阿哌沙班片的含量及有关物质测定分析

高媛

哈药集团制药总厂 150000

阿哌沙班片的含量及有关物质测定分析

高媛

哈药集团制药总厂 150000

目的：通过科学的方式建立阿哌沙班片这种药物之中含量以及相关物质的对应检测方法。方法：在研究的过程之中通过对反相类型的高效液相色谱这一技术的使用，来对药品进行相应的含量检测。在检测过程之中设定流动相为零点零五摩尔每升的乙腈溶液，以及磷酸二氢钾溶液，并将试验过程之中的液相流动速度设定为每分钟一毫升的流动速度，在试验之中相应检测波长设定为293nm波长，整个试验过程之中的柱温都要保持在二十五摄氏度。结果：通过让阿哌沙班片这一药物在设定色谱条件之下运行，能够使得本次试验所用药品之中的主要成分和杂质达到良好的分离效果。在本次试验之中阿哌沙班片这一药品的质量在四点三微克每升到四十五微克每升之间的时候，其和相应的数据峰面积能够呈线性关系；并且在后续的研究过程之中，精密度数值、稳定性数值、重复性试验数值相应的RSD均小于1.1%；阿哌沙班片这一药品在进行加样过程之中的回收率能够达到99.93%，RSD数据为0.3%。结论：经过科学的分析以及严谨的比较，最终确定通过这种试验方式进行测定，不但能够具有良好的质量测定效果，还能够具有良好的灵敏度，从而也就能够进一步的促进阿哌沙班片这一药品在质量控制方面的测定效果。

制药；药物含量；测定；阿哌沙班片

现阶段人们在相应的生活水平方面、饮食条件等方面都有了跳跃式的发展，使得人们生活之中的各个方面都有较为良好的保证，但与此同时，人们也要能够充分的认识到，在现阶段仍存在着众多的疾病，影响着人们的生活。在对这些疾病进行治疗的过程之中，为了能达到良好的治疗效果，医药领域的研究人员成功的开发出了阿哌沙班，商品名为艾乐通，属于口服选择性活化Xa因子抑制剂，为全球第三代口服抗凝药。该药由辉瑞公司与百时美施贵宝公司联合开发研制，2012年通过美国食品与药品管理局（FDA）批准上市用于降低非瓣膜性房颤患者的卒中和系统性栓塞发生的风险，现有2.5mg和5mg两种片剂规格。相关调查数据显示，血栓栓塞性疾病具有高风险、高死亡率的特点。在该药批准上市前，已有华法林、达比加群、利伐沙班等治疗相关疾病的药物。该药具有高选择性、高安全性等特点，预计2017年销售额能达到42亿美元，具有极高的市场经济价值。目前，国内未见关于该药质量标准的相关报道，因此，本试验建立了反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定该药的含量及有关物质，为建立阿哌沙班片的质量控制标准提供依据。

1.试验方式以及试验结果

1.1 色谱条件的设定，色谱柱：WatersXBridgeShieldRP18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用50%磷酸溶液调节pH至3.0）（20∶80，V/V）；检测波长：293nm；流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样量：10μl。

1.2 试验所用溶液的制备，对照作用溶液的制备：在制备的过程之中，首先需要实验人员能够精确的称量出阿哌沙班片这一药品 5毫克，在此基础上技术人员可以通过使用超声波促进这一物质的溶解，并最终制成含量为零点零二毫克每毫升的药物溶液。

供试品作用溶液的制备：在进行制备的时候，拿取两片本次试验所用的阿哌沙班片药品，并将这些药品通过研钵完全的粉碎，经过反复研磨之后从研钵之中称量出大约五毫克的药品，之后将这些药品放置到一百毫升大小的容量瓶之中，并通过超声波对这溶液进行震荡处理，保证药品能够在溶液之中混合均匀，之后还需要技术人员能够通过过滤膜对这一溶液进行过滤。

空白组溶液：在制备空白对照组溶液的过程之中，需要技术人员能够按照试验需求将空白辅料放置到容量为一百毫升的容量瓶之中。再加入流动相稀释至刻度，超声溶解，滤过（0.50μm滤膜），取续滤液，即得。

1.3 专属性试验

分别取对照品、供试品和空白样品溶液适量，各精密量取10μl，按色谱条件进样分析，记录色谱图。色谱基线平稳，各色谱峰分离度＞1.5，理论板数以阿哌沙班计＞3500，且空白辅料对阿哌沙班测定无干扰。

1.4 线性关系考察

取约5mg阿哌沙班对照品，精密称定，置于100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，超声（功率：200W，频率：40kHz）使完全溶解，分别精密量取0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5ml置于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成梯度浓度溶液，按照色谱条件依次进样，记录色谱图。以阿哌沙班峰面积（y）为纵坐标、质量浓度（x，μg/ml）为横坐标，进行线性回归，回归方程为y＝2.735×104x－1.127 ×10（3r＝0.9994）。结果表明，阿哌沙班的质量浓度在 4.30～45.00 μg/ml范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

1.5 精密度试验

取阿哌沙班对照品溶液适量，按色谱条件连续测定峰面积6次。结果，阿哌沙班峰面积和其保留时间的RSD分别为0.038%和0.024 %（n＝6），表明仪器的精密度良好。

1.6 稳定性试验

取供试品溶液，于25℃下放置0、2、4、6、8h时进样分析，测定阿哌沙班的峰面积。结果，阿哌沙班峰面积和保留时间的RSD分别为1.07%和1.10%（n＝5），表明供试品溶液在8h内稳定。

1.7 重复性试验

取阿哌沙班片样品（批号：20140202）细粉适量，共5份，分别按“1.2”项下条件制备供试品溶液，按色谱条件进样分析，平行操作5次，测定含量。结果，阿哌沙班含量的RSD为0.41%（n＝5），表明本方法的重复性良好。

1.8 加样回收率试验

精密称取9份已知含量的阿哌沙班样品细粉，置于100ml量瓶中，每3份分别加入4、5、6mg阿哌沙班对照品，再添加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液，得 3组不同浓度的供试品溶液，按色谱条件注入HPLC仪测定，计算回收率。回收率为99.93%，RSD为0.3%，回收率符合要求。

1.9 有关物质测定

每批阿哌沙班片分别取 5片置于研钵中研细、混匀，取细粉适量（约相当于阿哌沙班5mg），置于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，超声溶解后制成每1ml中含0.5mg阿哌沙班的溶液，滤过，收集续滤液，即为供试品溶液。按色谱条件注入高效液相色谱仪测定，结果符合规定。

2.讨论

阿哌沙班作为第三个上市的新一代口服抗凝药，能有效地预防血栓，用于接受过髋部或膝部置换手术患者的血栓预防，其安全性和有效性均超出同类药物，具有极高的经济价值。据国家食品药品监督管理总局药品审评中心查询，当前已有数十家医药企业对其进行原料药以及制剂的仿制申报。所以建立该药物完善的质量控制方法具有很好的现实意义。

色谱检测过程选择 200～400nm波长进行光谱扫描，发现在293nm检测波长附近阿哌沙班和相关成分均有最大吸收，因此确定本试验检测波长为293nm。

在预实验中发现，柱温25℃时拖尾因子为0.89，柱温30℃时拖尾因子则为1.53。可见柱温升高会引起色谱峰的拖尾，对测定其有关物质可能会产生不同程度的影响。为确保整个试验结果的准确性，测定过程中应严格控制柱温参数，防止出现拖尾影响。

综上所述，本试验建立的方法操作简便、结果准确、灵敏度高，适用于阿哌沙班片的含量及有关物质测定，对建立阿哌沙班片的质量控制标准有一定的参考价值。

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1672-5018（2017）02-010-1