 供试品溶液的制备

取大黄适量，粉碎成粗粉，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入1.0mol/L盐酸30ml与氯仿20ml，回流30min，放冷，分取氯仿层、酸水层再分别加氯仿萃取3次，每次20ml，合并氯仿层，回收氯仿，残渣加甲醇溶解，转移至50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 对照品溶液的制备

精密称取大黄素对照品约100mg，置50毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL溶液中含大黄素200μg）。

2.5 标准曲线的制备

制备浓度为50μg·mL-1、150μg·mL-1、250μg·mL-1、350μg·mL-1、450μg·mL-1、550μg·mL-1、650μg·mL-1、750μg·mL-1、850μg·mL-1、950μg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，大黄素对照品在50～950μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取大黄素对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.63%。结果表明，本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批大黄样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.66%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液，分别在0，1，2，3，4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品大黄素峰面积积分值的RSD为0.62%。结果表明大黄素至少在4h内稳定。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法，测定大黄三批样品中大黄素的含量，结果大黄素含量酒大黄>熟大黄>生大黄>醋大黄>大黄炭。

3 讨论

分别考察甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01），乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸（18：12：70∶0.1），甲醇-0. 025mol/L磷酸（9∶1），甲醇-水-冰乙酸（80：19：1），乙腈-甲醇-水-三乙胺（20：20：60∶0.01），乙腈-甲醇-冰乙酸-水（15：15∶3∶67）不同比例的流动相，结果以甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用甲醇-水-磷酸（90∶10：0.01）为流动相。大黄素含量生片>黑豆制>黑豆黄酒制>蒸制>酒制。

参考文献

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