正交试验法优化固本明目颗粒中红花丁香油的包合工艺

姬 涛 李怀平 孙绪丁

山东金诃药物研究开发有限公司，山东 济南 250101

正交试验法优化固本明目颗粒中红花丁香油的包合工艺

姬 涛 李怀平 孙绪丁

山东金诃药物研究开发有限公司，山东 济南 250101

目的：优选胶体磨法制备红花丁香油-β-环糊精包合物的最佳工艺。方法：采用正交试验法，以包合物收率和包合率为评价指标，考察β-CD与水的比例、挥发油与β-CD的比例和包合时间对包合工艺的影响。结果：β-CD 包合红花丁香油的最佳工艺为β-CD与水的比例为1∶4，β-CD与红花丁香油的比例为5∶1，包合时间为30min。结论：胶体磨法包合红花丁香油合理可行。

固本明目颗粒；红花丁香挥发油；胶体磨；包合工艺

固本明目颗粒[1]由红花、诃子、塞北紫堇、丁香、冰片、熊胆粉等6味药材组成，具有调节溃气、平肝健脾、化瘀明目的功效。标准工艺中对红花、丁香进行挥发油提取，再以乙醇溶解喷入制好的颗粒中，制得成品。由于挥发油本身的麻舌、苦涩等不良口感及其易挥发性，使得成品颗粒不仅口感较差，且质量不稳定。而以β-环糊精对挥发油进行包合，可以明显克服上述缺点[2-3]。胶体磨法[4]依靠设备内齿轮的相对运动，使β-CD 和药物的混合物在剪切、挤压等作用下实现包合，具有收率高、工艺条件易控制、设备占用空间小等特点，适合工业化生产。本文即采用胶体磨法，通过正交试验优选了红花丁香油的最佳包合工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器 JM-50型胶体磨(上海爱思杰制泵有限公司)；101型电热鼓风干燥箱(北京永光明医疗仪器厂)；GC-2014C高效气相色谱仪(日本岛津)；KQ-300B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 β-环糊精(批号：160301，安徽山河药用辅料股份有限公司)；丁香酚对照品(批号：110725-201414，中国食品药品检定研究院)； 红花丁香挥发油(自制)，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 包合物制备 取红花丁香挥发油加无水乙醇配成体积分数50%的溶液，备用；取适量蒸馏水置胶体磨中，加入一定量的β-环糊精，研磨5min，缓慢加入一定量的50%挥发油的乙醇溶液，再研磨一定时间，静置过夜，滤过，沉淀于50℃干燥，即得。

2.2 考察因素及水平 为得到最佳包合工艺，根据预实验结果，对β-环糊精与水的比例、β-环糊精与挥发油比例、包合时间3个因素[5]进行考察，按L9(3)4正交表安排实验，因素水平见表1。

表1 因素水平表

2.3 评价指标

2.3.1 包合物收率测定 收率=包合物重量 ∕(挥发油重量+环糊精重量)×100%。

2.3.2 包合率测定

2.3.3.1 色谱条件 以Waters C18柱(250mm×4.6mm，5μm)为固定相；以甲醇-水(55∶45)为流动相；检测波长为280nm；流速1.0mL/min；柱温35℃。

2.3.3.2 标准曲线制备 取丁香酚对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成浓度为1mg/mL的溶液。精密量取丁香酚对照品溶液1、2、3、5、7、10mL，分别置10mL棕色容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，自动进样器进样10μl，记录丁香酚峰的峰面积，以峰面积(A)对对照品浓度(C)进行线性回归，得回归方程为A=10911C+91933，r=0.9996(n=5)，在100.08～1000.80μg浓度范围内线性关系良好。

2.3.3.3 精密度试验 将同一浓度对照品溶液进样6次，计算RSD=0.57%(n=6)，表明系统精密度良好。

2.3.3.4 稳定性试验 供试品溶液制备完成后，分别于0、1、2、4、6、8h分别进样10μl，计算RSD=0.81%(n=6)，结果表明供试品溶液在8h内测定丁香酚结果稳定。

2.3.3.5 加样回收率试验 取已知含量样品适量，置50mL棕色容量瓶中，各精密称取6份，精密加入丁香酚对照溶液(1.0008mg/mL)15mL，再加入70%乙醇25mL，超声处理20min，超声完毕后，放冷后，用70%乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，测定，计算丁香酚对照品的平均加样回收率x=96.89%(n=6)，RSD=1.01%(n=6)，表明该丁香酚测定方法准确性良好。

2.3.3.6 样品测定 取样品适量(约相当于含丁香酚20mg)，以30mL石油醚分三次洗涤，洗涤后样品挥干石油醚，置50mL棕色容量瓶中，加70%乙醇溶液40mL，超声处理2min，放冷，加70%乙醇至刻度，摇匀，滤过，得续滤液，精密吸取上述续滤液10μl，注入液相色谱仪，测定。

包合率(%)=

注：红花丁香油中丁香酚含量为67.8%。

2.3.3 综合评分[6]包合率是衡量挥发油利用率的重要指标，而收率在大生产中也有着重要的意义，因此以包合率为主要指标，权重系数为0.8；收率为次要指标，权重系数为0.2。将加权后的值作为综合评分结果。计算公式如下。

综合评分=0.2×收率∕最大收率×100+0.8×包合率∕最大包合率×100

2.4 结果 以包合收率和包合率为考察指标，从表3方差分析可知，因素A和B对结果有显著性影响(P<0.05)，因素C差异没有统计学意义，结合表2直观分析极差R值，综合考虑，确定最佳包合工艺为A2B2C2，即β-环糊精∶水为1∶4，β-环糊精∶挥发油为5∶1，胶体磨研磨包合30min。

表2 正交试验结果

表3 方差分析结果

2.5 验证实验 按上述优选的最佳工艺，制备包合物，即取红花丁香挥发油20g，加无水乙醇20mL配成体积分数50%的溶液，备用；取蒸馏水400mL置胶体磨中，加入β-环糊精100g，研磨5min，缓慢加入上述挥发油乙醇溶液，再研磨30min，静置过夜，滤过，沉淀于50℃干燥，即得，共制备3批，测定收率分别为80.24%、82.11%、83.81%，包合率分别为78.34%、79.25%、77.19%，表明该工艺稳定可行。

2.6 包合物的验证 采用薄层色谱法[7]，取丁香挥发油，加无水乙醇配成2%的溶液；挥发油β-环糊精包合物加无水乙醇配成相同浓度的样品。按薄层色谱法《中国药典》2015年版四部(通则0502)实验，吸取2种样品溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(7∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液显色，结果显示，包合物在挥发油相同的位置上没有斑点出现，表明挥发油已与β-环糊精形成包合物。

3 结论

试验所用挥发油为实验室自提红花丁香混合油，其中丁香油约占90%，因此以丁香油中丁香酚的含量为依据进行了包合率的计算。同时以HPLC法测定丁香酚的含量，相较与药典[8]中气相色谱法具有操作简便、灵敏度高、准确性好的特点，同时HPLC法不受样品挥发性和热稳定性的影响，分离温度低，各组分容易被分离[9]。本文以优化的胶体磨法制备红花丁香油包合物，产品得率高，包合时间短，且包合过程无需加热，有利于提高产品质量，尤其适合工业化生产。

[1] WS-10485(ZD-0485)-2002-2012Z，国家药品标准[S].[2002-12-01]

[2] 叶卯祥，严雪黎.β环糊精包合技术在中药挥发油制剂中的应用研究[J].医学综述，2010，16(24)：3793-3796.

[3] 郝晶晶，李海亮，龚慕辛.挥发油环糊精包合技术的研究进展及存在问题分析[J].中国实验方剂学，2013，19(2)：352-356.

[4] 熊晓莉，李宁，陈锦锦.环糊精包合技术研究进展[J].中国药房，2008，19(25)：1988-1990.

[5] 赵阳，张纯，郭澄，等.丁香油-β-环糊精制备工艺的研究[J].中国中医药信息，2000，7(3)：19-21.

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[7] 胡伊力格其.β-环糊精包合技术在中药制剂中的应用概述[J].山东中医，2015，34 (11)：892-894.

[8] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2015：4．

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Optimum Inclusion Process of Safflower-Clove Volatile Oil from Guben Mingmu Granule by Orthogonal Test

JI Tao LI Huaiping SUN Xuding

ShanDong ARULA Pharmaceutical R & D Co Ltd, Ji'nan 250101,China

Objective To optimize the preparation of β-CD inclusion compound of Safflower-Clove volatile oil using the colloid mill method.Methods With recovery ratio and inclusion rate of volatile oil-β-CD as evaluation indexes, the orthogonal design was used to study the effects of β-CD-pure water ratio,β-CD-volatile oil ratio, and inclusion time on the inclusion process of volatile oil.Results The optimum preparation conditions of inclusion compound were as follows:β-CD-pure water ratio was 1∶4, β-CD-mixture of Safflower-Clove oil ratio was 5∶1, and the inclusion time was 30min.Conclusion The method is reasonable and feasible.

Guben Mingmu Granule；Safflower-Clove Volatile Oil；Colloid Mill；Inclusion Process

姬涛(1983-)，男，汉族，硕士，中级职称，主要从事于藏药新药研究开发及民族药质量标准制定工作。 E-mail: jt198311jt@163.com

R284

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1007-8517(2017)05-0029-03

2017-01-06 编辑：穆丽华)