液基细胞学技术在甲状腺结节细针穿刺病理诊断中的应用

信芳杰，林东亮，赵 诚，张晓娟，刘 晖

液基细胞学技术在甲状腺结节细针穿刺病理诊断中的应用

信芳杰1，林东亮1，赵 诚2，张晓娟2，刘 晖1

甲状腺；液基细胞学；细针穿刺

甲状腺结节为临床常见疾病，随着高分辨率超声的普及应用，甲状腺结节的检出率可达20%～76%［1］，其中恶性结节占 5%～6.5%［2］。鉴别结节的良恶性一直是临床上的难点，超声引导下细针穿刺活检（ultrasonic guidance fine-needle aspiration biopsy，UG-FNAB）是一种简便、安全、微创的细胞学检查方法，被国内外公认为是诊断甲状腺结节性质的首选方法［3－4］。液基薄层细胞学检查 （thinprep cytologic test，TCT）广泛应用于妇科宫颈脱落细胞学检测，在非妇科尤其是甲状腺细针穿刺细胞学检查中的应用报道较少。本实验对甲状腺细针穿刺标本进行传统涂片和液基细胞学制片，比较两种方法的制片质量和诊断阳性率，旨在提高甲状腺结节的早期诊断准确率。

1 材料与方法

1.1 临床资料收集2014年7月 ～2015年10月青岛大学附属医院行 UG-FNAB的患者184例，其中男性 43例，女性141例，年龄24～76岁，平均41岁，对甲状腺结节细针穿刺物分别进行传统涂片和液基细胞学制片。

1.2 方法

1.2.1 手术取材 患者取平卧位，垫高肩颈部，充分暴露甲状腺，常规消毒铺巾。使用连接22G针头的5mL注射器，超声引导下穿刺入甲状腺结节内，不同方向快速来回穿刺 15 ～20次，拔出针头后嘱患者局部压迫30 min。

1.2.2 细胞学制片方法 （1）传统涂片：细针穿刺物吹打于清洁载玻片上，置于2张载玻片之间，稍加压力反向拉开，每个标本拉片2～4张，95%乙醇固定30 min，HE染色购自珠海贝索公司。（2）液基细胞学制片：细针穿刺物直接注入液基细胞保存液中，针管在保存液中反复抽吸 5次，清洗残留在针管中的细胞，液基制片试剂购自广州安必平公司。第一次离心：600 g 10 min，弃上清液，置漩涡混合器上振荡30 s；加入5 mL细胞保存液，用软吸管将标本混匀后转移至 12 mL离心管中；第二次离心：600 g 5 min，弃上清液，漩涡振荡30 s；根据沉淀量，加入1～2 mL缓冲液，漩涡振荡混匀。使用 LBP液基细胞沉降式自动制片系统，每张涂片取200μL细胞混悬液制片，HE染色。

1.3 结果判断满意标本为涂片中可见至少6个滤泡细胞团，每团有10个以上滤泡上皮细胞［5］。结果分析采用 Bethesda报告系统，将细胞制片分为以下6类：（1）标本无法诊断或不满意；（2）良性；（3）意义不明确的滤泡性病变；（4）滤泡性肿瘤或可疑滤泡性肿瘤；（5）可疑恶性肿瘤；（6）恶性肿瘤。恶性肿瘤患者取手术后病灶组织，行组织病理学检查并以此作为金标准，所有涂片及组织切片由病理诊断医师在显微镜下观察并比较。细胞学阳性诊断率 ＝（恶性肿瘤病例数／总病例数）×100%，细胞学标本满意率 ＝（总病例数 －无法诊断或不满意病例数／总病例数）×100%。

1.4 统计学分析采用 SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料率的比较进行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞形态学比较液基细胞学制片与传统涂片在背景、细胞量、细胞形态特点、制片质量等方面均有所不同（图1、2），详见表1。

表1 两种制片方法细胞学形态比较

2.2 诊断率比较184例液基制片及传统涂片中，无法诊断或不满意标本分别有 7、16例，标本满意率分别为96.2% （177／184）和91.3%（168／184）；液基制片及传统涂片的阳性诊断率分别为51.1%（94／184）和46.2%（85／184），两种方法阳性诊断率差异无统计学意义（χ2＝0.88，P＞0.05，表2）。恶性肿瘤患者手术后行组织病理学检查，术后诊断均为甲状腺癌，液基制片及传统涂片阳性诊断与组织学诊断符合率为100%。

图1 甲状腺乳头状癌传统涂片，细胞重叠，背景杂乱，血细胞、胶质多 图2 甲状腺乳头状癌液基制片，细胞单层排列，背景清晰，可见核内假包涵体

表2 两种制片方法诊断结果比较

3 讨论

甲状腺结节临床发病率较高，结节性质的确定对甲状腺肿瘤的早期诊断、早期手术十分重要，UG-FNAB是确定甲状腺结节良恶性最可靠、最有价值的诊断方法［3－6］。甲状腺组织血供丰富，滤泡中胶质含量较多，细针穿刺物及其细胞学涂片极易受血细胞、胶质等成分的影响。因此，提高细针穿刺的准确性和特异性，获得良好的穿刺标本和高质量的细胞学涂片尤为重要。

1991年美国最先使用 TCT检测妇科脱落细胞学，近年来逐渐应用于痰液、尿液、胸腹水等非妇科标本的检查，在细针穿刺细胞学方面也取得了良好效果［7］，本实验也得出相似结论：TCT利用专门的细胞保存瓶和保存液最大限度的收集细针穿刺细胞，穿刺针头可在保存液中反复抽吸冲洗，使细胞富集集中，避免传统涂片穿刺针中大量穿刺物的残留和丢失。液基细胞学制片过程中，通过反复离心、振荡、去上清液，利用沉降式制片富集有效的诊断性细胞，全自动制片染色机制片，使细胞单层排列，均匀分布，制成直径 13 mm的圆形薄片。Frost等［8］表明 TCT涂片1～2张就可以满足甲状腺穿刺细胞学的诊断。相比传统涂片法液基细胞学制片可使诊断细胞更加集中，缩小观察范围，提高诊断效率。

镜下观察两种制片细胞学形态，传统涂片背景杂乱，细胞成团块状或重叠排列，红细胞、胶质等成分混合，诊断性细胞易被遮盖，且细胞量多少不定、分散分布，易导致假阴性；而液基细胞学制片细胞集中于玻片中央，背景干净清晰，细胞呈单层排列，红细胞、胶质减少，细胞核更清晰，更易观察核膜、核沟和核内假包涵体，细胞学制片质量明显提高。

液基细胞学制片通过标本的收集、转运、分离提取和自动化制片，降低了涂片不满意率，本组184例标本中，TCT无法诊断或不满意标本仅7例，相较于传统制片16例，标本满意率由91.3%（168／184）提高到96.2%（177／184）；两者阳性诊断率分别为51.1%（94／184）和46.2%（85／184），检出的阳性例数有所提高，但两种方法的阳性诊断率差异尚不具有统计学意义，与许映斌等［9］报道的一致。本实验两种制片方法的恶性检出率均高于文献报道的 5%～6.5%［2］，是由于患者在首次甲状腺超声检查后，超声医师对可疑恶性病例进行筛选，再次行超声引导下细针穿刺，导致恶性检出率的提高。

液基细胞学制片与传统涂片一样，也有一定的局限性，细针穿刺的结节太小或未取到典型病变区域，或穿刺细胞量少等，均可影响病理诊断。因此，有经验的超声医师和熟练准确的穿刺手法是获得高质量标本的前提。另外，细针穿刺标本无法提供病变组织的整体结构及其与周围组织的关系，无法观察是否浸润包膜或血管。因此 TCT对滤泡性肿瘤的诊断较为困难。

细针穿刺细胞量对病理诊断有着重要作用，本实验发现根据细针穿刺物的多少，向液基细胞学制片最终离心沉淀物加入1～2 mL的缓冲液，制片时每张玻片吸取200μL细胞混悬液可获得满意涂片。液基细胞学制片可以提供良好的背景和清晰的形态，有利于存储标本和对同一标本进行多种分析，可进行特殊染色或免疫组化以辅助诊断［10－11］。

本组结果显示，TCT技术应用于甲状腺细针穿刺细胞学诊断中，可改善穿刺细胞丢失率高、涂片不均匀等问题，使制片质量明显提高，且阳性诊断率与传统涂片相似，具有临床应用价值。

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R 446.8

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1001－7399（2017）01－0107－03

10.13315／j.cnki.cjcep.2017.01.029

接受日期：2016－10－30

青岛大学附属医院青年科研基金（No2093）

青岛大学附属医院1病理科、2腹部超声科，青岛 266555

信芳杰，女，硕士，主管技师。Tel：（0532）82919350，

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