抗结核药固定剂量复合剂分析方法研究进展

张立光

（苏州卫生职业技术学院，江苏 苏州 215009）

抗结核药固定剂量复合剂分析方法研究进展

张立光

（苏州卫生职业技术学院，江苏 苏州 215009）

综述了抗结核固定剂量复合剂分析方法的研究进展。根据已报道的抗结核固定剂量复合剂的分析方法的相关文献，分析检测方法的优缺点。通过分析检测方法，提出建议,为抗结核固定剂量复合剂的分析方法的开发提供参考依据。

抗结核药；固定剂量复合剂；分析方法

近年来，结核病的发病率呈逐年增加趋势，严重 威 胁 人 类 健 康[1]。 人 类 免 疫 缺 陷 病 毒 （ human immuno deficiency virus，HIV）的大量传播和结核杆菌耐药性的产生，尤其是多重耐药性（multiple drugs resistance，MDR）的增多，使结核病的治疗越来越受到关注。世界卫生组织建议使用固定剂量复合剂(fixed-dose combinations，FDCs)代替单药制剂治疗结核病[2,3]。固定剂量复合剂主要是指几种不同的药物进行配方，每种按一定剂量混成复合制剂，如利福平、 对氨基水杨酸钠、异烟肼、盐酸乙胺丁醇药物进行配方[4]。复方抗结核制剂有二联制剂、三联制剂、四联制剂[5]。本文作者综述了近年来抗结核药固定剂量复合剂检测分析方法的研究进展。

1 含量测定方法

抗结核固定剂量复合剂中的几种成分，只有盐酸乙胺丁醇的含量测定是难点。由于盐酸乙胺丁醇无紫外吸收，不能通过常规的高效液相色谱-紫外检测法进行检测，故盐酸乙胺丁醇的测定一直是药物分析的领域的难点。近年来，陆续有研究乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的检测方法发表。郭涛等[6]建立高效液相色谱法测定乙胺吡嗪利福异烟片中盐酸乙胺丁醇、吡嗪酰胺、利福平和异烟肼含量。盐酸乙胺丁醇选用了苯乙基异氰酸酯为衍生剂进行柱前衍生化，用 C18 色谱柱，甲醇-水-冰醋酸（70∶30∶0．2）为流动相，流速 1.0 mL·min-1，检测波长 220 nm。异烟肼和吡嗪酰胺用 C18 色谱柱，以乙腈 0.02 mol·L-1磷酸二氢铵（2∶98）为流动相，流速 1.0 mL·min-1，检测波长 263 nm。利福平色谱条件为C18 色谱柱，以甲醇-乙腈-0.075 mol·L-1磷酸二氢钾-1mol·L-1枸橼酸（30∶30∶26∶4）为流动相，流速 1.0 mL·min-1，检测波长 254 nm。盐酸乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺及利福平分别在 20～160，2～50，10～250，20～180 μg·mL-1的浓度范围内，呈良好的线性关系。特别是盐酸乙胺丁醇的衍生化方法反应迅速，条件容易控制，衍生化方法可靠，适用于抗结核固定剂量复合剂多成分的分离和含量测定。戚燕[4]建立了高效液相色谱法测定乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ中利福平、异烟肼、吡嗪酰胺和盐酸乙胺丁醇的含量，样品溶液在 4 h 内稳定，溶解样品的溶剂为甲醇。方法简便,准确，可用于乙胺吡嗪利福异烟片中各组分的质量控制。现国内报道的其他测定方法主要有气相色谱法[7]、柱前衍生化法[8]和 RP—HPLC法[9]等。总之，盐酸乙胺丁醇的含量测定目前已经不再是抗结核固定剂量复合剂研究领域的重点。

2 溶出度测定方法

在 2010 年以前，固定剂量复合剂的溶出度仅检测利福平项，因为利福平是这几个成分中水溶性最不好的，所以仅检测利福平，如果利福平的溶出度良好，根据推理，其他成分的溶出度也会很好。但是世界卫生组织在其技术报告[10]中说明凡是固定剂量复合剂应该对其中的每一个成分进行溶出度的检测，只测利福平的溶出度是不够的，应增加其他组分的测定。近年来，我国在抗结核药品的溶出度方面做出了很多努力，各药检所与企业共同为质量标准的提高做了很多的研究工作。《中国药典》2010年版颁布以来，抗结核复方制剂的质量得到了相应的提高。异福片与异福胶囊的溶出度[11]都增加了对异烟肼项的溶出度的检测，异福酰胺胶囊及异福酰胺片增加了对异烟肼与吡嗪酰胺的溶出度的检测。2012 年乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的质量标准中利福平、吡嗪酰胺、异烟肼、盐酸乙胺丁醇的溶出度均进行了控制[1]。其中异福片与异福胶囊、异福酰胺胶囊及异福酰胺片的溶出度的检测方法基本上一致。以盐酸溶液（9→1000）900 mL 为溶出介质，转速为 100 r/min，依法操作，30 min 时取样测定，供试品溶液需要在 2 h 内测定。利福平项在 474 nm的波长处测定吸光度，计算每片中利福平的溶出量，限度应为利福平标示量的 75%，异烟肼与吡嗪酰胺项照高效液相色谱法（附录 V D）测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 80.0 g 与磷酸氢二钾 15.3 g，加水溶解并稀释至 1000 mL，摇匀）-甲醇-水（10∶5∶85）为流动相，流速为每分钟 1.5 mL，检测波长为 254 nm，异烟肼峰与吡嗪酰胺峰的分离度应大于 4.0。异烟肼限度为异烟肼标示量的 80%，吡嗪酰胺限度为吡嗪酰胺标示量的 75%，应符合规定。虽然我国标准中增加了对其他项目的控制，质量标准较十年前有了大幅度的提高，但是溶出介质仍与国外药典有区别，美国药典采用pH=6.8 的磷酸盐缓冲液，而我国采用的是盐酸。溶出介质的区别也可能会导致检测结果有很大的差异。

在检测方法上，以前的观念是由于利福平不稳定，应单独进行快速测定，因此利福平的溶出度都采用吸收系数法测定。因受薄膜衣或胶囊壳颜色的干扰，结果可能不准确，吸收系数法存在一定的误差。由于与利福平相关的杂质有醌式利福平、3-甲酰利福霉素 SV、N-氧化利福平，结构与利福平极为相似。在利福平的最大吸收波长处，也存在着一定的紫外吸收。因此会对利福平的测定有所影响[12]。建议采用高效液相色谱法克服这个缺点。在 2012年国家食品药品监督管理局颁布的乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ以前，溶出介质采用盐酸。

对于固定剂量复合剂，每一种成分的溶出度都尤为重要，即使其中的组分可能是水溶性非常好的药物，但是由于几种成分组合到一起，可能会相互影响导致某一种成分的溶出度不好，进而影响其在体内的吸收，降低药效。因此，对每一组分的溶出度进行检测非常重要。可见复方制剂中除利福平外的其他组分的溶出度已经开始越来越多的受到大家的关注。尤其在 WHO 预在中国进行抗结核药预认证这个项目的大的背景之下，我们也感受到了国外的专家除了关注利福平之外，对异烟肼、吡嗪酰胺与盐酸乙胺丁醇的溶出度也有浓厚的兴趣。而抗结核药物 FDCs 在整个溶出度的质量标准上的提高也是国内产品迈向国际市场的必经之路。

3 有关物质检测

抗结核固定剂量复合剂的有关物质一直是国际上研究抗 结核药物的 专 家的关注 焦 点。Bhavika Mohan[11]采用 HPLC 法同时测定了含量与有关物质，有关物质有 3-甲酰利福霉素SV,N-氧化利福平、25-去乙酰化利福平，醌式利福平，以及利福平与异烟肼产生的复合物利福霉素异烟胺腙。在对 USP 方法进行优化后能够使几种杂质很好的分离和测定。用于测定利福平、异烟肼、吡嗪酰胺的液相系统能够测定降解产物除了 N-氧化利福平、25-去乙酰化利福平，其他的杂质即使色谱条件发生很小的改变也能够实现。不同的色谱柱分离效果不同。无论是在哪种色谱柱上，利福平的柱效都能够满足要求，这种方法虽然能够在同一条件下测定了利福平、异烟肼与吡嗪酰胺的含量，又检测了有关物质，但是对色谱柱的要求比较苛刻。

国际药典 2008 年版[13,14]规定了有关物质，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为上述pH=7.0 磷酸盐缓冲液—甲醇（40∶60）；检测波长为 254 nm。对醌式利福平、利福平与异烟肼形成的复合物腙及总杂质的限度。2012 年，乙胺吡嗪利福异烟片Ⅱ的质量标准中也增加了有关物质的控制，而此次标准的修订，我们走在了国际上抗结核药物杂质研究的前沿，我们对利福平与醌式利福平的分离度做了更加严格的要求，国际药典要求分离度达到 4.0，我国标准要求 10.0，对杂质腙的限度要求和总杂质的限度要求均比国际药典的要求严格，腙杂质限度国际药典为 5%，我国标准为 3.0%，总杂质国际药典要求 10.0%，我国要求 7.5%。杂质腙是抗结核固定剂量复合剂中的主要杂质[15]。王曦培等[16]采用差示扫描量热（DSC）法初步判定四联药物间配伍性，考察单药和不同配伍混合物的配伍稳定性，在光照、高温、高湿及不同pH 条件下；采用RP-HPLC 法对样品中有关物质含量进行检测。

4 干燥失重

盐酸乙胺丁醇吸湿性较强，外观易发生变化[4]，并使利福平与异烟肼的反应加快。S. Singh[17]报道了加速试验条件（40 ℃/75% RH）下抗结核药的吸湿行为。盐酸乙胺丁醇的存在，使粉末混合物或者样品吸湿性更严重，更易发生物理性的变化[5]。光照条件下，盐酸乙胺丁醇的粉末吸湿性更加严重，并且复方粉末中药物组分越多，吸湿性越小，四组分的比三组分的吸湿性小。胶囊制剂的 FDC 产品都对水分进行了控制，而片剂没有水分的控制。由于盐酸乙胺丁醇具有引湿性，制剂中的水分含量过多会影响产品的稳定性。而国外药典无论对片剂还是胶囊剂都对水分进行了控制。美国药典对胶囊剂和片剂的 FDCs 都进行了干燥失重的检测，不得大于3.0%。国际药典的限度也是不得大于 3.0%。笔者建议国内的生产厂家应参照国外药典设立干燥失重或水分检查项目，进行控制。

5 结论与展望

复方制剂可以提高药效，减少耐药性。但复方抗结核制剂确实存在一些问题急需解决：复方制剂的利福平降解的问题比较严重，生物有效性的差异也较大[1]。因此建立一个严格的且统一的抗结核固定剂量复合剂的质量标准对提高药品质量是至关重要的，同时也为我国的抗结核药物能够出口提供了一个很好的机会。同时，希望随着科学技术的进步，有更先进的分析技术能够对抗结核药物的质量控制做出更多的帮助。

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Researchprogress of Analysis Methods of Anti-tuberculosis Fix-dose Combination Drugs

ZHANG Li-guang
（Suzhou Health College, Jiangsu Suzhou 215009, China）

The recent development of analysis methods of anti-tuberculosis fix-dose combination drugs was reviewed. According to the reported literatures of analytical methods of anti- tuberculosis fix-dose combination drugs, advantages and disadvantages of these methods were analyzed. Through analysis of influence factors, some suggestions wasproposed.

Anti-tuberculosis; Fix-dose combination drugs; Analysis methods

TQ 460

： A

： 1671-0460（2017）02-0305-03

2016-07-08

张立光（1980-），女，辽宁省葫芦岛市人，副教授，硕士，2006 年毕业于沈阳药科大学，研究方向：药物化学及药物制剂。E-mail：ivy0714@126.com。