上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻译区rs16917496位点单核苷酸多态性观察

李腾华，史淑红，梁文娟，李艳芳

(河北医科大学第二医院，石家庄050000)

上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻译区rs16917496位点单核苷酸多态性观察

李腾华，史淑红，梁文娟，李艳芳

(河北医科大学第二医院，石家庄050000)

目的观察上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻译区rs16917496位点单核苷酸多态性变化，并探讨其与患者预后的关系。方法选取100例上皮性卵巢癌患者为病例组，100例健康体检者为对照组，检测并比较两组受检者SET8基因3′非翻译区rs16917496位点单核苷酸多态性。将病例组患者按基因型分组，对各亚组进行生存分析，比较各组3年生存率。结果病例组基因型CC型5例、CT型52例、TT型43例，等位基因C频率31%、T频率69%。对照组基因型CC型13例、CT型38例、TT型49例，等位基因C频率32%、T频率68%。两组CC、CT基因型构成比相比，P均<0.05；TT基因型构成比相比，P>0.05；两组中 T、C等位基因频率无统计学差异(χ2=0.046,P=0.830)。病例组SET8基因3′非翻译区rs16917496位点基因型为CC、CT、TT患者3年生存率分别为 80%(4/5)、74.1%(40/54)、58.5% (24/41)，三种基因型患者3年生存率相比，P>0.05。结论上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻译区rs16917496位点基因型CC构成比低于正常女性。SET8基因3′非翻译区rs16917496位点基因型为CC、CT、TT的上皮性卵巢癌患者3年生存率相近。

SET8基因;单核苷酸多态性；卵巢肿瘤；上皮性卵巢癌

SET8基因又称为SETD8、PR-SET7或KMT5a，编码组蛋白 H4赖氨酸 20 单甲基转移酶，这种酶通过甲基化组蛋白进而调节基因的转录、细胞的生长周期及肿瘤的发生发展[1,2]。SET8 基因3′非翻译区(3′UTR)的 miR-502 结合区域内存在rs16917496 位点单核苷酸多态性(SNP)，以往研究发现该位点单核苷酸多态性与肺癌[3]、白血病[4,5]、肝癌[6]、乳腺癌[7]等多种肿瘤的发生、发展相关，但是其与上皮性卵巢癌发生及预后的关系尚不明确。本研究观察了上皮性卵巢癌患者SET8基因3′非翻译区rs16917496位点SNP，并探讨其与预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2008年1月～2012年12月收治的100例上皮性卵巢癌患者为病例组，患者年龄12～76岁。均经术后病理检查证实为上皮性卵巢癌，临床分期Ⅰ期18例、Ⅱ期24例、Ⅲ期50例、Ⅳ期8例。患者术前均未接受任何治疗。另选同期体检且年龄匹配的健康女性100例为对照组。本研究已获我院医学伦理委员会批准，患者均已签署知情同意书。

1.2 SET8 基因3′UTR rs16917496位点SNP观察 病例组患者术前、对照组患者体检时抽取外周血3 mL，按照DNA提取试剂盒说明书操作提取基因组DNA，用分光光度计测算DNA的浓度及纯度，取A260 nm/A280 nm为1.8～2.0的样品用于后续实验。登陆NCBI 数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp/)查找SET8 基因 3′UTR rs16917496 位点的核苷酸序列，设计 PCR 扩增引物。上 游 引 物 为 ：5′-CCTGGTCAGTGGTCAGCAAAT-3′，下 游 引 物 为 ： 5′-CTGGGAAACACGCTCAAAATC-3′。根据预实验确定PCR最佳反应条件及反应体系，反应体系：Dream Taq Green Master Mix 12.5 μL，上游引物( 10 μmol/L) 1 μL, 下游引物( 10 μmol/L) 1 μL, DNA模板 2 μL, 无核酸水8.5 μL。反应条件: 94 ℃、3 min, 94 ℃、30 s , 60 ℃、30 s , 72 ℃、40 s， 72 ℃、3 min。共38个循环。取5 μL PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳，观察有无清晰条带，如有清晰条带则可说明样品成功扩增，若无清晰条带则更改PCR条件重新扩增。将扩增成功的 PCR 产物及上下游引物一起送往上海生工生物工程技术有限公司进行测序，得到每例受检者的基因型。

1.3 随访方法 病例组患者术后均采用电话随访3年，无失访者。

1.4 统计学方法 采用 SPSS 21.0 统计软件。病例组和对照组基因型和等位基因频率比较采用χ2检验和 Fisher 确切概率法。将病例组患者按基因型分为CC、CT、TT组，采用Kaplan-Meier法进行生存分析，并计算SET8基因3′非翻译区rs16917496位点不同基因型患者3年生存率。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

病例组基因型CC型5例、CT型52例、TT型43例，等位基因C频率31%、T频率69%。对照组基因型CC型13例、CT型38例、TT型49例，等位基因C频率32%、T频率68%。两组CC、CT基因型构成比相比，P均<0.05；TT基因型构成比相比，P>0.05；两组 T、C等位基因频率相比，P>0.05。

随访3年，病例组32例患者死亡。病例组CC、CT、TT基因型患者3年生存率分别为80%(4/5)、74.1%(40/54)、58.5%(24/41)，各基因型的患者3年生存率相比，P>0.05。

3 讨论

卵巢癌是恶性程度最高的女性生殖系统肿瘤，根据2016年美国癌症统计报告，卵巢癌仍位居妇科肿瘤死因首位[8]，由于早期诊断困难、高复发率以及复发性卵巢癌难以治疗等原因，卵巢癌患者的预后很差，70%的晚期卵巢癌患者5年生存率不足30%[9]。而上皮性卵巢癌占卵巢癌的80%以上。目前，对于复发性卵巢癌患者仍缺乏有效的治疗手段，治疗目的主要在于尽量延长无进展生存期(PFS)，主要的治疗方法仍是肿瘤细胞减灭术和化疗。随着肿瘤发病机制研究的逐步深入，分子靶向治疗也不断取得新的进展。

miRNA是一类高度保守的小分子非编码RNA，可作为癌基因或抑癌基因调节多种基因的表达[10]。最近的研究表明，SNP或突变的miRNA结合位点可能通过改变miRNAs的表达而影响肿瘤的发病风险和结局[11]。Yu等[12]通过病例对照研究发现了12个在人类多种肿瘤中等位基因频率异常的miRNA 结合位点SNP，SET8基因 miR-502 结合位点就是其中之一。Yang等[13]通过研究发现，SET8基因3′UTR多态性位点rs16917496 T/T基因型提高了中国人群非小细胞性肺癌的发病率。Ding等[14]研究表明rs16917496多态性与小细胞型肺癌的发病风险无相关性，但是，C/C+C/T基因型是小细胞型肺癌患者预后的独立危险因素。Song等[15 ]发现，SET8 C/C基因型能够降低绝经前妇女患乳腺癌的风险，而C/C基因型和T/T基因型与绝经后妇女患乳腺癌的风险无明显关联，同时还发现，该多态位点通过调节SET8基因的表达从而导致乳腺癌的发病。

本研究结果显示两组CC、CT基因型构成比有统计学差异，表明rs16917496位点基因型与上皮性卵巢癌患者的发病风险相关。影响卵巢癌患者预后的因素非常复杂，临床分期、组织学分级等均有可能影响患者的预后情况。本研究并未证实SET8基因3′端rs16917496位点SNP与卵巢癌患者的预后有关，可能的原因包括：①由于不同原因引起的癌症和肿瘤发展过程的多样性导致该SNP可能对不同类型的肿瘤具有不同的影响；②我们的研究也有一定的局限性，比如相对较小的样本量和部分病例缺乏完整的家族史。要想更充分地评估基因变异与肿瘤预后之间的关系，需要更大规模和更深入的研究，以获得更确凿的数据。

虽然我们的研究尚不能证明SET8基因3 ′非翻译区rs16917496位点SNP可作为卵巢癌预后的参考指标，但是研究表明SNP与卵巢癌的发病风险有一定关联，如果我们能够更深入的研究以明确其发病机制，将会对高危人群的早期筛查及制定治疗方案起着十分重要的作用。

[1] Xu J, Yin Z, Gao W, et al. A polymorphism at the miR-502 binding site in the 3′ untranslated region of the SET8 gene is associated with the outcome of small-cell lung cancer[J]. PLoS One, 2013, 8(10):77024.

[2] Mohammad H, Maryam SN, Majid N, et al. Association of functional polymorphism at the miR-502-binding site in the 3′untranslated region of the SETD8 gene with risk of childhood acute lymphoblastic leukemia, a preliminary report[J]. Tumor Biol, 2014, 35(10):10375-10379.

[3] Yang SD,Guo HY,Wei BJ, et al. Association of miR-502-binding site single nucleotide polymorphism in the 3′-untranslated region of SET8 and TP53 codon 72 polymorphism with non-small cell lung cancer in Chinese population[J]. Acta Biochim Biophys Sin,2014, 46(2): 149-154.

[4] Diao L,Su H,Wei G,et al. Prognostic value of microRNA 502 binding site SNP in the 3′-untranslated region of the SET8 gene in patients with non-Hodgkin′s lymphoma[J]. Tumori, 2014,100(5):553-558.

[5] Hashemi M, Sheybani-Nasab M, Naderi M, et al. Association of functional polymorphism at the miR-502-binding site in the 3′ untranslated region of the SETD8 gene with risk of childhood acute lymphoblastic leukemia, a preliminary report[J]. Tumour Biol,2014,35(10):10375-10379.

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[7] Song F, Zheng H, Liu B, et al. An miR-502 Binding Site Single-Nucleotide Polymorphism in the 3′-Untranslated Region of the SET8 Gene is Associated with Early Age of Breast Cancer Onset[J]. Clin Cancer Res, 2009, 15(19):6292-6300.

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[15] Song F, Zheng H, Liu B, et al. An mir-502-binding site single-nucleotide polymorphism in the 3′-untranslated region of the SET8 gene is associated with early age of breast cancer onset[J]. Clin Cancer Res, 2009,15(19):6292-6300.

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.39.015

R711.75

B

1002-266X(2017)39-0051-03

河北医科大学第二医院科学研究基金(2h2201616)。

史淑红(E-mail：sshh3095@162.com)

2017-04-20)