浅谈猪病检测中多重PCR技术的运用

马忠贤

(清丰县畜牧兽医服务中心,河南清丰457300)

浅谈猪病检测中多重PCR技术的运用

马忠贤

(清丰县畜牧兽医服务中心,河南清丰457300)

多重PCR技术具体指的是一种分子诊断技术,通过该技术的应用可以在同一个反应体系中在同一时间内进行多个目的片段的扩增,具备有特异,敏感,快捷等众多优势,非常适合在大量的临床样本中展开快速检测。本文讲述了多重PCR技术的一些技术原理,以及进猪病检测中多重PCR技术的具体应用进行了分析。

；猪病检测;多重PCR技术;应用

聚合酶链式反应反应，也用PCR表示，具体是指体外酶促进合成的一种反应，可以实现对特点DNA序列的大量扩增，是在生物学技术中经常会被用到的一个技术，现阶段已经在生命科学的多个领域中得到了应用。伴随着人们对PCR技术的不断深入研究，PCR技术已经成功衍生出了多种新技术，特别是多重PCR技术，该技术可以在病原诊断中发挥出非常重大的作用。

1 多重PCR技术的一些基本原理

多重PCR技术在范围内属于PCR众多技术中的其中一个，最早是在1988年提出的，多重PCR技术具备有实验进程比较快，试验成本非常高，高效快捷，敏感性强，特异性强等多种优点，如今已经在微生物，动物以及人类研究中都得到了非常广泛的应用。该技术的原理和PCR技术的原理几乎一样，即可以在同一个反应体系中进行多对或者是两对特异性引物的加入，同时使DNA序列或者是目的基因得以扩增。

2 猪病检测中多重PCR技术的应用

2.1 常规猪病的诊断

多重PCR技术在常规猪病诊断中的应用主要包括有两个方面，其一，对病毒进行常规检测。焦洋等学者以猪流行性腹泻病毒的基因序列，猪博卡病毒的基因序列以及猪传染性胃肠炎的基因序列作为基础进行了三对特异性印务的设计，从而建立了这三种病毒基因的多重PCR方法，通过该方法对60份的临床样品进行检测，从而得出猪博卡病毒的基因序列阳性率是21.7%，猪流行性腹泻病毒的基因序列阳性率是6.7%，猪传染性胃肠炎的基因序列阳性率是1.6%。Ogawa等学者展开了猪水泡病毒1型（SUHV-1），猪轮状病毒A型（PPV，PRRSV，JEV，PEDV，GAR），检测盖塔病毒（GETV）的9重PCR检测方法的建立，并且用75份临床样本对该方法展开检测，发现结果和普通PCR技术的结果没有差异，因此可以证明该方法具备有非常良好的特异性以及灵敏性。其二，对细菌的常规检测。Rossi等学者将SCAR片段作为基础进行三重PCR的建立从而实现对胸膜肺炎放线杆菌，多杀性巴氏杆菌以及嗜血杆菌的建立，得出该方法和普通的PCR所得方法结构基本保持一致，因此可以证明多重PCR技术在流行性冰雪以及诊断病学中发挥着非常重要的意义。安俊卿等学者以大肠埃希菌23rRNA基因，多杀性巴氏杆菌，沙门菌hut基因为基础进行三对特异性引物的合成，借助优化反应的条件进行PCR技术的建立，最终证明该方面具备有稳定性比较好，灵敏度比较高，特异性比较强等优势，可以在混合的众多病料中非常清楚的将3中病原菌成功的检测出来[1]。

2.2 在猪病分型方面的鉴别

多重PCR技术在病猪分型方面的检测也可以分为以下两种，其一，在病毒分型方面的检测，王晓波等学者将GenBank中所公布出来的序列作为基础对呼吸综合征病毒，经典猪繁殖，高致病猪繁殖展开了特异性引物的设计，并且讲多重RT-PCR技术展开的建立以及优化，结果发现可以借助这两种=对引物实现对三种病毒的实时检测。徐磊等学者将源性病毒2型b序列，2型a序列，圆形病毒1系列展开特异性引物的设计，同时在优化反映条件之下展开了三重PCR技方法的建立，结果可以证明该方法具备有引物特异性非常良好，灵敏性非常高等特点，同时各个引物之间并没有出现各类交叉反映。其二，对细菌分型的检测。LiuZ等学者借助全基因组测序展开了特异性引物的设计，从而实现了对多重PCR技术的建立，采用该方法对链球菌展开鉴别诊断，最终结果是，通过多重PCR四次之后，成功的将33种血清型鉴别出来[2]。

2.3 和其他技术的结合以及创新应用

其一，和荧光定量PCR技术相结合。王乃富[3]等学者价将猪水泡病病毒，水泡性口炎，口蹄疫病毒的蛋白编码基因作为依据进行了特异性探针以及引物的设计，从而建立可以可以在同一时间对三种病毒展开检测的多重荧光RT-PCR检测方法。通过扩增结果显示，该方法具有特异性良好并且灵敏度非常高等特点，可以实现对混合感染病毒的同一时间的检测。其二，和LAMP技术的有效结合，Park等学者对可以使猪换上增生性肠病的劳森氏菌中包含的不同基因展开了四段引物的设计，并且将LAMP技术和PCR技术展开有效的结合，最后得出结果证明该方法具备有特异性性特别强的优势，同时该技术的灵敏性和RT-PCR进行比较有明显的提升，使检测时间以及试剂成本都得到了节约[4]。

3 结语

综上所述，多重PRC技术具备有灵敏度比较高，特异性非常好，高效并且快速等众多优点，可以在流行病以及病原检测方面发挥出费查清重要的作用，因此需要人们给予多重PCR技术一定的重视，增加该技术和其他技术的结合，从而使多重PCR技术可以获得更加广泛的应用，使多重PCR技术可以在病学研究中发挥出更大的价值。

[1] 王隆柏，张志刚，苏永裕，等.5种猪病多重PCR检测方法的建立[J].中国畜牧兽医，2014，41（2）：21-25.

[2] 马锐，黄小波，杨国淋，等.多重PCR技术在猪病检测中的应用[J].四川畜牧兽医，2016，43（5）：31-33.

[3] 杨显荣.猪病诊断和防治过程中PCR技术的应用[J].当代畜禽养殖业，2016，（11）：8，9.

马忠贤（1964—），男，清丰人，兽医师，主要从事畜禽疫病防治技术推广。