HPLC测定双黄连口服液中连翘苷的含量

刘爱华

哈药集团三精制药有限公司 150000

HPLC测定双黄连口服液中连翘苷的含量

刘爱华

哈药集团三精制药有限公司 150000

目的：通过 HPLC的方法来对双黄连口服液的连翘苷成分进行准确地测定。方法：使用 HPLC法进行测定。结果：在0.187¯0.876μg的范围内，连翘苷的现行关系比较好，平均回收率能够达到97.8%，RSD=1.6%。结论：HPLC方法用于检测双黄连口服液的连翘苷的成分的数值比较准确，操作方法相对比较简单，是一种可行的检测方式。

双黄连口服液；连翘苷；HPLC

双黄连这种药品是一种极为常见的药品，其药品状态类型比较丰富，既有口服液又有胶囊，其中口服液在我国的药品市场中存在的时间比较长，口服液中含有黄岑、金银花以及连翘等中药药材，能够有效地清热解毒，缓解感冒，并且有较为明显的治疗效果，属于一种我国的常用中成药。为了保证双黄连口服液的药品质量，本文对其成分中的连翘苷进行测定，现有实验过程如下：

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

高速液相色谱仪、紫外线检测器、数据处理器、色谱柱、双黄连口服液、连翘苷的对照药品，将甲醇作为色谱纯，实验用水均为重度蒸馏水，其他的所有实验中用到的试剂作为分析纯。

1.2 方法

在进行色谱系统的条件以及适用性的检验时，需要用键合性的硅胶作为实验的填充剂，流动相需要乙腈与水，其中乙腈占总体流动相的四分之一，水占总体流动相的四分之三，流速为每分钟 1毫升，进行检测的波长为276nm，从理论上来看连翘苷的处于波峰处的数值应当高于或等于3000。

进行实验的对照品的制备时，需要将已经准备好的连翘苷称取15毫克，称取方法要保证准确性，首先将试样的连翘苷放置在五氧化二磷的真空环境下进行干燥，干燥的时间为一天，采取经归法对其含量进行测定，测出含量为 97.53%，将这些连翘苷放置在容量为150毫升的棕色容量瓶中，再适当地加入浓度为50%的甲醇，使用超声波的方式对其进行溶解，溶解后再放入到较冷的环境中，不断地对其进行加水稀释，直到达到刻度，再将棕色容量瓶摇晃均匀，将这个药品作为对照性的药品。

进行实验的供试品制备时，需要通过精密吸取的方法取得双黄连口服液 5毫升，通过实验室的蒸发作用，使液体便感，再将其放置在中性的氧化铝的实验柱上，使用浓度为 70%的乙醇帮助口服液进行洗脱，再对洗脱后的溶液进行收集，使其逐渐浓缩，直到变干。洗脱后得到的残渣还需加入浓度为 50%的甲醇进行溶解，溶解完成后将混合溶液转移到容量为10毫升的实验量瓶中，不断对其进行稀释并摇匀，通过微孔型的滤膜进行过滤，就得到了可以进行测定成分的供试品。

测定双黄连口服液的连翘苷的含量时，要采取精密吸取的吸取方式吸取10μl供试品溶液以及对照药品，将其加入到高速液相色谱仪，通过峰面积的方法以及外标法计算其含量，进行 3批数据的测定，多次试验可以保证其测量结果相对比较稳定。

精密吸取“1.2.2”项下对照品溶液5、10、15、20、25 ml，分别置25 m1量瓶中，加50%甲醇，振摇，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，依次吸取10μl进样。每一浓度进样2次，求峰面积平均值，以连翘苷峰面积平均值为纵坐标。

取处方中除连翘以外的其他药材，按本品制法制得连翘阴性样品，然后按“1.2.3”项下方法制得阴性供试溶液，进样测定。

精密吸取连翘苷对照品溶液，重复进样6次，每次10μl，测定峰面积值。

取同一批号样品5份，分别按1.2.4”项下方法测定样品中连翘苷。加样回收率试验 分别精密吸取已知含量的样品5份，每份3 ml，分别加入“1.2.2”项下对照品溶液5 ml，按“1.2.4”项下方法测定含量，再计算加样回收率。

2 结果

通过测定供试品以及对照品的连翘苷含量后得到的数值分别为0.158、0.145/0.157mg。m l-1。

连翘苷进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，线性回归得回归方程：Y= 7.370×106X+ 5.259× 105（r= 0.9991）。结果表明，连翘苷在0.187～ 0.876μg范围内的线性关系良好。

RSD=1.20%（n= 6）。表明仪器精密度良好。平均含量为 0.155 mg·ml- 1，RSD= 1.77%，表明分析方法精密度良好。

3 讨论

HPLC法测定双黄连口服液中连翘苷的含量，简便、快速、重复性好，可供修订双黄连口服液质量标准时参考。当制备供试溶液时，采用氧化铝柱进行供试品的前处理，能有效地除去干扰杂质；氧化铝柱的净化回收率均超过 98.0%。说明用氧化铝进行前处理效果较好。

实验表明待测成分的饱和流出体积主要受溶液极性的影响，而与其浓度无明显相关性，因为微柱固相萃取相当于一个连续进样的过程。曾将双黄连口服液稀释为含 30%的甲醇的溶液作流出曲线，结果连翘苷在近20mL时才达到流出平衡，改为含40%的甲醇较为合适，有利于连翘苷的平衡流出和弱极性杂质的除去。将供试品浓缩再用甲醇提取或用正丁醇萃取处理制备的色谱图与本法所得色谱图比较，虽在前端均较干净，但在此色谱条件下皆对连翘苷的分离无影响，即 RP-SPE法制备供试品溶液较简便实用。3.3 因无本品阴性对照样品，缺其阴性对照图谱；用 BECKMAN高效液相色谱仪及其 508型二极管阵列检测器测定对照品溶液和供试品溶液的连翘苷色谱峰，结果在波长 200～ 235nm范围内两者的光谱相似性为0.9967，表明本法所分离的连翘苷色谱峰为单一峰，无其它杂质干扰。3.4 从测定结果来看，在不同品牌样品之间和同一品牌的不同批号样品之间，连翘苷的含量差异较大，这可能与药材质量不稳定有关，但均远小于按药典中规定连翘含连翘苷的最低含量 0.15%与双黄连口服液处方含连翘 750（g·（1000mL）- 1）推算的最低含量 11.25（mg·支- 1），因而有必要在质量标准中增加对连翘苷含量的控制。

在流动相为甲醇-水（40∶60）时，黄芩苷无可检测的色谱峰，但在多次进样后会抬高基线，影响连翘苷的测定，还会使柱压不断增加；将流动相改为甲醇-水-冰醋酸（40∶ 60∶ 1）后，连翘苷色谱峰提前，其后出现黄芩苷色谱峰，表明流动相中加入冰醋酸可避免黄岑苷等成分在分析柱上填积而使柱压升高和造成基线不稳。

双黄连口服液是一种能够有效治疗外部感冒伤风引起的头疼、脑热等症状的药品，口服液比胶囊更加容易进行吞咽，因此也受到了我国患者的广泛欢迎，一般双黄连口服液能够缓解咳嗽、发热、咽痛等病症，并且与其他复合型的重要相比，效果更快，这要得益于其成分中的各种优质的中药材，连翘苷发挥了重要的作用，连翘苷是木犀科的中药连翘的提取物，将连翘生长出的干燥果实进行提取，就可以成功地提取到一定数量的连翘苷，一公斤的连翘可以提取出3%的连翘苷，连翘苷可以有效地发挥起解除毒素，缓解发热，消除肿痛的药效，因此可知双黄连口服液中的连翘苷对其总体药效有着较大的影响。连翘苷这种中药材所具备的功效要远远超出双黄连口服液本身，即使发生丹毒也可通过连翘苷进行治疗。另外连翘苷的服用方式也比较多，既可用于药用，制成如双黄连口服液这种药品，也可直接用水来进行煎制，用途十分广泛。

[1] 姚楠，陈佳.新建一种 HPLC法测定不同产地连翘子中连翘苷含量[J].徐州医学院学报.2014（11）

[2] 柴莉娜，吕君亮.HPLC测定双黄连口服液中连翘酯苷A的含量[J].食品与药品.2013（01）

[3] 王战红，谭玉彬，李淑芳，王淑美，梁生旺，张海龙，陈国琴.高效液相色谱法测定双黄连口服液有效部位中连翘苷含量[J].中国中医药信息杂志.2012（03）

R591.42+2

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1672-5018（2017）02-019-1