阿奇霉素原料及其分散片含量测定方法之比较研究

徐丽娟

摘 要：本文对阿奇霉素原料及其分散片含量测定方法之比较研究。高效液相色谱法：固定相为安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5μm），0.045mol/L磷酸二氢胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH至7.35）为流动相，检测波长为210nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃；分光光度法：采用pH6.0的磷酸盐缓冲液作为溶剂，加入75%硫酸溶液混合，放冷至室温后测量；检测波长为482nm。两种方法均可对阿奇霉素原料及其分散片含量进行测定。

关键词：阿奇霉素；方法；比较

阿奇霉素为半合成的十五元环大环内酯类抗生素。阿奇霉素化学名称为：（2R，3S，4R，5R，8R，10R，11R，12S，13S，14R）-13-[（2，6-二脱氧-3-C-甲基-3-O-甲基-α-L-核-已吡喃糖基）氧]-2-乙基-3，4，10-三羟基-3，5，6，8，10，12，14-七甲基-11-[[3，4，6-三脱氧-3-（二甲氨基）-β-D-木-已吡喃糖基]氧]-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮。阿奇霉素适应敏感细菌引起的鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作；沙眼衣原体及非多种耐药淋病奈瑟菌所致的尿道炎和宫颈炎；化脓性链球菌引起的急性咽炎、急性扁桃体炎；肺炎链球菌、流感嗜血杆菌以及肺炎支原体所致的肺炎等。本文对阿奇霉素原料及其分散片含量测定方法之比较研究。

1 仪器与试药

美国必能信超声波清洗机（北京星越天成科技有限公司）；CF-B數显电热恒温水浴（上海雷韵试验仪器制造有限公司）；1810-B石英自动双重蒸馏水器（上海康路仪器设备有限公司）；X1600四元低压梯度液相色谱仪（南京皓而普分析设备有限公司）；Aurora-F1实验室自动洗瓶机（杭州喜瓶者生物技术有限公司）；HWY-501A型恒温水浴（上海昌吉地质仪器有限公司）；FA1204CFAC型全自動內校電子分析天平（北京同德创业科技有限公司）；DR5000台式紫外可见分光光度计（广州市怡华新电子仪器有限公司）。阿奇霉素对照品由中国药品生物制品检定所提供。乙腈（北京亚太龙兴化工有限公司）、磷酸（南京大唐化工有限公司）、磷酸二氢钾（北京亚太龙兴化工有限公司）、冰醋酸（北京亚太龙兴化工有限公司）、三乙胺（北京迈瑞达科技有限公司）、甲醇（青岛市金宏鑫化工有限公司）、磷酸二氢铵（南京大唐化工有限公司）。

2 高效液相色谱法测定

2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5μm）；0.045mol/L磷酸二氢胺溶液∶乙腈（2∶1）（用三乙胺调pH至7.35）为流动相；检测波长为210nm。理论板数按阿奇霉素峰计算应不得低于2000。

2.2 供试品溶液的制备

取阿奇霉素原料及其分散片，分别精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入流动相10ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）5分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取阿奇霉素对照品约20mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含1mg的溶液，作为对照溶液。

2.4 准曲线的制备

制备浓度为0.5、1、2、4、6、8、10mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，阿奇霉素对照品在0.5～10mg·mL-1范围内线性关系良好。

2.5 重现性试验

分别称取同批阿奇霉素原料及其分散片样品6份，分别依照2.3项下供试品制0.79%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。

2.6 回收率试验

采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的阿奇霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.72%。

3 分光光度法测定

3.1 供试品溶液的制备

取阿奇霉素原料及其分散片，分别精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙醇10ml，称定重量，超声处理5分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

3.2 对照品溶液的制备

精密称取阿奇霉素对照品约20mg，用乙醇溶解并稀释成每1ml中含2mg的溶液，作为对照溶液。

3.3 检测波长的选择

取对照品溶液，加pH6.0的磷酸盐缓冲液稀释50倍，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振摇混匀，放置30min，冷却至室温。以溶出介质为空白，在190nm～700nm范围内进行扫描，结果阿奇霉素在482nm处有最大吸收，且辅料在此波长处无吸收，故选择482nm作为测定波长。

3.4 线性关系试验

取对照品溶液，加pH6.0的磷酸盐缓冲液分别稀释成阿奇霉素浓度分别为5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1、60μg·mL-1、80μg·mL-1，精密量取5mL，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振摇混匀，放置30min，冷却至室温。以溶出介质为空白，分别在482nm处测定其吸收度，以浓度（C）对吸收度（A）进行线性回归，计算回归方程。结果表明阿奇霉素的浓度在5～80μg·mL-1范围内与吸收度呈良好线性关系。

3.5 样品含量测定

取供试品溶液，用pH6.0的磷酸盐缓冲液稀释50倍，摇匀，滤过，精密量取5ml，精密加入75%的硫酸溶液5mL，振摇混匀，放置30分钟，冷却至室温。以溶出介质为空白，分别在482nm处测定其吸收度，计算含量。

3.6 重现性试验

取同批样品5份，按样品含量测定项下方法测定，结果含量的RSD为0.86%，表明方法重现性较好。

3.7 回收率的测定

精密称取阿奇霉素标准品适量，按阿奇霉素分散片处方比例加入其他辅料，照“样品含量测定”项下测定阿奇霉素含量，计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.93%。

4 结果

两种方法均可对阿奇霉素原料及其分散片含量进行测定。

参考文献

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[3]纪标，王东凯，薛梅妍，李志强，徐飒.HPLC法测定注射用门冬氨酸阿奇霉素的含量和有关物质[J].中国抗生素杂志，2005（06）.

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[5]李海英，陈悦.高效液相色谱电化学检测法在硫酸阿奇霉素含量测定和有关物质概况分析上的应用[J].西北药学杂志，2003（04）.