青鹏膏剂穴位贴敷对大鼠肥大细胞数量和脱颗粒率的影响*

屈敬阳，刘丁丁，安 娜，许 倩，陈 龙，杨志新△

（1.承德医学院，河北承德 067000；2.华北理工大学中医学院）

青鹏膏剂穴位贴敷对大鼠肥大细胞数量和脱颗粒率的影响*

屈敬阳1，刘丁丁2，安 娜1，许 倩1，陈 龙1，杨志新1△

（1.承德医学院，河北承德 067000；2.华北理工大学中医学院）

目的:观察青鹏膏剂大椎穴贴敷对大鼠穴区组织肥大细胞（MC）数量和脱颗粒率的影响。方法：雄性Wistar大鼠30只随机分为青鹏膏剂穴位贴敷组、电针组和空白对照组，每组10只。青鹏膏剂组大鼠大椎穴穴区局部剃毛后涂抹青鹏膏剂（约25mg，2次/天，每次20min），电针组大鼠大椎穴给予电针刺激。采用甲苯胺蓝染色观察MC的形态、数量和脱颗粒率。结果：青鹏膏剂组和电针组大鼠穴区组织内MC细胞数量增多、体积增大，细胞膜破裂，细胞轮廓不规则，MC脱颗粒现象明显，且MC多沿神经或血管分布。青鹏膏剂组和电针组大鼠穴区组织MC数量比较差异无统计意义（P＞0.05），但均明显高于空白对照组（P＜0.05）。三组大鼠穴区组织脱颗粒的MC个数和MC脱颗粒率由高到低依次为青鹏膏剂组、电针组、对照组，两两比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：青鹏膏剂穴位贴敷可激活MC，出现数量增多及募集和脱颗粒现象。

青鹏膏剂；穴位贴敷；大椎；肥大细胞；脱颗粒

青鹏膏剂[1]为藏传经典外用方剂，具有清热解毒、活血化瘀、祛风除湿、消肿止痛的功效，可用于治疗痛风、风湿、类风湿关节炎、热性“冈巴”、“黄水”等病变引起的关节肿痛、扭挫伤肿痛、皮肤瘙痒、湿疹等。以往对青鹏膏剂的研究多侧重于临床应用[2-3]。本研究选取大椎穴进行穴区局部青鹏膏剂贴敷，观察大鼠局部组织内肥大细胞（MC）数量的变化和脱颗粒情况，探索青鹏膏剂穴位贴敷的药理作用机制。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂 电针治疗仪G6805-Ⅱ型，青岛鑫升实业有限公司；硫代乙酰胆碱，日本TCI公司；恒冷箱切片机，英国Thermo Fisher Scientific公司；Multiskan MK3酶联

仪（芬兰Thermo公司）；甲苯胺蓝（Tolurdine Blue O)，美国Amresco公司。

1.2 实验动物分组与处理 SPF级Wistar雄性大鼠30只，

北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：scxk(京) 2012-0001。大鼠适应性饲养一周后随机分为青鹏膏剂穴位贴敷组、电针组和空白对照组，每组10只。大鼠固定后，根据郭义主编的《实验针灸学》大鼠常用针灸穴位，选取大椎穴为中心、直径为1.5cm的区域，穴区局部剃毛，青鹏膏剂组大鼠每次于穴区局部均匀涂抹青鹏膏剂（约25mg[4]），2次/天，每次20min。电针组在大椎穴给予电针刺激，用毫针针刺，得气后针柄接电针治疗仪G6805-Ⅱ型，刺激参数为2/15Hz、1mA，2次/天，每次20min。对照组大鼠相同时间和方法固定，但不给予涂药和针刺刺激。3组大鼠均于第7天干预后2小时取材。

1.3 组织切片染色方法 以大鼠大椎穴为中心，穴区局部剃毛。3.5%水合氯醛（1ml/100g）腹腔注射麻醉大鼠，快速剪取大椎穴区皮肤组织块（包括皮肤、皮下组织和少量肌肉，约1cm×1cm×0.4cm），-80℃冰箱保存。组织块恒冷箱切片机切片，厚度15μm，乙酰胆碱酯酶染色后甲苯胺蓝复染[5]，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。光学显微镜下，每只大鼠选取4张切片，每张切片观察3个视野（×100），分别记录每个视野内的MC个数和脱颗粒的MC个数，并计算MC脱颗粒率。脱颗粒率=脱颗粒MC数/MC总

数×100%

1.4 统计分析 采用SPSS 19.0统计软件进行统计处理，组间比较采用单因素方差分析。若方差齐，两两比较采用LSD法；若方差不齐，两两比较采用Tamhane法。

2 结果

2.1 染色结果 各组穴区组织真皮、皮下组织和肌肉组织中都分布着大小、数量不等的MC。对照组大鼠穴区组织内MC细胞膜完整，细胞形状规则，多呈圆形、卵圆形，胞质内充满异染性颗粒，细胞周围少见散在蓝色颗粒，脱颗粒现象不明显。青鹏膏剂组和电针组大鼠穴区组织内MC数量增多、体积增大，且多沿神经或血管周围分布，MC细胞膜破裂，细胞轮廓不规则，细胞周围分布大量蓝紫色颗粒，脱颗粒现象明显（见附图）。

附图 染色结果

2.2 MC数、MC脱颗粒数和脱颗粒率 青鹏膏剂组和电针组大鼠穴区组织MC数量比较差异无统计意义（P＞0.05），但均明显高于空白对照组（P＜0.05）。三组大鼠穴区组织脱颗粒的MC数量和MC脱颗粒率由高到低依次为青鹏膏剂组、电针组、对照组，两两比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。见附表：

附表 各组大鼠穴区组织MC数、脱颗粒MC数和MC脱颗粒率（±s，n=10）

附表 各组大鼠穴区组织MC数、脱颗粒MC数和MC脱颗粒率（±s，n=10）

与青鹏膏剂组比较：aP＜0.05；与电针组比较：bP＜0.05

组别 MC数（个） MC脱颗粒数（个） 脱颗粒率（%）青鹏膏剂组 37.80±5.18 25.00±3.53 64.60±3.41电针组 37.13±2.53 21.00±1.85a 56.88±5.92a空白对照组 26.60±2.07ab 8.40±0.89ab 31.40±1.52ab

3 讨论

穴位贴敷疗法是以中医经络学说和中药学为理论依据，属于针灸疗法中的“天灸”类，又称敷灸法或药物灸法，是中医的治疗手段之一。穴位贴敷是通过药物对穴区皮肤直接或间接作用而达到治疗目的的一种给药方法，可以绕过肝脏的首过效应及胃肠道消化酶的破坏，并降低药物毒性和副作用，操作简单，疗效明确[6]。

研究表明[7-8]，MC聚集和脱颗粒反应是其参与机体生理病理反应的关键步骤。本研究发现，青鹏膏剂穴位贴敷组穴区皮肤组织MC数量明显增多，脱颗粒率显著高于电针组和对照组，说明针灸对穴区局部组织内MC的影响不如青鹏膏剂穴位贴敷，与以往研究报道一致[4]。本研究提示，青鹏膏剂穴位贴敷可激活穴区组织内的MC，使MC出现数量增多以及脱颗粒明显增多等变化，且MC多沿神经或血管聚集，说明MC数量和脱颗粒情况的变化是青鹏膏剂穴位贴敷显效的有关结果之一。有研究发现[9]，MC是针灸效应信号传导放大的关键因素之一，其形态结构和所释放的多种活性物质的变化，如组织胺、缓激肽、前列腺素、P物

质等，与人体的经络现象有关，但本研究尚未观察MC释放

的多种活性物质的含量变化，为深入探讨青鹏膏剂穴位贴

敷的药理作用机制，有待进一步的研究。

[1]钟世红，古锐，王文.奇正青鹏膏治疗骨关节疼痛方解及有效成分介绍[J].西南军医，2007，9(1)：88-90.

[2]赖少波，刘晋闽.损伤洗剂热敷配合青鹏膏治疗气滞血瘀型颈椎病临床观察[J].黑龙江中医药，2014（，4）：17-18.

[3]唐苏为,谢韶琼,宋勋,等.青鹏膏剂封包治疗慢性湿疹疗效观察[J].世界临床药物,2016,37(1)：38-41.

[4]罗明富，李翠红，张栋，等.青鹏软膏贴敷裸鼠穴区对皮肤内血管和肥大细胞的影响[J].中国中药杂志，2008，33(7)：816-818.

[5]罗明富，宋晓晶.报告一种同时显示肥大细胞、血管、神经等组织成分的新染色方法[J].中国组织化学与细胞化学杂志，2012，21(5)：499-500.

[6]刘西建，韩涛.中药穴位贴敷研究现状及思路[J].中医药信息，2014，31(5)：130-132.

[7]罗明富，何俊娜，郭莹，等.电针和悬灸对大椎穴区MCs脱颗粒不同影响的研究[J].针刺研究，2007，32(5)：327-329.

[8]张迪，丁光宏，沈雪勇，等.肥大细胞功能对针刺大鼠“足三里”镇痛效应的影响[J].针刺研究，2007，32(3)：147-152.

[9]潘萍，郭义.肥大细胞是针刺效应信号放大的关键因素之一[J].辽宁中医杂志，2009，36(12)：2066-2068.

EFFECTS OF QINGPENG UNGUENTUM ACUPOINT STICKER ON NUMBER AND DEGRANULATION RATE OF RATS’ MASTOCYTE

QU Jing-yang, LIU Ding-ding, AN Na, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To observe the effects of Qingpeng Unguentum Dazhui point sticker on number and degranulation rate of mastocyte in rats.Methods:30 male Wistar rats were randomly divided into blank control group, electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group with 10 rats in each group. The Dazhui point of rats in Qingpeng Unguentum group were stuck with 25mg Qingpeng Unguentum for 2 times a day; The Dazhui point of rats in electroacupuncture group were stimulated with electroacupuncture. Toluidine blue staining was used to observe the morphology, number and degranulation of mastocyte.Results:In Dazhui point area, the number and volume of mastocytes of rats in electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group increased; The cell membrane ruptured and mastocytes showed obviously degranulation; Moreover, the mastocytes distributed along nerves or blood vessels. The number of mastocytes in Dazhui point area of rats in electroacupuncture group and Qingpeng Unguentum group were obviously more than control group (P＜0.05). The quantity and ratio of degranulated mastocytes from high to low were Qingpeng Unguentum group, electroacupuncture group and control group, there had statistically signif i cant differences between every 2 groups (P＜0.05).Conclusions:Qingpeng Unguentum acupoint sticker can activate mastocyte, which show number increasing and degranulation.

Qingpeng Unguentum; Acupoint sticker; Dazhui point; Mastocytes; Degranulation

R285.5

A

1004-6879（2017）02-0093-03

2016-07-22）