奶牛结核病的综合防治

周静靓

(上海市崇明区动物疫病预防控制中心,上海202150)

奶牛结核病的综合防治

周静靓

(上海市崇明区动物疫病预防控制中心,上海202150)

奶牛结核病是由结核分支杆菌引起的人畜共患慢性传染病。世界动物卫生组织(OIE)将其列为B类动物疫病,规定必须强制报告,我国则将该病列为二类动物疫病。结核病是一种古老的疾病,其发展经历了上升,平稳,爆发等多个历程,近年来全球结核病有所回升。

奶牛;结核病;防治

1 奶牛结核病的危害

据世界卫生组织统计资料，1986～1990年间41.5%的发展中国家和25%的发达国家结核病的疫情在上升。牛结核病虽然在许多发达国家已被控制，但在许多发展中国家，它依然威胁着亿万人民的健康，其中包括我国在内。至今，牛结核病所造成的损失大于牛的其他各种疾病所造成损失的总和。世界卫生组织专家委员会第七次会议报告指出：“除非扑灭牛结核病，否则人类结核病的控制是不会成功的”。

结核病己经给我国的养牛业造成了巨大的经济损失，尤其是对奶牛的危害极其严重。患病奶牛的寿命缩短，产奶量显著降低，母牛常常不能怀孕，使役牛患病后逐渐消瘦，劳动能力减弱，最后被迫淘汰。同时随着人们对奶食品需求量的日益增加，奶牛结核病与人身健康关系更为密切。国外的一项报告表明：曾在100个患结核病的病人中，发现有26例是从动物感染上本病的，在这26人中，15岁以下的竟占了20例，他们得病都与不慎饮用含结核杆菌的牛奶有关。这将严重打击人类对奶类产品的消费信心，最终直接影响打击到行业的信心，因此牛结核病已成为影响我国养牛业健康发展，可持续发展的重大障碍。

2 奶牛结核病的流行情况

结核病曾是人类历史上最猖獗的传染病之一，直到结核菌发现及抗结核药物出现后，人类结核病才有所平缓。我国很早就有结核病的记载，其中家畜结核病在我国流行历史悠久，与人的结核病呈平行关系，特别是进入40年代，由于从国外大量输入奶牛，有许多结核病牛混入其中，从而使我国家畜结核病的流行更为广泛。50年代我国出现牛结核病的大爆发，如1955年检出阳性率达36.4%，以后由于人们长期努力并采取有效措施，使结核阳性率大大下降并控制在较低水平。70年代，随着奶牛业的不断发展，奶牛养殖业规模不断扩大，牛结核病的流行也达到了历史最高峰，个别地区检出阳性率高达67.4%。虽然80年代牛结核病的流行有所缓和，但感染率仍然比较高。

3 奶牛结核病的主要诊断技术和研究发展

牛结核病的诊断方法有很多，目前的研究发展及方法主要有以下几种：

（1）临床症状和病理变化诊断：牛结核病临床症状不典型，感染前期不出现临床症状，而感染后期常出现体弱、厌食、消瘦、呼吸困难、淋巴结肿大和咳嗽等，这些症状在其他疾病也可看到，故早期临床诊断不易获得准确结果。病理学检查可以根据特征病变确诊，如干酪样坏死、钙化、上皮样细胞、多核巨细胞和吞噬细胞等，但必须在宰杀后进行。

抗酸染色法：病料涂片后进行抗酸染色，显微镜检查抗酸性杆菌，本菌的细胞壁不仅有肽聚糖，还有特殊的糖脂，因为糖脂的影响，致使革兰氏染色不易着染，但能抵抗30ml/L酸酒精的脱色作用，抗酸染色为红色，常用齐尼二氏染色法，也可用荧光抗酸染色法。如果组织内有抗酸性微生物，并且具有典型的组织学病变，则可以做出初步诊断。抗酸染色法阳性率比较低，但它作为一种传统的检测方法，具有假阳性率低，价格低廉，操作简便等特点，在牛场中就可进行，所以仍有一定的实用价值。

（2）细菌分离培养法：用选择性培养基分离分支杆菌，再通过培养和生化试验来鉴定，也可采用核酸探针和聚合酶链式反应法。如果因培养物污染或其他特殊原因，可通过豚鼠接种，再分离鉴定来证实。常用的培养基是罗杰二氏培养基、改良罗杰二氏培养基、丙酮酸培养基和小川培养基。但是，在上述培养基中，结核菌需14～15h分裂一次，这使得病原学检查所需周期长，一般需10～30d才能看到菌落，阳性率不高，所以在实际工作中很少被采用。

（3）PCR：PCR技术自1983年发明以来，显示出了灵敏度高、特异性强、快速等特点，已经被广泛地用于检测疑似结核病病人的临床样品（主要是痰液），近年来在检测牛结核病方面也有应用。Ritelli M等报道，将人的一个巨噬细胞系用来从临床样品中分离扩增分支杆菌，收集培养后的细胞，再通过半套式PCR检测培养物中牛分支杆菌的特异性插入序列IS6110，可以确定有没有牛分支杆菌感染。刘思国等根据已经发表的牛分支杆菌的pncA基因序列，设计引物可扩增294 bp目的片段，建立了特异性检测牛分支杆菌的PCR方法，该方法特异性强，敏感度可达到50 pg，阳性样品符合率为90%，阴性样品符合率为100%，而且有利于结果的判定和临床样品的直接检测。但是，商品化试剂盒和各科研部门研制的方法检测结果差异较大。含有少量细菌的样品降低了检测结果的可靠性。由于去除污染的方法、DNA提取步骤、去除酶抑制剂技术、内部和外部控制以及交叉污染的防止措施等差异使得结果千差万别。该方法还需要标准化和更加严格的操作步骤，以克服实验过程中容易出现的假阳性或假阴性问题。

（4）迟发性变态反应试验：目前临床上应用最广泛的是迟发性变态反应试验，即结核菌素试验，它是测定牛结核病的标准方法，也是国际贸易的指定方法。对牛皮内注射结核菌素，并在72h后测量注射部位肿胀程度。美国就是采用扑杀结核菌素试验阳性牛而消灭了牛结核病。它的技术要求不高，但是工作量大，检出时间长，操作麻烦，许多因素都可以降低该方法的敏感性和特异性。由于提纯结核菌素（PPD）皮肤试验个体差异较大，注射剂量和PPD批号对牛个体反应均有差异，会呈现不同的皮肤反应，其结果以皮肤厚度的增加数为准，易造成人为误差。结核菌素试验阳性仅能表明在过去某一时间曾经发生过的一次结核菌感染，它无法证明目前的结核菌感染是否为活动的，或仅为在机体的某处有活的结核菌存在。当动物发生某些细菌或病毒的感染时，或者使用某些药物治疗及一些不明原因，也可能造成假阳性或假阴性结果。部分研究者还发现，该法存在着极强的非特异性，即在相当数量的结核菌素试验阳性牛中，既找不出特征病变，又不能分离出结核菌，或仅仅分离出非典型的分支杆菌，重复检疫时阳性率下降，而且妊娠母牛检出率低，给基层的扑杀工作带来困难，因此在实际工作中用于诊断牛结核病并不十分理想。

牛结核病的诊断方法虽然有很多，但无论哪种检测方法都有其优点和缺点，如与细胞免疫相应的淋巴细胞增生试验和γ-干扰素试验或者因为操作繁琐，或者因为成本高，所用试剂含有放射性物质，难以在牛结核病的常规检测中运用；分子生物学检测技术需要贵重的仪器设备，技术复杂，对实验室和操作人员的要求较高等原因，使其在常规牛结核病普查中难以运用；目前作为法定检疫方法，结核菌素试验仍然是普查检疫中运用的方法。

4 奶牛结核病的防治

虽然我们对于奶牛结核病在理论上已有相当的研究，知道了其危害以及一些检测的方法，但是却还是缺乏一种快速精确确诊的手段以及有效控制其的一些措施，导致其不能得到有效控制，并且由于各种因素的存在，近年来，其发展趋势更是不容乐观，特别是随着人民生活水平的提升，奶产品消费量迅速上升，市场巨大，养牛业迅猛发展，饲养奶牛的积极性也空前高涨，规模不断扩大，但相应的防控疫病能力却停滞不前，导致各类恶性疾病时有发生，而病牛又由于各种利害关系又不能做到严格控制，甚至出现出售病牛情况，导致传染源人为转移，更是让结核病防控难上加难。

另一方面让人担心的是随着全国大市场、大流通的进一步形成，各地失去了有效防控疾病的地域屏障优势，加上奶牛交易频繁，转运奶牛手续不齐全情况时有发生，甚至结核病病牛也发生大范围流动，直接导致了各地发生结核病疫情的潜在风险越来越大，所以加强奶牛结核病的监测检疫工作，严格扑杀病牛是当前紧迫的一项工作，对防止结核病的发生，扩散和传播，对促进奶牛业的持续稳定健康发展和确保人民群众身体健康具有十分重要和深远的意义，且迫在眉睫。 因此，农业部规定，奶牛结核病防治必须坚持”预防为主”的方针，采取”监测、检疫、扑杀、消毒”相结合的综合性防治措施，每年定期开展奶牛结核病监测，从而达到加强对奶牛结核病的防治，有效控制该病疫情，保障畜牧业发展和人民身体健康，各地也更应该制定适合本地区更为严格的措施，防止结核病的发生，杜绝一切可能引起结核病的因素，保证辖区的牛群干净健康。

[1] 杨广.奶牛结核病的防治[J].草业与畜牧，2012，（8）：52-53.