天葵有效部位中氰苷类成分的含量测定及分析

龙正标，沈易华，徐冉，汤磊*



天葵有效部位中氰苷类成分的含量测定及分析

龙正标1，沈易华1，徐冉2，汤磊*2

（1. 铜仁职业技术学院， 贵州 铜仁 554300； 2. 贵州医科大学， 贵州 贵阳 550000）

实验对天葵植物中的有效部位氰苷类成分进行了分析（检测）及含量测定。通过UV法测定氰苷类的成分和含量，用HPLC（高效液相色谱法）分析其主要成分。结果表明测得的天葵样品中氰苷类含量为6.70%，并对氰苷类成分在HPLC谱图上进行归属。首次对天葵有效部位中氰苷类成分进行含量测定及HPLC谱图归属，该方法操作简便、准确、重复性好。

天葵； 氰苷； 含量测定； HPLC

天葵属毛茛科天葵植物，其根入药称为天葵子，是一种中药材，收录在《中国药典》中，有清热解毒、消肿止痛、利尿等作用，治乳腺炎、扁桃体炎、痈肿、瘰疬、小便不利等功效；全草又作土农药，多用于瘰疠、热淋、痈肿疔疮、蛇虫咬伤；产于中国西南、华东、东北等地；天葵子作为传统中药，在贵州民间有人用于治疗动物白内障疾病，但未见文献报道。笔者早期通过对天葵提取物治疗白内障作用的相关药学实验研究，结果表明天葵提取物的抗氧化作用显著。目前已知天葵中主要成分为氰苷类成分，因此为全面考察天葵的有效部位成分，本研究首次对天葵有效部位中氰苷类成分进行分析及含量测定，为明确天葵抗氧化活性成分及拓展其药用价值提供一定的理论依据。

1 实验部分

1.1 仪器

RE-3000A型旋转蒸发器（上海仪天科学仪器有限公司）；SHB-Ⅲ型循环水式真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；BRANSON新一代超声清洗器（上海恒奇仪器仪表有限公司）；GDX系列高低温一体机循环器（上海丙林电子科技有限公司）；za100r3型精密天平（上海赞维衡器有限公司）；ZF-6N型三用紫外分析仪（上海嘉鹏科技有限公司）。

1.2 试剂与药材

溶剂：甲醇（广东省化学试剂工程技术研究开发中心）、乙醇（重庆市川东化工有限公司）、乙酸乙酯（南开大学化学分析试剂厂）、氯仿（上海四赫维化工有限公司）、正丁醇（南开大学化学分析试剂厂）、水为自制蒸馏水。

层析填料：D101型大孔树脂（天津市光复精心化工研究所）、柱层层析硅胶（200~300目，烟台市江友硅胶开发有限公司）、HSGF245型薄层层析硅胶板（烟台市芝罘黄务硅胶开发试验厂）。

显色剂：三氯化铝乙醇溶液、香草醛—硫酸乙醇溶液、碘化铋钾、碘等均按天然药物化学实验教材中的方法配制。

药材：天葵子在贵州省铜仁市采购，由铜仁职业技术学院药学院中药学教研室梁玉勇教授鉴定确定为毛茛科天葵属植物天葵 Semiaquilegia adoxoides( DC.) Makino的干燥块茎。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取天葵对照品紫草氰苷 8.4 mg，放置于100 mL的容量瓶中，缓慢加水溶解稀释到刻度后摇匀，作为对照品贮备液。

2.2 供试品溶液的制备

精密称取正丁醇层（TK-Z）11.1 mg，放置于100 mL容量瓶中，缓慢加水溶解并稀释至刻度后摇匀，作为供试品贮备液。

2.3 最大吸收波长的测定

分别精密取对照品紫草氰苷以及待测样品 TK-Z 10 mL，在200~400 nm波长内扫描，扫描结果显示样品溶液均在260 nm处有着最大的吸收。 因此，选此波长作为测定波长。

2.4 标曲的绘制

分别精密量取对照品溶液0.0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL置于10 mL容量瓶中，稀释到刻度线后摇匀，然后通过第一管空白对照，在260 nm波长的地方测定吸收度，以吸光度（）对浓度（）作标准曲线，得到回归方程为：= 0.037 6+ 0.029 4，2= 0.999 4。浓度在3.36~16.8μg /mL内，与吸收度呈线性关系。

图1 标准曲线

2.5 回收率实验

分别取已知含量的样品6份，分别加入一定量的紫草氰苷对照品，按照标准曲线项下操作，结果回收率为99.96%，RSD=2.18%（=6）。

表1 回收率实验结果（n=6）

2.6 稳定性实验

分别精密量取供试品溶液1 mL，按照标准曲线制备项下操作，依法测定吸收度。间隔1、2、3、4 h再分别测定1次，RSD=0.29%（=6），表明样品在4 h内稳定。

2.7 精密度试验

分别取对照品溶液1 mL，共6份，按标准曲线制备项下操作，分别测定吸收度，结果 RSD=2.91%，1.05%（=6）。

2.8 重复性试验

精密称定同一样品6份，分别按供试品的含量测定项下操作，结果RSD =0.15%（=6）。表明重现性良好。

2.9 供试品的含量测定

精密称定同一样品6份，分别按供试品的含量测定项下操作，结果RSD =0.15%（=6）。表明重现性良好。

表2 含量测定实验结果（n=3）

2.10 HPLC分析[4-6]

天葵有效部位及对照品用适量水和甲醇溶解，经0.45 µm微孔滤膜过滤，按照《中国药典》2010年版一部附录VID高效液相色谱法测定: 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇为流动相A，以0.05%磷酸水为流动相B，按表3中规定进行梯度洗脱; 流速: 0.6 mL/min; 检测波长: 260 nm; 柱温: 30 ℃; 进样量: 20 µL，色谱图见图1。

表3 HPLC洗脱条件

图2 高效液相色谱图

1-紫草氰苷；2-冬青氰苷；3-蝙蝠葛氰苷

3 讨论

笔者前期对天葵提取物治疗白内障的作用进行了相关的药学验证工作，发现天葵提取物具有明显的抗氧化作用。其中的正丁醇部位为有效部位，目前已知天葵中主要成分为氰苷类成分，因此为全面考察天葵抗白内障有效部位成分，本研究首次对天葵有效部位中氰苷类成分进行分析及含量测定，测得天葵样品中氰苷类含量为6.70%，并且参考牛峰等人对天葵指纹图谱的研究，归属了天葵有效部位中主要氰苷类成分的HPLC信号峰。为明确天葵抗氧化活性成分及拓展其药用价值提供一定的理论依据。

［1］中华人民共和国药典［M］. 2010年版（一部）.

［2］汤磊. 一种天葵提取物及其制备方法和应用[P]. 中国专利：2009 10312563.3, 2010-07-14.

［3］周训蓉, 徐冉, 肖婉, 等. 天葵各部位体外抗氧化活性及成分研究[J]. 中国实验方剂学杂志, 2015, 15: 116-119.

［4］牛锋, 张国恩, 崔征, 等. RP-HPLC 法测定天葵子中东方唐松草苷[J]. 中草药, 2006，37（4）：610-611.

［5］NIU Feng , XIE Guang-bo, CUI Zheng, et al. Determination of Griffonilide in Roots of Semiaquilegia adoxoides by RP-HPLC[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences, 2006,15 (3): 168-171.

［6］牛锋. 天葵子的化学成分及质量标准研究［D］. 沈阳药科大学, 2006.

Determination and Analysis of Total Cyanogenic Glycosides in Active Part of Semiaquilegia Adoxoides

1,1,2,*2

（1. Tongren Polytechnic College, Guizhou Tongren 554300, China； 2. Guizhou Medical University, Guizhou Guiyang 550000, China）

Total cyanogenic glycosides in active part of Semiaquilegia adoxoides were determined and analyzed. HPLC and UV were used to determine the total cyanogenic glycosides of Semiaquilegia adoxoides. The results showed that the total cyanogenic glycosides content was 6.70%, the cyanogenic glycosides mode of the HPLC characteristic chromatographic profile was identified. The method is simple, accurate and reproducible.

Semiaquilegia adoxoides; cyanogenic glycosides ; content determination; HPLC

O 657

A

1004-0935（2017）10-1036-03

贵州省科学技术厅-贵州医科大学联合基金项目（黔科合LH字[2015]7341）；贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心（黔科合[2016]平台人才5402）；贵州省普通高等学校药物化学工程研究中心（黔教合KY字[2014]219号）。

2017-09-22

龙正标（1990-），男，苗族，助教，贵州省锦屏县人，2013年毕业于贵阳医学院药学专业，研究方向:药物化学和药事管理，从事药物化学及药事管理的教学和研究工作。

汤磊（1974-），男，教授，博士生导师，研究方向：药物化学。