浸润性乳腺癌患者外周血中25羟维生素D3的测定及临床意义

张慧芳，龚华

(南京医科大学附属无锡市妇幼保健院检验科，江苏 无锡 214002)

浸润性乳腺癌患者外周血中25羟维生素D3的测定及临床意义

张慧芳，龚华

(南京医科大学附属无锡市妇幼保健院检验科，江苏 无锡 214002)

目的检测25羟维生素D3[25(OH)D3]在浸润性乳腺癌外周血中的水平，探讨其在浸润性乳腺癌发生、发展的作用。方法收集2015年1～12月间来我院住院治疗的浸润性乳腺癌患者122例(乳腺癌组)，乳腺良性肿瘤患者40例(乳腺良性肿瘤组)和健康体检者40例(健康对照组)，乳腺癌组患者均经病理检查确诊。采集外周血，酶联免疫吸附实验(Elisa法)测定25(OH)D3的水平；同时收集122例浸润性乳腺癌患者的肿瘤组织，采用免疫组织染色法测定组织的石蜡切片中的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、血管内皮生长因子(VEGF)、人表皮生长因子受体-2(Cerb-2)和p53蛋白(抑癌基因p53)的表达水平，并分析其与25(OH)D3的关系。结果(1)乳腺癌组、乳腺良性肿瘤组和健康对照组外周血中的25(OH)D3的水平分别为(34.9±12.8)nmol/L、(46.9±11.3)nmol/L和(51.4±13.2)nmol/L，乳腺癌患者的外周血中25(OH)D3的水平明显低于乳腺良性肿瘤患者和健康者，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；(2)乳腺癌患者外周血中25(OH)D3水平与年龄、PR、VEGF和临床分期有显著性相关(P＜0.05)，而与淋巴结是否转移、肿瘤大小、ER、Cerb-2和p53无显著性相关(P＞0.05)。结论25(OH)D3在乳腺癌的发生、发展中具有不可忽视的作用。

25羟维生素D3；乳腺癌；雌激素受体；孕激素受体；血管内皮生长因子；人表皮生长因子受体-2；抑癌基因p53

25羟维生素D3[25-hydroxyvitamin D3，25(OH)D3]是一种类固醇衍生物，可以促进骨骼生长，常作为预防佝偻病的重要药物而广泛应用。随着科学研究的发展，人们发现维生素D3还与心血管、高血压和肿瘤等密切相关[1]。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来呈年轻化趋势。本文分析了我院浸润性乳腺癌、乳腺良性肿瘤和健康体检者的外周血中25(OH)D3水平以及25(OH)D3与乳腺癌患者中雌激素受体(estrogen receptor，ER)、孕激素受体(progesterone receptor，PR)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)的相关性，探讨25(OH)D3与乳腺癌的发生、发展及其预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 乳腺癌组：2015年1～12月来我院治疗的浸润性乳腺癌122例，年龄27～73岁。所有患者均经病理诊断确诊，患者术前均未接受化疗，未服用过25(OH)D3。乳腺良性肿瘤组：2015年1～12月于我院治疗的乳腺良性肿瘤患者40例，均经病理确诊为乳腺纤维瘤、乳腺导管内乳头状瘤和乳腺腺病等，年龄21～63岁。健康对照组：2015年1～12月于我院体检健康女性40例，年龄28～59岁。

1.2 方法 各组受检者抽取空腹血3 mL，离心，吸取上层血浆，检测患者25(OH)D3水平，试剂盒采用艾狄斯试剂盒(英国)，按说明书操作；所有组织标本由穿刺活检或手术切除获得，均经10%中性缓冲甲醛溶液固定，石蜡包埋后行4 μm切片，ER、PR、VEGF、Cerb-2和p53均购自北京中杉金桥公司，操作按说明书。

1.3 判断标准 (1)ER、PR：细胞核内有棕色颗粒为阳性细胞，着色阳性细胞数＞1%为阳性。(2)VEGF：细胞浆有着色颗粒为准，着色阳性细胞数＞10%为(++)阳性。Cerb-2染色阳性位于细胞膜和(或)细胞质中，完全没着色或≤10%肿瘤细胞有细胞膜着色为-；＞10%的肿瘤细胞呈现微弱、不完整的细胞膜着色为+；＞10%的肿瘤细胞呈弱至中度完整的细胞膜着色为++；＞10%的肿瘤细胞呈强的、完整的细胞膜着色为+++。-～+为阴性，+++为阳性，++视为可疑，进一步经荧光原位杂交(FISH)检测确认是否为阳性。p53以细胞核内有着色颗粒为阳性细胞。

1.4 统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 各组受检者外周血中25(OH)D3水平比较 乳腺癌组、乳腺良性肿瘤组和健康对照组受检者外周血中25(OH)D3水平分别为(34.9±12.8)nmol/L、(46.9± 11.3)nmol/L和(51.4±13.2)nmol/L，乳腺癌患者外周血中25(OH)D3明显低于健康对照组和乳腺良性肿瘤组，差异具有统计学意义(t=7.02、5.38，P＜0.05)。

2.2 乳腺癌患者外周血中25(OH)D3与临床病理的关系 在浸润性乳腺癌患者中，25(OH)D3水平在年龄≥50岁的患者中明显高于年龄＜50岁的患者，差异具有统计学意义(P＜0.05)。临床分期中，Ⅰ期与Ⅱ期患者外周血中25(OH)D3相比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)；PR阳性的患者外周血中25(OH)D3水平明显低于PR阴性的患者，差异具有统计学意义(P＜0.05)；VEGF＜++的患者外周血中维生素D水平明显高于VEGF≥++的患者，差异具有统计学意义(P＜0.05)；而外周血中25(OH)D3的水平与淋巴结是否转移，肿瘤大小、ER、Cerb-2和p53无显著性相关(P＞0.05)，见表1。

表1 乳腺癌患者外周血25(OH)D3水平与临床病理的关系(±s)

表1 乳腺癌患者外周血25(OH)D3水平与临床病理的关系(±s)

临床病理因素年龄(岁)≥50＜50临床分期Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ+Ⅳ期有无淋巴结转移例数25(OH)D3(nmol/L)t值2.93 P值＜0.05 68 54 37.9±14.4 31.2±9.6 56 52 14 32.5±9.2 38.7±14.9 30.6±16.2 2.62(Ⅰ期与Ⅱ期比较) 1.77(Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期比) 0.58(Ⅰ期与Ⅲ+Ⅳ期比) 0.68＜0.05＞0.05＞0.05＞0.05无有70 52 35.9±12.7 34.3±13.2 EPR (＋) (－)肿瘤大小(mm)≤2＞2 VEGF＜++≥++以上ER 69 53 64 58 76 46 31.8±9.9 39.2±15.3 34.5±13.5 35.5±12.1 37.3±12.7 29.5±13.3 3.23 0.43 3.23 0.25＜0.05＞0.05＜0.05＞0.05 + -73 49 35.0±13.4 34.4±12.4 Cerb-2 1.17＞0.05 + -81 41 35.7±13.9 32.8±10.6 p53 0.93＞0.05 + -89 33 34.2±11.3 36.7±17.3

3 讨论

25(OH)D3是人体的必需维生素之一，维持着体内的钙磷平衡。人体内长期缺乏25(OH)D3可以导致免疫力低下，肥胖症和抑郁症等多种疾病。近年来，随着分子生物学的发展，人们意识到25(OH)D3不仅与机体的免疫相关，而且与肿瘤的发生发展和预后都有关系。25(OH)D3可以通过调节相关基因的表达抑制肿瘤细胞的生长[2]，故25(OH)D3缺乏可以诱发乳腺癌、肺癌和结肠癌等多种肿瘤。

国外研究显示，25(OH)D3可以通过与相应受体结合调控乳腺癌细胞的生长和转移[3]。本文研究显示，乳腺癌组患者外周血中25(OH)D3水平明显低于乳腺良性肿瘤患者和健康对照组患者，而乳腺良性肿瘤组与健康对照组外周血中25(OH)D3水平差异无统计学意义(P＞0.05)，提示25(OH)D3在乳腺癌的发生、发展中发挥着一定的作用。Lue等[4]认为体内的25(OH)D3水平降低与乳腺癌的发病相关，本研究与之相符。

孕激素受体(PR)是雌激素和雄激素受体结合后诱导的产物，PR可以抑制癌细胞的生长、浸润和转移[5]。在乳腺癌中，PR阳性预示着内分泌治疗效果较高，预后较好[6]。本文的研究结果显示，PR(+)乳腺癌患者外周血中25(OH)D3水平明显低于PR(-)患者，差异具有统计学意义(P＜0.05)。提示25(OH)D3可能通过另一种机制来调节了乳腺癌细胞的生长、发展与预后。

临床分期越高，细胞分化程度越差。一些研究显示，外周血中25(OH)D3水平在Ⅲ期和Ⅳ期明显低于Ⅰ期和Ⅱ期[7]。国外研究表明，25(OH)D3可以诱导乳腺癌细胞的分化，使其在生物学或者形态学上与成熟细胞接近，同时能够抑制乳腺癌细胞的转移和细胞生成[8-9]。而本文研究结果显示，Ⅱ期乳腺癌患者外周血中25(OH)D3的水平最高，Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ+Ⅳ期外周血25(OH)D3水平相比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。本研究中Ⅲ+Ⅳ期的病例较少，因为随着现代生活水平和医疗水平的提高，人们越来越注重日常的身体保健，乳腺癌也很少在Ⅲ期和Ⅳ期才被发现，后面应该加强对Ⅲ+Ⅳ的病例的研究，来进一步确认25(OH)D3与临床分期的相关性。而Ⅰ期与Ⅱ期相比较，Ⅱ期患者外周血25(OH)D3平明显高于Ⅰ期，差异具有统计学意义(P＜0.05)。Ⅱ期乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平比Ⅰ期患者高，此结果是否与年龄因素相关(Ⅱ期患者年龄多在50～65岁)还需进一步研究。本文统计提示年龄＞50岁的乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平明显高于年龄＜50岁的患者，差异具有统计学意义(P＜0.05)。现代生活节奏的加快，年轻人忙于事业而忽视了锻炼，体内25(OH)D3水平较低，也可能是乳腺癌发病呈年轻化的一个重要因素。

VEGF被公认为是促使肿瘤新血管生成的最重要生长因子之一。本文的结果显示，VEGF＜++的乳腺癌患者外周血中25(OH)D3的水平明显高于VEGF≥++的乳腺癌患者，差异具有统计学意义(P＜0.05)。这结果进一步预示了25(OH)D3在乳腺癌的发生、发展、转移和预后扮演着重要角色，有可能为临床治疗乳腺癌提供新的途径。

本文研究结果显示，乳腺癌患者外周血中的25(OH)D3水平与肿瘤的大小，有无淋巴结转移、ER、p53和Cerb-2是否阳性无明显关系，差异无统计学意义(P＞0.05)。

随着对25(OH)D3的抗肿瘤机制进一步深入研究，其对肿瘤的预防治疗作用日益受到关注。与放疗和化疗相比，其损伤小，无痛苦，可为临床乳腺肿瘤的辅助治疗提供新的思路。

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[4]Lue JK,Crew KD.Vitamin D and reduction of breast cancer risk[J]. Current Breast Cancer Reports,2015,7(2):90-97.

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Clinical significance of detecting 25-hydroxyvitamin D3in peripheral blood of patients with invasive breast cancer

ZHANG Hui-fang,GONG Hua.Department of Clinical Laboratory,Wuxi Maternal and Child Health Care Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Wuxi 214002,Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo investigate the level of 25-hydroxyvitamin D3(25(OH)D3)in the peripheral blood of patients and to reveal the occurrence and development of invasive breast cancer.MethodsOne hundred and twenty-two patients with invasive breast cancer,forty healthy volunteers and forty patients with benign breast tumor admitted in our hospital between January 2015 and December 2015 were recruited,and breast cancer patients were diagnosed by pathological examination.The level of 25-hydroxyvitamin D3in their peripheral blood samples were detected by enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)method,and the results were statistically analyzed.Immunohistochemistry staining was used to determine the expression level of estrogen receptor(ER),progestrone receptor(PR),vascular endothelial growth factor(VEGF),Cerb-2 and p53 protein in 122 patients with invasive breast cancer,then the relationship between these protein level and 25-hydroxyvitamin D3was analyzed respectively.Results(1)The value of 25-hydroxyvitamin D3in invasive breast cancer patients was(34.9±12.8)nmol/L,which was significant lower than(46.9± 11.3)nmol/L in benign breast tumor patients and(51.4±13.2)nmol/L of healthy volunteers(P＜0.05).(2)The 25-hydroxyvitamin D3level of the peripheral blood in patients with invasive breast cancer was significantly associated with age,PR,VEGF and clinical stage(P＜0.05),but not with the metastasis of lymph node,tumor size,the level of ER, Cerb-2,and P53(P＞0.05).Conclusion25-hydroxy vitamin D3might play an important role in the occurrence and development of breast cancer.

25-hydroxyvitamin D3[25(OH)D3];Breast cancer;Estrogen receptor(ER);Progestrone receptor (PR);Vascular endothelial growth factor;Human epidermal growth factor receptor 2;Tumor suppressor gene p53

R737.9

A

1003—6350（2017）05—0774—03

2016-06-08)

张慧芳。E-mail：78224548@qq.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.030