液基薄层细胞学技术联合高危型人乳头瘤病毒检测在宫颈癌筛查中的临床应用研究

李光梅　冼志霞　邓舒静

【摘要】 目的 研究高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）检测与液基薄层细胞学技术（TCT）在宫颈癌前病变中的临床运用效果， 对比分析其敏感性及特异性。方法 350例宫颈癌病理筛查阳性者分别采用TCT与HR-HPV检测进行筛查， 对筛查阳性患者6个月1次采用TCT与HR-HPV联合检测进行跟踪测定， 持续3年， 分析研究HPV-脱氧核糖核酸（DNA）载量与疾病进程的关联性， 并与病理诊断结果比较， 讨论两者对疾病检测的敏感性及特异性。结果 350例筛查阳性患者中， 其中HR-HPV筛查阳性328例， 阳性率93.7%（328/350）， TCT筛查阳性234例， 阳性率66.9%（234/350）， 比较差异有统计学意义（P<0.05）。328例HR-HPV阳性患者中， 与病理检查结果宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅱ级以上者相符合为126例， 敏感性为89.6%、特异性为38.4%；234例TCT筛查阳性患者中， 与病理结果符合者190例， 敏感性为68.6%、特异性为81.2%， 两项检测特异性、敏感性比较差异有统计学意义（P<0.05）。经过追踪检测发现， 宫颈病变CINⅠ级或以上病例病灶复发/残留与病毒载量有一定关联性， 宫颈病变CIN分级越高， 与病毒载量相关性越高（P<0.05）。结论 TCT技术和HR-HPV检测方法各有优势， HR-HPV联合TCT技术可以有效提高宫颈癌检出效率， 能够弥补单一检测方法的不足；HR-HPV检测可以作为病程监控的敏感指标；将TCT与HR-HPV联合檢查， 值得推荐。

【关键词】 宫颈癌；高危型人乳头瘤病毒；液基薄层细胞学技术

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.02.014

Research of clinical application of thinprep cytologic test combined with high-risk human papilloma virus detection in cervical cancer screening LI Guang-mei， XIAN Zhi-xia， DENG Shu-jing. Guangdong Wuchuan City Maternal and Child Health Hospital， Wuchuan 524500， China

【Abstract】 Objective To research clinical application effect by high-risk human papilloma virus （HR-HPV） detection and thinprep cytologic test （TCT） in precancerous lesions of uterine cervix， and to analyze their sensibility and specificity. Methods A total of 350 patients with positive pathological screening of cervical cancer all received TCT and HR-HPV detection for screening. Combination of TCT and HR-HPV detection as applied once per 6 months for monitoring detection in patients for 3 years. Analysis was made on correlation between HPV-desoxyribonucleic acid （DNA） capacity and disease progress. Comparing with pathological diagnosis outcomes， their sensibility and specificity in disease detection were discussed. Results Among the 350 patients with positive screening outcomes， there were 328 positive cases in positive HR-HPV screening， with positive rate as 93.7% （328/350）， and 234 positive cases in TCT screening， with positive rate as 66.9% （324/350）. Their difference had statistical significance （P<0.05）. Among 328 positive cases in positive HR-HPV screening， there were 126 corresponding cases with pathological detection over Cervical intraepithelial neoplasias （CIN） Ⅱ grade， with sensibility as 89.6% and specificity as 38.4%. Among 234 positive cases in TCT screening， there were 190 corresponding cases with pathological detection， with sensibility as 68.6% and specificity as 81.2%. The difference of sensibility and specificity had statistical significance between the two detection measures （P<0.05）. Monitoring detection showed certain correlation between lesions recurrencel residual and viral capacity in cases with over cervical lesion CIN Ⅰ grade， and higher cervical lesion CIN grade led to close correlation with viral capacity （P<0.05）. Conclusion Both TCT and HR-HPV detection contain their own advantages. Combination of HR-HPV and TCT can effectively improve detection efficiency of cervical cancer and cover shortages of single detection method. HR-HPV detection can be taken as the sensitive index in disease course monitoring. Combined detection by TCT and HR-HPV is worth recommending.

【Key words】 Cervical cancer； High-risk human papilloma virus； Thinprep cytologic test

宫颈癌为仅次于乳腺癌的女性第二位高发恶性肿瘤， 近年来， 该病发展呈现年轻化趋势， 分子生物学的研究结论显示：宫颈癌的发生跟HR-HPV的感染密切相关[1-4]。研究表明：HPV感染， 尤其HR-HPV感染是导致宫颈癌及其癌前病变的重要因素[1， 2]；TCT是采用TCT系统检测宫颈脱落细胞并进行细胞学分类诊断， 它是目前公认的较为先进的一种宫颈癌细胞学检查技术， 与传统的宫颈刮片巴氏涂片检查相比明显提高了标本的满意度及宫颈异常细胞检出率， 成为宫颈癌筛查的主要手段。本课题以本市区年龄20～60岁有性生活史的社区女性为研究对象， 收集本社区女性宫颈癌病理筛查阳性患者， 对入选对象同时行TCT及HR-HPV检测， 对阳性患者持续跟踪3年， 探讨HPV感染与宫颈癌疾病的关联性， 旨在评价TCT联合人乳头瘤病毒检测对社区女性宫颈癌筛查的有效性。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选择本地区2011年9月～2013年9月宫颈癌病理筛查阳性者350例作为研究对象， 年龄20～60岁， 平均年龄（33.0±9.5）岁， 入选标准：已婚或有性生活史、表现健康、无妇科重大疾病或宫颈手术史， 产次0～2次， 平均产次1.5次， 妊娠史0～3次， 平均妊娠史1.8次；排除标准：排除已经诊断为宫颈癌或因各种原因切除子宫或宫颈的患者。本研究征得患者知情同意。

1. 2 方法 受检者3～5 d内无阴道冲洗史或阴道内用药， 受检前24 h禁性生活， 由妇科医生留取样本分别置于液基细胞专用保存瓶/HPV专用病毒保存管中送检， 所有检测项目完成检测时间不得>72 h；采用杭州博日全自动适时荧光定量DNA扩增技术， 对筛查样本进行HR-HPV检测， 试剂采用潮州凯普生物技术有限公司产品， 其中HPV基因型包括HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68共13种；运用全自动液基细胞检测仪， 对病变细胞进行固定、分离、洗涤、染色、固片、镜检等流程， 实现对靶细胞的最高检出效果， 仪器为珠海某生物公司提供， 试剂耗材为公司配套产品， 操作及结果判读见说明书。对TCT筛查阳性、HR-HPV筛查阳性或TCT与HPV共同检测阳性者由专人负责跟进， 提醒患者定期复查， 6个月1次， 持续跟进3年。

1. 3 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验；病理分型与病毒载量的关系采用线性关系分析。P<0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

350例筛查阳性患者中， 其中HR-HPV筛查阳性328例，

阳性率93.7%（328/350）， TCT筛查阳性234例， 陽性率66.9% （234/350）， 比较差异有统计学意义（P<0.05）。328例HR-HPV阳性患者中， 与病理检查结果CIN Ⅱ级以上者相符合为126例， 敏感性为89.6%、特异性为38.4%；234例TCT筛查阳性患者中， 与病理结果符合者190例， 敏感性为68.6%、特异性为81.2%， 两项检测特异性、敏感性比较差异有统计学意义（P<0.05）。经过追踪检测发现， 宫颈病变CINⅠ级

或以上病例， 病灶复发/残留与病毒载量有一定关联性， 宫颈病变CIN分级越高， 与病毒载量相关性越高（P<0.05）。见表1。

3 讨论

据世界卫生组织（WHO）报道， 全世界每年发生的宫颈癌患者大约为50万左右， 是仅次于乳腺癌的第二大女性杀手， 而发生在我国的宫颈癌患者每年则有约15万人之众， 接近全球发病人数的1/3.， 高居我国女性妇科恶性肿瘤的第一位[3]， 大量流行病学及分子生物学资料研究显示：HPV感染与宫颈癌及其宫颈癌前病变关系密切[4-6]， 由于大部分HPV感染者多无临床症状或临床症状不明显而往往被患者所忽视， 进而导致病毒在患者体内潜伏从而引发宫颈细胞进行性病变， 导致严重问题， 所以， 宫颈癌被检出者往往处于临床中晚期而致患者失去了最佳治疗时间， 影响治疗效果进而直接影响患者生存时间， 因此， 宫颈癌的早期诊断显得尤为重要[6， 7]；本研究采用TCT对宫颈脱落细胞进行筛查， 特异性高达81.2%， 与相关研究的结论相近[4， 8]， 值得推广。

研究发现：HPV感染后， 往往伴随宫颈上皮细胞内瘤样病变的存在[7-10]， 孙笑非等[5]研究认为：持续携带HPV强烈提示感染者处于继发癌前病变的高危环境中；许晓红等[6]研究提示：宫颈癌中HPV感染率（84.6%）超过80%， 明显高于宫颈糜烂感染率（52.1%）， 表明HPV感染是导致宫颈癌的主要原因， 且HPV感染与宫颈糜烂、与宫颈癌的发生、发展密切关联；陈艳等[11]研究显示：HPV的持续阳性是CIN发生发展的重要原因， 宫颈病变及宫颈癌的病灶残留与复发与HPV病毒载量明显关联， 与本研究结论相近， 提示监控HPV病毒复制及载量检测， 可以作为宫颈疾病监控的有效手段。

本研究显示， HR-HPV检测与TCT筛查与病理检查结果对比发现， HR-HPV具有较高敏感性但特异性稍差， 一方面说明宫颈疾病改变是一种时间漫长的渐进性过程， 同时也为临床防范宫颈疾病恶变提供了时间窗口；TCT筛查虽然有较高的特异性， 而敏感性稍差且需要有高年资专业医生操作及诊断， 稍显不足， 但TCT作为一种非创伤性检测手段， 仍不失为一种可靠而方便的检查方法。

总之， 将TCT与HR-HPV联合检查， 既满足了临床早发现早干预的需求， 又能借助对HPV病毒载量的检测起到对疾病转归情况的实时监控， 不失为一种特异且高效的检测手段， 值得推荐。

参考文献

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[11] 陈艳， 林琳， 贾志强， 等.高危型HPV载量及IFNγ基因多态性与LEEP术后CIN患者预后的相关性.温州医科大学学报， 2015， 45（10）：739-741.

[收稿日期：2017-01-10]