双黄连口服液（仅适用于儿童）的大鼠毒理学研究

贺一新+樊静恒+董金鹏+邢泽田

摘要：目的 觀察双黄连口服液（仅适用于儿童）对SD离乳大鼠一般状况、体质量、摄食量、生长发育、血常规和病理学的影响，为临床安全用药提供实验依据。方法 SD离乳大鼠按体质量随机分为对照组和双黄连口服液低、中、高剂量组，每组30只。各给药组给予相应剂量双黄连口服液（仅适用于儿童）浓缩膏灌胃，每日1次，连续33 d。分别观察给药期、恢复期（停药25 d）各组大鼠毒性反应。结果 各组大鼠给药期和恢复期一般状况、个体发育、脏器质量和系数，以及剖检肉眼观察和病理结果均无明显差异。双黄连口服液高剂量组雌鼠和雄鼠体质量与摄食量不同程度低于对照组；给药期血常规检测显示，双黄连口服液高剂量组雌鼠和雄鼠淋巴细胞比率显著降低、中性粒细胞比率显著升高，恢复期恢复正常。结论 双黄连口服液（仅适用于儿童）浓缩膏对幼年大鼠全身脏器和组织无相关毒性作用，安全性好。

关键词：双黄连口服液（仅适用于儿童）；毒理学实验；安全剂量；大鼠

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2017.04.016

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2017）04-0061-06

Rat Toxicological Study of Shuanghuanglian Oral Solution （Only for Children） HE Yi-xin， FAN Jing-heng， DONG Jin-peng， XING Ze-tian （Pharmaceutical Engineering Center， Henan Taloph Pharmaceutical Stock Co.， Ltd， Zhengzhou 450001， China）

Abstract： Objective To study the effects of Shuanghuanglian Oral Solution （only for children） on general condition， body weight， food intake， growth and development， blood routine and pathologic changes of SD weanling rats； To provide experimental references for clinical safe medication. Methods SD weanling rats were randomly divided into control group， Shuanghuanglian （only for children） Oral Solution low-， medium- and high-dose group according to body mass， with 30 rats in each group. Each administration group was given corresponding amount of Shuanghuanglian Oral Solution （only for children） concentrated ointment for gavage， once a day， for 33 d. The toxicity of the rats during dosing period and recovery period （medicine withdrawal 25 d） was observed. Results There were no significant differences in general condition， individual development， organ mass and coefficient， and internal fixation and pathological findings of rats in administration groups during dosing period and recovery period. The body mass and food intake of female and male rats in the Shuanghuanglian Oral Solution high-dose group were lower than those in the control group. The blood routine test during dosing period showed that the lymphocyte ratio of female rats and male rats in Shuanghuanglian Oral Solution high-dose group decreased significantly， neutrophil ratio increased significantly， and then returned to normal level in recovery period. Conclusion Shuanghuanglian Oral Solution （only for children） concentrated ointment has no toxic effect on the whole body organs and tissues of juvenile rats， and the safety is good.

Key words： Shuanghuanglian Oral Solution （only for children）； toxicological test； safe dosage； ratsendprint

双黄连口服液全方由金银花、黄芩、连翘3味中药组成，具有抗菌、抗病毒和解热消炎的功效[1]。双黄连口服液（仅适用于儿童）是在双黄连口服液原有基础上应用先进工艺将其制成儿童适宜的药分含量。由于儿童生理解剖特点与成人不同，对药物的吸收代谢、疗效和毒性反应等均有其特殊性[2]，为保证儿童

用药的安全性，本实验对双黄连口服液（仅适用于儿童）毒理学进行研究，为临床安全用药提供实验依据。

1 实验材料

1.1 动物

SPF级SD离乳（出生21 d）大鼠120只，雌雄各半，体质量40～60 g，北京维通利华实验动物技术有限公司，动物许可证号SCXK（京）2012-0001。分笼饲养，2～5只/笼，室温20～26 ℃，相对湿度40%～70%，人工光照，12 h明暗周期，通风≥15次/h，自由摄食饮水。

1.2 药物

双黄连口服液（仅适用于儿童）浓缩膏，河南太龙药业股份有限公司，批号16030711。

1.3 主要试剂与仪器

PEROX SHEATH、PEROX1、PEROX2、PEROX3、RBC/PLT、AUTORETIC、SHEATH/RINSE，德国Simens。ADVIA2120血球计数仪（德国Simens），Excelsior ES全自动脱水机（英国Shandon），石蜡包埋机（英国Shandon Histocentre），切片机（英国Shandon Finesse），全自動染色机（英国Shandon Varistain Gemini），显微镜及图像分析系统（日本Olympus）。

2 实验方法

2.1 分组和给药

实验大鼠按体质量随机分为对照组和双黄连口服液低（28.5 g/kg）、中（57.0 g/kg）、高（113.9 g/kg）剂量组，每组30只，各给药组予相应剂量双黄连口服液（仅适用于儿童）浓缩膏灌胃，相当于小儿临床使用剂量（1.8 g/kg体质量）的15.8、31.7、63.2倍，对照组给予等量纯净水。给药体积均为10 mL/kg，每日1次，连续33 d。

2.2 指标检测

于给药期（33 d）和恢复期（停药25 d）分别观察每组大鼠一般状况、体质量和摄食量；测量大鼠顶臀和胫骨长度，观察个体发育情况；检测血常规，包括红细胞（RBC）、红细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、红细胞分布宽度（RDW）、血红蛋白（HGB）、红细胞平均血红蛋白量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、血小板计数（PLT）、降钙素原（PCT）、平均血小板体积（MPV）、血小板分布宽度（PDW）、白细胞（WBC）、淋巴细胞（LYM）、中性粒细胞（NEUT）、单核细胞（MONO）及网织红细胞（RET）；大鼠脱颈处死剖检，检测脏器质量，并计算脏器系数（脏器质量÷动物体质量×100%）。

3 统计学方法

采用SPSS20.0统计软件进行分析。计量资料以—x±s表示，体质量、摄食量、生长发育、血常规、脏器指数等指标按雌雄进行分析，组间比较用单因素方差分析。检验水准α=0.05。

4 结果

4.1 双黄连口服液（仅适用于儿童）对大鼠一般状况、体质量及摄食量的影响

给药期间各组大鼠自主活动、饮水、摄食及二便正常，精神状态良好；毛色有光泽，口、鼻、眼均未见异常分泌物，未见呼吸异常。实验期间各组大鼠均未死亡。各给药组给药后大鼠体质量均保持增长趋势，给药第5日至给药结束高剂量组雄鼠体质量均低于对照组；恢复期高剂量组雌鼠体质量低于对照组，见图1、图2。低剂量组雌鼠给药第17日和高剂量组雄鼠给药第13、17日摄食量低于对照组，见图3、图4。

4.2 双黄连口服液（仅适用于儿童）对大鼠个体发育的影响

给药期高剂量组雄鼠胫骨长和恢复期高剂量组雌鼠顶臀长低于对照组，给药期和恢复期其他各给药组大鼠顶臀长和胫骨长度未见明显差异。结果见表1、表2。

4.3 双黄连口服液（仅适用于儿童）对大鼠血液学指标的影响

与对照组比较，给药期低剂量组RDW、中剂量组PDW、高剂量MCV等指标虽有显著变化，但未见明显量效关系，数值变化也未见明显的规律，且变化幅度小（数值变化小于对照组均值的5%），变化差异均无统计学意义。给药期高剂量组雌鼠和雄鼠LYM比率显著降低，NEUT比率显著升高，恢复期恢复。结果见表3、表4。

4.4 双黄连口服液（仅适用于儿童）对大鼠脏器质量和脏器系数的影响

与对照组比较，大鼠给药期肾脏、胸腺、肺脏、肾上腺、附睾及恢复期心脏、脾脏、肺脏、肾上腺、子宫等脏器湿重与脏器系数有改变，但上述变化未见与药理相关的病理改变，脏器系数无明显异常，分析认为数值变化与药物无关。结果见表5～表8。

4.5 双黄连口服液（仅适用于儿童）对脏器组织病理的影响

给药期对照组大鼠肝脏出现微小肉芽肿（10/20），肺被膜下或肺小叶内见微小炎性结节（5/20），肾小管内见蛋白管型（6/20），皮质部近曲小管上皮细胞内玻璃样小滴变性（2/20）；高剂量组大鼠肝脏出现微小肉芽肿（7/20），肺被膜下或肺小叶内见微小炎性结节（2/20），肾皮质或髓质个别肾小管内形成蛋白管型（1/20），皮质部近曲小管上皮细胞内玻璃样小滴变性（2/20）。恢复期，对照组大鼠肝脏出现微小肉芽肿（6/10），肺被膜下见微小炎性结节（3/10），肾皮质部近曲小管上皮细胞内玻璃样小滴变性（4/10）；高剂量组大鼠肝脏出现微小肉芽肿（5/10），肺被膜下见微小炎性结节（1/10），肾皮质部近曲小管上皮细胞内玻璃样小滴变性（1/10）。高剂量组与对照组比较无明显差异，且大多为动物的自发性病变，与药物的毒性无关。endprint

5 讨论

本实验结果显示，给药期各给药组大鼠体质量均保持增长趋势，表明双黄连口服液（仅适用于儿童）对幼鼠的总体营养状态、生理状态和健康状况无明显影响。作为动物体各项生理功能的具体执行者，动物脏器系数可近似反映该脏器的功能状态和病变情况[3]，各给药组大鼠脾脏、肾脏、肾上腺、子宫湿重有升高或降低的现象，但未见与药物相关的病理改变，其脏器系数也无明显异常，分析认为数值变化与药物无关，双黄连口服液（仅适用于儿童）在长期服用中未见明显毒性靶器官。血常规检测显示，给药期雌鼠和雄鼠高剂量组LYM比率降低、NEUT比率升高，提示高剂量双黄连口服液（仅适用于儿童）可能引起幼鼠机体炎症反应及肝脏脂质化损伤[4-6]。有研究发现，双黄连口服液中有效成分之一绿原酸作为一种可疑的致敏因子在高剂量时会引起促炎因子白细胞介素（IL）-6和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的增加，并引起组织中大量炎性细胞的浸潤，造成组织结构破坏，使机体发生炎性损伤；而高剂量绿原酸同样能诱发氧化应激，包括促进活性氧的产生和降低抗氧化酶的活性，引起组织脂质氧化物的损伤；双黄连口服液具有与绿原酸相同的促氧化作用及剂量依赖性，两者均可上调组织中核因子-κB的表达、引起IL-10/TNF-α比率下降，破坏机体抗/促炎反应的平衡[7-10]。这可能是双黄连口服液（仅适用于儿童）高剂量组给药期引起LYM比率降低、NEUT比率升高的原因，但这种现象在恢复期恢复正常，显示此种毒性作用可逆。

综上，双黄连口服液（仅适用于儿童）无明显毒性反应，潜在可能毒性靶器官为肝脏，而此种毒性反应可逆，基本无毒作用剂量为28.5、57.0 g原药材/kg（相当于临床剂量15.8、31.7倍）。目前其毒性作用机制及物质基础尚未明确，双黄连口服液（仅适用于儿童）众多有效成分中主要毒性物质还未阐明，今后仍需进一步研究。

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