青天葵种质资源研究①

翟勇进 白隆华 黄 浩 唐美琼

(广西壮族自治区药用植物园 广西南宁530023)

青天葵为兰科（Orchidaceae） 芋兰属（Nervilia）植物，属多年生宿根小草本［1]。青天葵性凉，味甘，具有润肺止咳、镇静止痛、清热解毒、散瘀止痛作用，是“十大南药”之一，为药、食两用药材，曾是中国出口创汇的主要药材［2]。由于量小，野生资源缺乏，市面上价格较高。目前文献多集中在药理、组培、栽培和化学成分［3-6]等方面，而青天葵的种质资源评价方面还没有报道。本文从农艺性状、药材主成分含量和种质遗传性状3方面对青天葵种质资源的优劣开展研究，为青天葵品种选育提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料

2017年8月15日，青天葵采集于广西药用植物园科研基地青天葵种子资源圃，这些青天葵野生种群分别来自水口、响水、下冻、靖西、大新、上林、恭城、南丹、荔波，其中水口、响水、下冻、靖西、大新、上林和荔波为大叶青天葵，恭城和南丹为中、小叶青天葵。品种经广西药用植物园白隆华研究员鉴定为‘毛唇芋兰’［Nervilia fordii（Hance）Schltr.]。每个种质分别随机采500株，洗净，晾干。

1.1.2 设备

离心机（上海安亭科学仪器厂）UV3010 型；紫外分光光度计（日本岛津），AL-2041/10 万电子天平［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]；Agilent1260 高效液相色谱仪，Agilent ZORBA×SB-C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）等（美国安捷伦公司）。

1.2 方法

1.2.1 青天葵叶片测量

青天葵叶片厚度、宽度、长度、叶柄直径和长度以及球茎的直径用数显示游标卡尺测量；用电子分析天平（精确到万分之一）称重，数值取均值；叶干重：将青天葵新鲜叶片放入烘烤箱（±0.1 ℃），温度设定50 ℃，连续烘烤24 h 至恒重；折干率为叶片干重与鲜重之比。

1.2.2 氨基酸含量测定

按GB/T5009.124-3003 食品中氨基酸的测定方法测定。

1.2.3 总黄酮测定

按徐灵源等［7]方法测定。

1.2.4 鼠李柠檬素和鼠李秦素测定

色谱条件：InertsilODS-3C18（250 mm×4. 6 mm，5 μm）（GlScience.Co.Ltd）；流动相为甲醇-0. 4%∶磷酸水溶液（63∶37），流量1.0 mL/min，波长266和254 nm，40℃柱温，进样10 μL。对照品制备：精密称取鼠李柠檬素对照品0.40 mg 倒入10 mL 量瓶中，用甲醇溶解，再加至刻度，配成40 μg/mL溶液，即得鼠李柠檬素对照品溶液。精密称取鼠李秦素对照品5.60 mg 倒入10 mL 量瓶中，用甲醇溶解再加至所需刻度，配成560 μg/mL 溶液，即得鼠李秦素对照品溶液。

样品溶液的制备：精确称取青天葵药材粉末1.00 g 置于50 mL 三角瓶中，加入20 mL75%甲醇溶液，称量质量，超声萃取1 h 后取出，冷却后恢复至原质量，摇动均匀，过滤，将滤液离心即可。

1.2.5 数据处理和计算

式中t为性状重复力（遗传力），F为方差分析的检验值［8]。一般说来，t处于0和1之间，t值愈大，说明某性状的不同记录值愈相近，调查该性状所需测定的次数就可以愈少［9]，说明此性状表现出的差异更稳定。

用SPSS19.0 软件对数据进行方差分析、相关分析和多重比较。

2 结果与分析

2.1 青天葵叶片大小、茎长、鲜重、干重和折干率

从表1 可以看出，不同产地青天葵叶片大小（长度和宽度）、叶柄长、叶柄粗、叶鲜重、干重和折干率不一样。青天葵叶片长度＞10 cm 有2 个，分别为水口和大新青天葵；9～10 cm有上林、下冻和靖西青天葵3 个；＜8 cm 的有响水、荔波、南丹和恭城青天葵；水口的青天葵叶片最长，达到14.54 cm，是恭城青天葵叶片长度的1 倍以上，其宽度亦为恭城青天葵叶片1倍以上，二者叶片面积差异明显。各地青天葵种质植株叶柄长度差异较大，长度＞10 cm 的有水口、下冻、上林和大新青天葵；3～10 cm的有响水、靖西和荔波青天葵；长度＜3 cm 的有恭城和南丹青天葵。叶片鲜重方面，＞5.00 g 只有水口青天葵，达6.00 g；3.00～5.00 g有大新青天葵；2.00～3.00 g有下冻、上林和靖西青天葵；＜2.00 g有恭城、南丹、响水、荔波青天葵；叶片鲜重最重为水口青天葵，达6.00 g，最轻为恭城青天葵（1.05 g）；植株叶片鲜重最重是最轻的5.71 倍，二者差异显著。叶片干重方面，水口青天葵达0.49 g，恭城青天葵只有0.06 g，最高干重（水口青天葵）是最轻干重（恭城青天葵）的8.17倍。靖西青天葵折干率达9.80%，水口青天葵为8.08%，而恭城青天葵只有5.86%，差异显著。

表1 青天葵叶片相关指标测定结果

2.2 青天葵主成分测量

各地的青天葵种质主成分含量不一样。由表2可知，3个地点青天葵总黄酮含量超过1%，分别为恭城（1.04%）、南丹（1.14%）和水口（1.27%），其它6个青天葵种质样品总黄酮含量均不足1%；其中，水口青天葵总黄酮含量最高，达到1.27%，大新含量最低，只有0.81%；荔波青天葵总黄酮含量倒数第二，水口青天葵总黄酮含量与其它地方青天葵相互间差异显著。下冻青天葵总氨基酸含量（23.76 g/100 g）最高；水口和恭城青天葵总氨基酸含量相同（12.50 g/hg），且为最低，不同青天葵种质氨基酸高低含量经统计分析差异显著。南丹青天葵鼠李柠檬素含量最高（0.26%），其次为恭城青天葵（0.17%），恭城、南丹与其它地方的青天葵鼠李柠檬素相互间差异显著。鼠李秦素以水口青天葵含量最高（0.23%），下冻青天葵次之，其它地方含量较少，恭城、南丹和上林青天葵种质可能含量太低，在样品中未检测出。

2.3 青天葵种间变异

9 个种源的青天葵叶片形态特征分析结果见表3。从表3 可以看出，不同种源家系的叶片长度和宽度的变幅差异较大，均达到显著水平，表明同一种源不同家系的叶片长度和宽度变异较大。叶长变异系数以荔波最大，为7.73%，南丹最小（0.9%）；叶宽变异系数以上林最大，为14.80%，水口最小（1.98%）。从表4也可以看出，不同种源家系的叶柄长和叶柄直径的变幅较大，差异显著，同一种源不同家系的叶柄长度和直径变异较大。荔波叶柄长变异系数最大（22.22%），南丹最小（2.34%）；上林叶柄直径变异系数最大（17.80%），靖西最小（2.07%）。变异系数大，说明该家系种源受环境的影响大；变异系数小，则受环境影响小。叶片长宽比遗传力除荔波外，均大于0.9，说明这2个性状在同一种源不同家系中较稳定；叶柄长与直径比遗传力除恭城、水口和荔波外，均大于0.9，说明青天葵这2 个性状在同一种源不同家系中相对较稳定。

表2 不同产地青天葵品种主成分含量

表3 青天葵叶片长与叶片宽形态特征分析

表4 青天葵叶柄长与叶柄宽形态特征分析

3 讨论与结论

药用植物优良品种表现为有效成分含量高、产量高和抗劣性强等特性［10]，应用混合选择的方法，对遗传混杂种质资源群体进行纯化，可选育出优良品种［11]。青天葵主成分含量是评价其质量的关键［12]。黄酮是青天葵的主要有效成分，黄酮类化合物具有抗炎、解热、镇痛、镇咳平喘的作用，将纯化的总黄酮与总氨基酸按一定比例混合，对治疗急性肺损伤疗效显著［11]。总黄酮以水口和南丹青天葵含量较高，其它地方青天葵总黄酮在0.83%～1.04%，其中，恭城、南丹和水口青天葵种质品质较好，以水口青天葵种质品质最好。从氨基酸的角度进行判断可知，下冻和响水青天葵种质好。作为青天葵质量控制的重要指标［13]，鼠李柠檬素有治疗慢性气管炎的作用和抗氧化活性，鼠李秦素具有抗氧化活性，其含量的多少对判断青天葵品质好坏具有重要的参考价值［14]。鼠李柠檬素含量以南丹（0.26%）和恭城（0.17%）含量较高，鼠李秦素则以水口和下冻青天葵种质含量高。

从农艺性状叶片的鲜重和干重来比较，则水口青天葵种质好，其次为大新、上林、靖西和下冻青天葵，响水、荔波、恭城和南丹4个地方的青天葵种质叶片重量最低。遗传方面，青天葵的叶长和叶宽变幅差异较大；从变异系数看，同种源家系变异受环境影响较小，说明青天葵的叶片长和叶片宽以及叶柄长和叶柄直径是相对稳定的。

综合青天葵药材主成分含量、农艺性状和种质遗传性状3方面评价青天葵药材的种质，根据采集9个地方的青天葵种质资源叶片大小、鲜重、干重和折干率可知，种质资源最好的是水口青天葵，其次为下冻和响水青天葵，排名最后的种质是荔波和大新青天葵。

9 种青天葵不同种质资源中，按主成分含量、农艺性状和遗传性状选育出的青天葵优良品种“水口青天葵”，比一般青天葵药材具有主成分含量高、生物量大的特点；其在治疗疾病方面是否也具有比一般青天葵药材药用功效高、治病明显的特点，还需进一步研究。