MMP-9在舌癌中的表达及其意义

习利军，吴菊芳，王利宏，刘建林，陈坤，张铁柱

(1.深圳市福田区中医院口腔科，广东 深圳 518034；2.深圳市福田人民医院影像科，广东 深圳 518033；3.广东医学院附属医院口腔科，广东 湛江 524001)

MMP-9在舌癌中的表达及其意义

习利军1，吴菊芳2，王利宏1，刘建林1，陈坤3，张铁柱3

(1.深圳市福田区中医院口腔科，广东 深圳 518034；2.深圳市福田人民医院影像科，广东 深圳 518033；3.广东医学院附属医院口腔科，广东 湛江 524001)

目的研究MMP-9在舌癌(TSCC)组织中的表达及其与临床病理因素的关系。方法收集2000年1月至2010年1月广东医学院附属医院口腔科舌癌患者手术切除包埋石蜡标本60例，其中有15例取癌旁正常组织及21例有转移淋巴结，应用免疫组化PV9000法分别检测舌癌组织、癌旁组织及转移淋巴结中MMP-9的表达。结果MMP-9在TSCC组织中的阳性表达率为78.33%(47/60)，明显高于癌旁组织的20.00%(3/12)，差异有统计学意义(P＞0.05)；在舌癌的低分化组中MMP-9阳性表达率为88.00%(22/25)，明显高于高分化组的71.42%(25/35)，差异有统计学意义(P＞0.05)；TSCC在有颈淋巴结转移组中MMP-9阳性表达率为90.48%(19/21)，明显高于无颈淋巴结转移组织中的71.79%(28/39)，差异有统计学意义(P＞0.05)；在TSCC原发灶与淋巴结转移灶中的MMP-9阳性表达率分别为78.33%(47/60)、76.19%(16/21)，差异无统计学意义(P＞0.05)。结论MMP-9在TSCC组织中和有颈淋巴结转移组织中高表达，MMP-9可作为评估舌癌浸润和转移的重要指标。

舌癌；MMP-9；免疫组织化学

近些年研究表明，在肺、乳腺、肝、结肠、前列腺等多种恶性肿瘤中均检测出MMP-9阳性表达，并与这些肿瘤的侵袭浸润和转移有着密切联系[1-2]。TSCC是口腔颌面部常见的恶性肿瘤，其恶性程度较高，呈浸润生长而且也易发生颈部淋巴结转移，在TSCC中MMP-9是否也呈阳性高表达，是否与其早期颈部淋巴结转移有关，目前国内研究报道不多。本研究采用免疫组化PV9000法检测口腔TSCC组织中MMP-9的表达情况，以探讨MMP-9在TSCC中的表达及其与颈淋巴结转移的关系。

1 资料与方法

1.1 纳入标准 收集广东医学院附属医院口腔科2000年1月至2010年1月手术患者TSCC石蜡包埋切片，其中60例TSCC组织、21例有转移淋巴结、15例带有癌旁正常组织(所有标本经患者知情同意)，所有病例采取手术治疗，术前均未做过放疗或化疗且全部患者病例均经病理确诊为TSCC。60例TSCC中男性32例，女性28例；平均年龄52岁；有颈淋巴结转移者21例，无颈淋巴结转移者39例；病理学分级：35例高分化，17例中分化，8例低分化。

1.2 所用试剂与染色方法 所用试剂：PV9000两步法免疫组化试剂盒、MMP-9单克隆抗体及DAB显色试剂盒(国产)，对照组则以PBS代替一抗作阴性对照；阳性对照用TSCC组织阳性切片。由同一医生严格按说明进行操作。

1.3 结果判定 随机选取5个高倍视野(×100)，计数500个癌细胞中阳性细胞数，并计算其占癌细胞的百分数(MMP-9染色阳性显示在细胞浆或部分细胞质有棕黄色或棕褐色颗粒沉着)。阳性细胞数在51%以上者为强性(+++)，阳性细胞数在26%～50%者为阳性(++)，阳性细胞数在10%～25%者为弱阳性(+)，阳性细胞数＜10%者为阴性(-)。

1.4 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 MMP-9在TSCC组织及癌旁组织中的表达 MMP-9在TSCC组织中的阳性表达率为78.33% (47/60)，明显高于癌旁正常组织的20.00%(3/15)，有统计学意义(χ2=18.38，P＜0.05)，见表1。在癌旁正常组织中MMP-9分布于胞浆内(图1)；在舌癌组织中MMP-9明显表达呈灶状或团片状(图2)。

表1 TSCC及癌旁组织中MMP-9的表达（例）

图1 MMP-9在正常黏膜中阴性表达(PV9000法×100)；图2 MMP-9阳性表达主要位于肿瘤细胞浆（PV9000法×100）

2.2 MMP-9表达与临床组织病理学分级关系 MMP-9在舌癌中/低分化组中阳性表达率为88.00%(22/25)，明显高于高分化组的71.42%(25/35) (P＜0.05)，TSCC在有颈淋巴结转移组中MMP-9阳性表达率为90.48%(19/21)，明显高于无颈淋巴结转移组织中71.79%(28/39)，见表2。

2.3 TSCC原发灶与淋巴结转移灶中MMP-9表达 MMP-9在TSCC原发灶的阳性表达率为78.33% (47/60)，MMP-9在淋巴结转移灶中阳性表达率为76.19%(16/21)，差异无统计学意义(χ2=0.02，P＞0.05)，见表3。

表2 TSCC中MMP-9的表达与其临床病理因素的关系（例）

表3 TSCC原发灶与淋巴结转移灶中MMP-9表达（例）

3 讨 论

3.1 TSCC组织中MMP-9的表达 MMP-9属于基质金属蛋白酶家族，主要功能是降解和重塑细胞外基质的动态平衡，其主要降解产物为构成基膜重要骨架成分的Ⅳ型胶原，是基质金属蛋白酶主要成员之一。肿瘤细胞从原发肿瘤病灶脱离后向周围、远处组织浸润侵袭和转移的过程中，关系到肿瘤细胞穿过ECM屏障、血管壁的基底膜及穿出血管壁进入人体另一组织的过程。MMP-9通过对细胞外基质、基底膜的降解和重塑而促进肿瘤癌细胞的侵袭浸润，是降解ECM等成分的关键性酶[3-4]。MMPs能降解ECM中的大部分成分，在肿瘤的浸润侵袭和淋巴结转移中有重要作用。肿瘤癌细胞中MMP-9产生的差异表明了癌细胞侵袭浸润、转移能力的大小。Jordan等[5]在研究对比口腔上皮异常增生和口腔鳞状细胞癌中MMP-9mRNA水平时发现，口腔癌中MMP-9mRNA水平明显高于上皮异常增生，而且在上皮异常增生恶变为口腔癌病例中MMP-9mRNA水平明显高于没有恶变的病例。本研究显示：高分化组中MMP-9阳性表达率显著低于中/低分化组，表明在TSCC组织中MMP-9的阳性表达率与其病理组织学分级相关。因此，MMP-9可作为检测TSCC的标志物。

3.2 MMP-9在TSCC中的表达与颈淋巴结转移关系 本研究在有颈淋巴结转移组中MMP-9阳性表达率要显著高于无颈淋巴结转移组，有统计学意义(P＜0.05)，结果与大多数报道一致[5]。黄喆等[6]研究表明MMP表达与病理分级和OSCC颈淋巴结转移均相关；在不同浸润方式的舌鳞状细胞癌中MMP-9的表达不同，在Ⅲ、Ⅳ型的舌鳞状细胞癌中，MMP-9的表达明显高于Ⅰ、Ⅱ型，而且临床易出现淋巴结转移。本研究显示MMP-9在肿瘤细胞及其间质组织均有高表达，其阳性表达多呈弥散状、片状或灶状，肿瘤细胞大多位于肿瘤癌巢的边缘，表明在肿瘤病灶的周围肿瘤细胞更具有侵袭性。肿瘤癌细胞的侵袭和转移的病理过程是非常复杂的，但BM和ECM的降解和重塑是其必然过程[7]。MMP-9能降解BM和ECM，这些基质降解酶的产生能促进肿瘤癌细胞的侵袭浸润和转移。陈坤等[8]研究也表明MMP-9的过度表达与肿瘤组织的转移和浸润呈正相。Elahi等[9]对48例口腔鳞癌患者应用免疫组织化检测MMP-9表达，结果显示MMP-9表达与口腔鳞癌侵袭与转移呈正相关。MMP-9不仅能够降解ECM和基底膜导致癌细胞侵袭与转移，而且还可通过细胞因子、细胞表面蛋白、细胞粘附蛋白及生长因子与周围细胞表面等发生相互反应，促进癌细胞的侵袭与转移。因此，MMP-9可作为评估舌癌浸润和转移的重要指标。

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Expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma and its significance

XI Li-jun1,WU Ju-fang2,WANG Li-hong1,LIU Jian-lin1,CHEN Kun3,ZHANG Tie-zhu3.1.Department of Stomatology,Futian District Hospital of TCM of Shenzhen,Shenzhen 518034,Guangdong,CHINA;2.Department of Radiology,Futian People's Hospital of Shenzhen, Shenzhen 518033,Guangdong,CHINA;3.Department of Stomatology,the Affiliated Hospital of Guangdong Medical University,Zhanjiang 524001,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo study the expression of matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in tongue squamous cell carcinoma(TSCC)tissues and its relationship with clinical pathological factors.MethodsA total of 60 cases of surgical resection of paraffin embedded specimens,which came from tongue cancer patients who admitted to Department of Stomatology of the Affiliated Hospital of Guangdong Medical University from January 2000 to January 2010, were collected as the research objects.At the same time,15 cases of tumor-adjacent normal tissues and 21 cases of metastatic lymph nodes were also included in this research.The expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma,tumor-adjacent tissues and metastatic lymph node was detected by immunohistochemistry(PV9000).ResultsThe positive expression of MMP-9 in TSCC tissues was 78.33%(47/60),which was significantly higher than 20.00%(3/12)in tumor-adjacent tissues(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in tongue squamous cell carcinoma/low differentiation group was 88.00%(22/25),which was significantly higher 71.42%(25/35)in high differentiation TSCC group(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in cervical lymph node metastasis was 90.48%(19/21),which was significantly higher than 71.79%(28/39)in without lymph node metastasis tissues(P＜0.05).The positive expression of MMP-9 in focal TSCC in primary tumor and lymph node metastasis rate were 78.33%(47/60),76.19%(16/21),respectively,and there was no significant difference(P＞0.05).ConclusionMMP-9 has the high expression in TSCC and cervical lymph node metastasis tissues,which can serve as an important indicator to evaluate the invasion and metastasis of tongue cancer.

Tongue squamous cell carcinomas(TCSS);Matrix metalloproteinase-9(MMP-9);Immunohistochemistry

R739.86

A

1003—6350（2017）05—0747—03

2016-06-26)

习利军。E-mail：xilijun_001@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.020