冰冻与石蜡切片检测HER-2的对比探讨

陈晓童

(玉林市第一人民医院病理科，广西 玉林 537000)

冰冻与石蜡切片检测HER-2的对比探讨

陈晓童

(玉林市第一人民医院病理科，广西 玉林 537000)

目的 探讨冰冻剩余石蜡切片以及冰冻切片两种不同切片检测乳腺癌患者人类表皮生长因子受体-2(HER-2)的效果，并进行对比分析。方法 选择2014年3月至2016年3月乳腺癌患者45例，取每个患者送检的组织，制作为冰冻切片，冰冻剩余的作石蜡切片。2种切片均进行免疫组织化学染色，检测HER-2的蛋白表达。结果 HER-2检测结果中冰冻切片组阳性信号强于石蜡切片组，冰冻切片更能真实清晰地表达HER-2。结论 在对乳腺癌患者HER-2检测时，冰冻切片观察效果较好。

HER-2； 冰冻剩余石蜡切片； 冰冻切片

人类表皮生长因子受体-2(HER-2)是人类17号染色体上的原癌基因，是乳腺癌患者重要的预后以及HER-2靶向药物治疗的预测指标，经研究显示，HER-2阳性的患者肿瘤恶性程度比较大，且治疗效果相对较差，预后较差，但阳性患者使用HER-2靶性药物的治疗效果却比较好。因此，检测乳腺癌患者HER-2对于指导患者的预后以及治疗具有重要的意义[1]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择玉林市第一人民医院2014年3月至2016年3月乳腺癌患者45例，年龄25～60岁，取每个患者送检的组织，制作为冰冻切片，冰冻剩余组织作石蜡切片。2种切片均进行免疫组织化学染色，检测HER-2的蛋白表达。

1.2 方法

同一块组织先做冰冻切片进行HER-2免疫组化染色检测，然后把该块组织做成蜡块，进行石蜡切片后再进行HER-2免疫组化染色检测。把同一块组织所做的2种不同切片做的HER-2免疫组化染色检测结果进行对比分析。2种切片均采用MaxVision法进行染色。具体步骤如下：

1.2.1 冰冻切片制作

1)取新鲜的组织平放于冷冻头上，加适量OCT包埋剂，置于冰冻切片机冷冻台冷冻，速冻之后切成4～5 μm的切片，将其贴在防脱载玻片上。

2)置于丙酮之中固定10 min，之后至水化[2]。

3)玻片进行蒸馏水水洗1次，之后用PBS冲洗1次、2 min。

4)放入3%的过氧化氢溶液中处理10 min。

5)水洗1次，之后用PBS冲洗3次、每次2 min。

6)滴加相应的一抗，然后放入37 ℃的环境30 min[3]。

7)PBS冲洗3次、每次2 min。

8)滴加MaxVision检测系统试剂(二抗)1滴，置于室温下反应15 min。

9)PBS冲洗3次、每次2 min。

10)DAB室温显色3～10 min，镜下控制显色，水洗，终止显色。

11)苏木素进行复染1～2 min，水洗，分化，蓝化。

12)常规进行脱水，用中性树胶进行封固[4]。

1.2.2 石蜡切片制作

1)将组织标本置于10%中性缓冲甲醛液之中固定24 h后，置于自动脱水机中依次梯度酒精脱水、透明、浸蜡，包埋成蜡块，切成2～3 μm的切片[3]。

2)石蜡切片65 ℃烤片1 h，脱蜡至水化并蒸馏水洗1次。

3)抗原修复：EDTA，pH8.0，中火持续煮沸20 min，之后快速冷却。

4)玻片进行蒸馏水水洗1次，之后用PBS冲洗2次、每次3 min。

5)放入3%的过氧化氢溶液中处理10 min。

6)水洗1次，之后用PBS冲洗3次、每次3 min。

7)滴加相应的一抗，然后放入37 ℃的环境1 h(或4 ℃冰箱过夜)。

8)PBS冲洗3次、每次3 min。

9)滴加MaxVision检测系统试剂(二抗)1滴，置于室温下反应15 min。

10)PBS冲洗3次、每次3 min。

11)DAB室温显色3～10 min，镜下控制显色，水洗，终止显色。

12)苏木精进行复染1～2 min，水洗，分化，蓝化。

13)常规进行脱水，用中性树胶进行封固。

1.3 观察指标

将所有切片放置在普通光学显微镜下观察免疫组织化学染色的结果，以10% 以上的肿瘤细胞出现胞膜或胞浆，观察到清晰棕褐色的或棕黄色的颗粒时则为阳性，其他结果为阴性，记为(-)；并将阳性结果分三种情况：1)癌细胞隐约可见膜染色时为弱阳性(记为1+)。2)细胞有微弱可见至中度可见其基底膜、侧膜或完全性的膜染色时为中度阳性(记为2+)。3)观察到细胞的基底膜、侧膜清晰染色，或者细胞完全性膜强染色时为强阳性(记为3+)[5]。

2 结果

HER-2检测结果中冰冻切片组阳性信号强于石蜡切片组，虽然组织形态学上，冰冻切片欠缺于石蜡切片，但是冰冻切片能更加真实清晰的表达HER-2。如封四图1—4。

3 讨论

现如今，女性乳腺癌的发病率逐渐上升，已成为女性恶性肿瘤导致死亡的首要的因素。因此对于乳腺癌的预防、诊断、治疗成为了医学界的研究重点[6]。人类表皮生长因子受体-2(HER-2)是人类17号染色体上的原癌基因，HER-2基因的扩增以及其所对应的蛋白质表达，皆与乳腺癌的发生、发展以及预后有关，是乳腺癌患者重要的预后以及HER-2靶向药物治疗的预测指标，经研究显示，HER-2阳性的患者肿瘤恶性程度比较大，且治疗效果相对较差，预后较差，但阳性(2+以上)患者使用HER-2靶性药物的治疗效果却比较好。因此，检测乳腺癌患者HER-2，尤其是准确的检测HER-2，对于指导患者的预后以及治疗具有重要的意义。

本实验主要探讨检测HER-2时，标本作为冰冻切片以及冰冻剩余石蜡切片两者的对比分析，冰冻切片是免疫组织化学染色中较常用的一种切片方法。冰冻切片的制作过程短，效率高，敏感性强，且可以最大程度地保证标本的多种抗原免疫活性，抗原完整性。冰冻切片做HER-2的最大好处还有，能最大限度地保留抗原，能较真实地反映HER-2是阴性，阳性的1+、2+或是3+。而石蜡切片的特点是达到可重复性且恒定的抗原显示，能够保持组织结构的完整性，而且制作好的石蜡组织块可以长久保存[7]。

本实验中，主要探讨两种切片对乳腺癌患者检测HER-2的影响，结果显示，冰冻切片显示效果较好。

[1] 王妍,贾羽峰,井明晰,等.新辅助化疗对乳腺癌的疗效及影响因素分析[J].中国医药导报,2013,11(10):45-47.

[2] 丁伟，王德田，董建强，等.简明病理学技术[M].杭州：浙江科学技术出版社，2014：156.

[3] 刘琪,左文述,王新昭,等.乳腺癌原发灶和淋巴结转移灶激素受体及HER-2与Ki-67表达相关性分析[J].中华肿瘤防治杂志,2013,20(15):1153-1157.

[4] 李世宁,唐红,郭庆喜,等.乳腺癌HER-2基因扩增及其蛋白表达与临床病理特征的关系[J].临床与实验病理学杂志,2014,30(3):251-255.

[5] 耿强,钱晓龙,付丽.乳腺癌HER-2检测的概况与进展[J].中国肿瘤临床,2014,41(10):671-674.

[6] 葛文凯,杨奔,左文述,等.乳腺癌穿刺活检对HR和HER-2及Ki-67评价可靠性以及化疗对其影响研究[J].中华肿瘤防治杂志,2014,21(11):847-853.

[7] 姜学革,李晓瑛,吕亚莉,等.乳腺髓样癌HER-2基因扩增与临床病理因素相关性分析[J].中华肿瘤防治杂志,2013,20(22):1724-1727.

(责任编辑：刘大仁)

2016-09-20

R446.8

A

1009-8194(2017)02-0016-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2017.02.008