野茉莉叶水提物抑菌、抗炎及止咳作用的实验研究＊

任 杰，李 娟，李兆星，李明丹，曾宏亮，潘善庆，李日新，李顺祥＊＊

（1.湖南中医药大学药学院中药现代化高校重点实验室 长沙 410208；2.湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心 长沙 410208；3.西南大学药学院 重庆 400715；4.湖南省药物安全评价研究中心 长沙 410331；5.郴州五盖山天时生态农业科技开发有限公司 郴州 423000）

野茉莉（Styrax japonicus Sieb.et Zucc.）为安息香科安息香属植物，又名野花棓、茉莉苞、木香柴、野白果树、脆果子树、木橘子和耳完桃。生于海拔400-1 800 m的林中，主要分布于我国北自秦岭和黄河以南，东起山东、福建，西至云南东北部和四川东部，南达台湾、广东和广西北部。《中华本草》、《全国中草药汇编》等典籍记载，野茉莉的药用部位为其叶及果实，具有祛风除湿，舒筋通络之功效，主治风湿痹痛，瘫痪等病症[1,2]。为充分利用野茉莉资源，对野茉莉叶进行了抑菌、抗炎及止咳作用的实验研究，现将结果报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 药物和试剂

野茉莉叶，由郴州五盖山天时生态农业科技开发有限公司提供。药材来源：于2016年5月采自湖南省郴州五盖山，经湖南中医药大学刘塔斯教授鉴定为安息香科安息香属植物野茉莉（Styrax japonicus Sieb.et Zucc.）的新鲜嫩叶，凭证标本（序号：20160913）保存在湖南省中药活性物质筛选工程技术研究中心。MH肉汤（批号：20160603，青岛高科技工业园海博生物技术有限公司）。营养琼脂（批号：20150630，青岛高科技工业园海博生物技术有限公司）。角叉菜胶（批号：BCBP8978V，sigma-aldrich），称取100 mg角叉菜胶粉末至研砵中，分批次缓慢加入10 mL生理盐水，边加边研磨，配成均匀乳白色1%角叉菜胶溶液，使用前临时配制。二甲苯（批号：20160608，国药集团化学试剂有限公司）。氨水（批号：20160708，国药集团化学试剂有限公司），规格：500 mL/瓶（浓度：25-28%），实验前用蒸馏水稀释至14%备用。碳酸氢钠（批号：20130715，广东光华科技股份有限公司），规格：500 g/瓶，实验前配成5%的NaHCO3溶液待用。

1.1.2 菌株名称及菌株号和动物

大肠埃希氏菌（菌株号：ATCC25922），肺炎克雷伯氏菌（菌株号：CMCC(B)46117），沙门氏菌（菌株号：CMCC(B)50094），金黄色葡萄球菌（菌株号：CMCC(B)26003），白色念珠菌（菌株号：CMCC(F)98001）。SD大鼠（SPF级），雄性，体重范围为189.1-210.4 g；ICR小鼠（SPF级），雌雄兼用，体重范围19.0-24.3 g，均由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供。

1.1.3 仪器

BSC-1100ⅡA2-X型生物安全柜（二级）（济南鑫贝西生物有限公司），LDZM-80KCS型立式压力蒸汽灭菌锅（上海申安仪器有限公司），PYL-230型电热恒温培养箱（天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司），PL2002型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司），CP413型分析天平（奥豪斯仪器（常州）有限公司），YLS-7B足趾容积测量仪（济南益延科技发展有限公司），AUY220型分析天平（日本岛津），YLS-8A型诱咳引喘仪（济南益延科技发展有限公司），UV-Power PC型紫外/可见分光光度计（北京莱伯泰科仪器有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 野茉莉叶水提物的制备

试验前称取1 000 g野茉莉叶，用10 L煮沸蒸馏水浸泡提取30 min，三层纱布过滤，再用10 L煮沸蒸馏水浸泡提取一次，合并滤液，减压浓缩（60℃）至1 000 mL（终浓度为1.0 g生药量·mL-1），摇晃均匀后按50 mL/瓶分装，密闭保存于4℃冰箱备用（批号：20160914）。野茉莉叶水提物抗炎、止咳和排痰作用实验，以人体推荐食用量5 g/天，成人体重按60 kg计，折合剂量约0.083 g野茉莉叶·kg-1。

1.2.2 野茉莉叶水提物体外抑菌作用[3]

无菌操作条件下，采用肉汤连续稀释法将灭菌处理过的野茉莉叶水提物与MH液体培养基（2×）二倍稀释，使培养基中受试物的终浓度分别为0.500、0.250、0.125、0.063 g生药量·mL-1，分别接种大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌于含上述浓度受试物的MH液体培养基中，各试验菌最终浓度约为105CFU·mL-1，同时接种于不含受试物的MH液体培养基中，作为阳性对照，另设不接种菌液的MH液体培养基作为阴性对照，36℃培养48 h，观察各菌株生长情况及记录受试物的最小抑菌浓度（MIC）。

1.2.3 野茉莉叶水提物抗炎作用[4]

1.2.3 .1大鼠棉球植入实验

选用检疫合格雄性SD大鼠40只（SPF级），按体重随机分为4组，即溶媒对照组、野茉莉叶水提物低剂量组（0.42 g生药量·kg-1）、中剂量组（0.83 g生药量·kg-1）、高剂量组（2.50 g生药量·kg-1），每组10只，各给样组大鼠按10 mL·kg-1灌胃给予相应剂量的受试物，溶媒对照组大鼠灌胃给予等量蒸馏水，每日一次。试验结束前8天将灭菌干燥至恒重的紧致小棉球植入大鼠腹股沟两侧，缝合切口，继续给予受试物，第30天给予受试物1 h后处死大鼠，剥离并取出棉球肉芽组织，干燥后称重，计算肉芽肿净重。

1.2.3 .2大鼠足趾肿胀实验

选用检疫合格雄性SD大鼠40只（SPF级），按体重随机分为4组，即溶媒对照组、野茉莉叶水提物低剂量组（0.42 g生药量·kg-1）、中剂量组（0.83 g生药量·kg-1）、高剂量组（2.50 g生药量·kg-1），每组10只，各给样组大鼠按10 mL·kg-1灌胃给予等量的受试物，溶媒对照组大鼠灌胃给予等量蒸馏水，每日一次，连续30天。末次给予受试物1h后，测量各组大鼠注入致炎剂（1%角叉菜胶溶液）前和注入后1 h、2 h、4 h及6 h右后足趾容积，计算各时间点的足趾肿胀率。

1.2.3 .3小鼠耳肿胀实验

选用检疫合格雄性ICR小鼠50只（SPF级），按体重随机分为5组，即模型对照组、阳性对照组（阿司匹林片，39 mg·kg-1）、野茉莉叶水提物低剂量组（0.42 g生药量·kg-1）、中剂量组（0.83 g生药量·kg-1）、高剂量组（2.50 g生药量·kg-1），每组10只，各给样组小鼠按20 mL·kg-1灌胃给予相应剂量的受试物，模型对照组、阳性对照组灌胃给予等量蒸馏水或阿司匹林药液，每日一次，连续7天。末次给予受试物后1 h于每只小鼠右耳廓内外侧涂二甲苯致炎，左耳不涂作为对照，30 min后处死，沿耳廓基线剪下双耳，用9 mm直径打孔器打下左耳和右耳相同部位的圆片，并立即用分析天平准确称取左、右耳片重量，计算耳肿胀率。

1.2.4 野茉莉叶水提物止咳作用[5]

小鼠氨水引咳实验选取检疫合格的ICR小鼠50只（SPF级），雌雄各半，按性别体重随机分为5组，即模型对照组、阳性对照组（枸橼酸喷托维林片，9.75 mg·kg-1）、野茉莉叶水提物低剂量组（0.42 g生药量·kg-1）、中剂量组（0.83 g生药量·kg-1）、高剂量组（2.50 g生药量·kg-1），每组10只，各给样组小鼠按20 mL·kg-1灌胃给予相应剂量的受试物，模型对照组、阳性对照组灌胃给予等量蒸馏水或枸橼酸喷托维林片药液，每日一次，连续7天。末次给予受试物1 h后将小鼠放入诱咳引喘仪内，喷入14%浓氨水5 s刺激致咳，检测小鼠首次咳嗽潜伏期及5 min内的咳嗽次数。

1.2.5 数据处理

全部数据均采用SPSS 16.0统计处理软件进行方差分析，试验数据用“±s”表示。

2 结果

2.1 野茉莉叶水提物体外抑菌作用

野茉莉叶对大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌的MIC为0.250 g生药量·mL-1，对金黄色葡萄球菌的MIC为0.125 g生药量·mL-1，对白色念珠菌（0.063-0.500生药量·mL-1）无抑菌活性具体结果见表1。

2.2 野茉莉叶水提物抗炎作用

2.2.1 对大鼠棉球植入的影响

与模型组相比，野茉莉叶水提物各给药组动物肉芽肿净重呈剂量依赖性降低，高剂量组棉球肉芽肿重量及肉芽肿净重均明显减少（P＜0.05），可见统计学差异（表2）。上述结果表明，该实验条件下，野茉莉叶水提物对大鼠棉球重量无明显影响，高剂量组肉芽肿净重明显降低，提示野茉莉叶水提物具有抗炎作用。

2.2.2 对大鼠足趾肿胀的影响

与模型组相比，野茉莉叶水提物各给药组动物足趾肿胀率整体呈降低趋势，注射致炎剂后1 h、2 h野茉莉叶水提物低、高剂量组足趾肿胀率均明显或显著降低（P＜0.05或P＜0.01），其中野茉莉叶水提物低剂量组足趾肿胀率在注射致炎剂后4 h、6 h仍显著降低（P＜0.01）（表3）。上述结果表明，该实验条件下，野茉莉叶水提物对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀具有明显抑制作用。

2.2.3 对二甲苯所致小鼠耳郭肿胀的影响

与模型组相比，野茉莉叶水提物低、高剂量组耳肿胀率均明显或显著降低（P＜0.05或P＜0.01），阳性对照药组（阿司匹林片）耳肿胀率亦显著降低（P＜0.01）（表4）。上述结果表明，该实验条件下，野茉莉叶水提物可有效改善二甲苯涂布引起的小鼠耳廓肿胀，提示其具有抗炎作用。

表1 野茉莉叶水提物对实验菌株生长的影响

表2 野茉莉叶水提物对肉芽肿净重的影响（±s）

表2 野茉莉叶水提物对肉芽肿净重的影响（±s）

注：与模型对照组相比，*P＜0.05。

组别模型组野茉莉叶水提物低剂量组野茉莉叶水提物中剂量组野茉莉叶水提物高剂量组棉球重量（mg）22.4±1.1 22.7±0.9 22.8±0.8 22.6±0.7棉球肉芽肿重量（mg）151.2±23.6 149.7±21.8 141.9±32.9 121.2±23.3*肉芽肿净重（mg）128.8±23.5 127.0±21.2 119.1±33.4 98.7±22.8*

表3 野茉莉叶水提物对足趾肿胀率的影响（±s）

表3 野茉莉叶水提物对足趾肿胀率的影响（±s）

注：与模型对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

肿胀率（%）组别模型组野茉莉叶水提物低剂量组野茉莉叶水提物中剂量组野茉莉叶水提物高剂量组注射后1 h 25.9±9.0 17.9±5.3**20.5±6.5 18.0±3.4**注射后2 h 41.8±14.5 27.4±7.8**38.6±12.5 30.5±8.0*注射后4 h 53.0±12.3 35.6±7.3**49.7±13.9 43.5±10.2注射后6 h 52.8±11.3 34.3±5.0**47.8±13.3 43.0±13.2

表4 野茉莉叶水提物对小鼠耳肿胀率的影响（±s）

表4 野茉莉叶水提物对小鼠耳肿胀率的影响（±s）

注：与模型对照组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

?

2.3 野茉莉叶水提物止咳作用（对氨水引起小鼠咳嗽的影响）

与模型组相比，野茉莉茶叶水提物中、高剂量组咳嗽潜伏期均显著延长（P＜0.01），野茉莉茶叶水提物各给药组咳嗽次数均显著减少（P＜0.01），阳性对照药组（枸橼酸喷托维林片）咳嗽次数亦显著减少（P＜0.01）（表5）。上述结果表明，该实验条件下，野茉莉叶水提物可有效延长氨水引起的咳嗽潜伏期，低、中、高剂量组均显著减少咳嗽次数，提示其具有镇咳作用。

表5 野茉莉叶水提物对小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数的影响（±s）

表5 野茉莉叶水提物对小鼠咳嗽潜伏期和咳嗽次数的影响（±s）

注：与模型对照组相比，**P＜0.01。

咳嗽次数（次）79.4±14.9 33.4±4.5**50.5±9.8**50.1±7.7**43.1±7.7**组别模型组阳性对照组（枸橼酸喷托维林片）野茉莉叶水提物低剂量组野茉莉叶水提物中剂量组野茉莉叶水提物高剂量组咳嗽潜伏期（s）31.4±11.6 43.9±9.9 38.0±4.2 50.0±3.9**53.5±20.3**

3 讨论

以上药理实验表明，野茉莉叶水提物具有较明显的抑菌、抗炎及止咳作用，对不同的致炎以及氨水致咳模型显示了对抗作用，其能降低肉芽肿净重，抑制角叉菜胶引起的足趾肿胀和二甲苯引起的耳廓肿胀，延长氨水引咳潜伏期并降低咳嗽次数等功能作用，同时，通过体外抑菌实验表明，野茉莉叶水提物具有体外抑制大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、沙门氏菌及金黄色葡萄球菌的生长，但对白色念珠菌无生长抑制作用。实验结果与资料所载该药的相关主治功效相符。

野茉莉作为一种重要的药用植物，广泛分布在我国秦岭和黄河以南各省。研究表明，野茉莉叶中的木脂素类和五环三萜类化合物具有良好的生物活性，为其传统功效的应用提供了科学依据，也为其药用资源的合理开发奠定了初步基础。而对该药材有效成分及作用机制的探讨，有待进一步深入研究。因此进一步开拓野茉莉的应用前景，开展野茉莉叶中化学成分药理药效学等方面的深入研究，对加快我国野茉莉资源的合理开发利用具有重要的学术意义和经济价值。

1 国家中医药管理局.中华本草(第三册).上海:上海科学技术出版社,1999:446-448.

2 王国强.全国中草药汇编(卷三)(第三版).北京:人民卫生出版社,2014:543.

3 Molla Y,Nedi T,Tadesse G,et al.Evaluation of the in vitro antibacteri⁃al activity of the solvent fractions of the leaves of Rhamnus prinoides L'Herit(Rhamnaceae)against pathogenic bacteria.BMC Complem Altern M,2016,16(1):287.

4 Pérezgonzález M Z,Gutiérrezrebolledo G A,Yépezmulia L,et al.Anti⁃protozoal,antimycobacterial,and anti-inflammatory evaluation of Cni⁃doscolus chayamansa(Mc Vaugh)extract and the isolated compounds.Biomed pharmacother,2017,89:89-97.

5 Han N,Chang C,Wang Y,et al.The in vivo expectorant and antitussive activity of extract and fractions from Reineckia carnea[J].J Ethnophar⁃macol,2010,131(1):220-223.