中药复方作为免疫增强剂在疫苗中的应用及可行性分析

姬星宇，焦金英，乔云龙，胡玉胜，李自波，李国辉，郭平霞

（商丘美兰生物工程有限公司，河南 商丘 476000）

免疫佐剂是指当一种先于抗原或者与抗原混合或同时注射于动物体内，能非特异的改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答的物质。其作用特点是：能明显增强多糖或多肽等抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答；用最少量的抗原和最少的接种次数刺激机体产生足够的免疫应答和高滴度的抗体，在血液和黏膜表面能维持较长的时间，发挥持久效果［1］。

研究表明，许多单味中药、中药成分，乃至中药复方都具有免疫增强作用，事实上，临床上早已使用中药方剂来提高免疫，如补中益气汤、黄连解毒汤、四君子汤、四物汤、小柴胡汤、当归散、玉屏风散、七补散、仙方活命饮和加减消毒饮等。中药来源天然，安全可靠，与化合物免疫增强剂相比，具有毒副作用小、多效性、双向调节性和无依赖性的特点，而且不易在畜产品中产生有害残留，具有独特优势。

1 中药复方免疫增强剂的研究进展

1.1 清热解毒类

清热解毒类中药对畜禽感染性疾病的防治具有独特的优势，除能抑制大多数病原微生物生长繁殖外，还能增强动物的免疫功能。此类药物中具有免疫增强的方剂有小柴胡汤、黄连解毒汤、清营汤、白虎汤等。长谷川格［2］探讨了小柴胡汤对B细胞增殖与抗体产生系统有关的IL-4、诱导B细胞最终产生抗体的IL-6的影响，表明小柴胡汤能够促进抗体生成，同时，小柴胡汤可作用于B细胞，使多克隆抗体增加，表明小柴胡汤具有免疫激活作用。王学斌［3］以黄连、黄芩、板蓝根、黄芪、山茶叶、甘草等6种中药组方，与法氏囊病毒疫苗混合后作为佐剂使用，可明显促进抗体产生，提高脾脏和法氏囊指数以及E-玫瑰花环形成率。

1.2 补益类

此类药物大多能提高机体免疫功能，且大多具有多糖成分。常用的方剂有补中益气汤、四君子汤、玉屏风散等。复方四君子汤比单味人参煎液更能显著提高红细胞的免疫黏附能力及清除免疫复合物对抗抑制因子等作用。四君子汤有明显的抗突变作用。在新城疫Lasota系冻干苗免疫试验鸡时，用加味四君子汤（人参、白术、茯苓、炙甘草、黄芪、当归）煎剂，给鸡自由饮水，连用4d，结果表明，加味四君子汤能有效提高鸡的特异性免疫和非特异性免疫水平，在14、28和42日龄均可极显著提高鸡的淋巴细胞数和血液中新城疫的抗体水平［4］。刘倩娴［5］等研究发现补中益气汤20 g/kg、40 g/kg时对脾虚小鼠低下的IL-2、INF-γ活性有提高作用，进一步研究发现补中益气汤整方提高INF-γ活性的作用明显大于拆方。

1.3 活血化瘀类

常用方剂如四物汤、生化汤、当归补血汤、白术散等。四物汤煎剂对小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能具有明显促进作用，能刺激提高小鼠特异性抗体的产生，能促进T细胞的转化功能。给小鼠灌胃四物汤后，其脾脏、胸腺重量与对照组相比都明显增加，且随药物剂量的增高而增加。四物汤能提高小鼠酸性酯酶阳性细胞的百分率，显著促进自发性和ConA刺激的脾淋巴细胞增殖，提高抗体滴度和巨噬细胞吞噬鸡红细胞的百分率。当归补血汤能显著抑制小鼠肝癌Hca-F25/16A3淋巴结转移率和淋巴结转移程度，其作用机制是通过抑制脾细胞凋亡、增加淋巴细胞免疫活性来实现的［6］。

2 中药复方免疫增强剂在疫苗中的应用

单味中药可以增强免疫，但是，不同中药对机体免疫系统增强的侧重点不同，并非每味中药都可以全面提高机体的免疫功能；另外，对不同的疫苗，中药的免疫增强效果存在着差异，正是单味中药成分在免疫增强方面的局限性，使得多种中药成分组成的中药复方作为免疫增强剂引起人们的重视。孙峻岭［7］等分别用淫羊藿多糖加蜂胶黄酮、黄芪多糖加人参皂苷制成2个中药成分复方，同时用相应的淫羊藿、蜂胶、黄芪和人参的提取物制成相应成分含量相同的2个中药复方。试验1用2个中药成分复方分别配合兔瘟灭活苗免疫家兔，于免疫后用血凝抑制试验法测定血清抗体效价的动态变化；试验2将4个复方分别与灭活的新城疫强毒混合制成疫苗免疫雏鸡，以白油佐剂苗、无佐剂苗和生理盐水为对照，于免疫后用MTT法和血凝抑制试验法检测外周血淋巴细胞增殖和血清抗体效价的动态变化。结果表明，2个中药成分复方能显著提高家兔血清的兔瘟抗体效价，4个复方均能显著促进雏鸡淋巴细胞增殖和提高血清抗体效价，效果与白油佐剂苗相当。刘瑞生［8］等将黄芪多糖、淫羊藿多糖、左旋咪唑、维生素E及亚硒酸钠制备成缓控释复方免疫增强剂，在给鸡注射ND-IB二联弱毒疫苗时，配合使用缓控释复方免疫增强剂，结果表明，缓控释复方免疫增强剂可以显著提高ND和IB的抗体效价；极显著升高T淋巴细胞ERFC形成率。李星艳［9］等将由黄芪、茯苓、熟地、补骨脂、何首乌、淫羊藿、当归、党参、川芎、山楂、麦冬等中药组成的复方，制备复方总多糖，连续给鸡注射7 d后，接种禽流感-新城疫重组二联活疫苗，采用β-微量法测定AI抗体效价，结果显示，相较于单糖，复方多糖可以促进抗体更早产生，并且快速达到高峰；红细胞免疫功能检测结果显示，不同浓度的复方多糖均能不同程度的提高红细胞-C3b花环率和红细胞-IC花环率。颜新艳［10］等通过筛选的3个硫酸化多糖：硫酸化黄芪多糖sAPS、硫酸化淫羊藿多糖sEPS、硫酸化香菇多糖sLNT组 成 4 个 成 分 复 方 ，复 方 1（sEPS-sAPS）,复 方 2（sEPS-sAPS-sLNT），复 方 3（sAPS-sLNT），复 方 4（sEPS-sLNT）在给雏鸡接种新城疫疫苗时，分别注射复方多糖，结果表明，各复方均能明显或显著提高新城疫疫苗的免疫应答，提高血清HI抗体效价，促进淋巴细胞增殖，降低攻毒后的发病率和死亡率，提高免疫保护率。黄雪泉［11］等将四君子汤提取液和灭活鸡新城疫抗原混合成水相，制备成肉鸡新城疫灭活油乳剂疫苗注射肉鸡，研究引起的免疫反应。试验结果表明：四君子汤提取液具有免疫调节作用的小分子多肽，促进B细胞的分化增殖；提高机体免疫功能，可明显促进正常机体的抗体产生，提高肉鸡新城疫抗体效价（P＜0.05），其中以四君子汤提取液含量为14%时效果最佳；四君子汤提取液能显著提高血清超氧化物歧化酶（SOD）活性，增强其清除自由基的能力，使机体内自由基的产生和清除保持平衡。

3 中药复方作为疫苗免疫增强剂可行性分析

中药复方是在中医理论的指导下，以君、臣、佐、使的组方原则，通过方内诸药配伍调节药物之间的关系来调整组合药力。复方中药对动物疫苗具有协同作用，有研究表明中药增强剂复方在多个时间点的抗体效价显著高于无增强剂组，显示中药复方具有较好免疫增强作用。

3.1 中药复方免疫增强剂对免疫器官的影响

动物免疫器官是动物机体产生免疫反应的主要场所。免疫器官主要由中枢免疫器官：骨髓、胸腺、腔上囊及外周免疫器官：脾脏、淋巴组织等组成。骨髓是造血干细胞生长、分化及发育的场所，可提供各种免疫细胞的前体细胞，B细胞、单核巨噬细胞、粒细胞、NK细胞、血小板和红细胞也在此分化成熟。胸腺的免疫功能主要是诱导T细胞的分化和成熟，胸腺衍化的T细胞辅助B细胞产生抗体。腔上囊是鸟类特有的中枢免疫器官，来自骨髓的淋巴干细胞在其内诱导分化为成熟的B细胞，经淋巴和血液循环到外周淋巴器官参与体液免疫；脾脏是机体内最大的免疫器官，内含大量的免疫细胞，在体液免疫中的地位极其重要。因此中药对机体免疫器官的作用是研究中医药免疫调节作用的一个重要方面。张乐萃［12］等给鸡注射复方多糖（黄芪多糖和香菇多糖）增强剂油乳苗，能明显增加试验鸡免疫器官的重量。吕殿红［13］等由黄芪、灵芝、淫羊藿等按比例组成复方增强剂A，由黄芪、党参等按比例组成复方增强剂B，与鸡新城疫弱毒苗、法氏囊弱毒苗配合使用，结果表明，两个复方增强剂均在不同程度上提高了ND和IBD疫苗的免疫反应，促进免疫器官的发育，增强了T淋巴细胞的活性。

3.2 中药复方免疫增强剂对细胞免疫的影响

细胞免疫主要由T细胞介导。机体通过致敏阶段和反应阶段，T细胞分化成效性淋巴细胞并产生细胞因子。T细胞能抵抗细胞内寄生的细菌、病毒、真菌及原虫的感染；T细胞具有免疫监视作用，被肿瘤抗原致敏的T细胞通过直接杀伤和释放细胞因子等可直接或间接地杀伤肿瘤细胞。一定程度上中药提高机体免疫的途径之一就是促进T淋巴细胞分化。四物汤煎剂对小鼠单核巨噬细胞系统的吞噬功能具有明显促进作用，能刺激提高小鼠特异性抗体的产生，能促进T细胞的转化功能。给小鼠灌胃四物汤后，其脾脏、胸腺重量与对照组相比都明显增加，且随药物剂量的增高而增加。范云鹏［14］选择淫羊藿多糖、淫羊藿黄酮、淫羊藿提取物、蜂胶黄酮、蜂胶提取物等组成藿蜂酮复方免疫增强剂，并制备中药复方禽流感灭活苗及中药复方新城疫灭活苗，试验结果显示，藿蜂酮复方增强剂灭活苗能够显著促进淋巴细胞增殖，提高血清抗体效价，效果优于无增强剂组和有增强剂组。

3.3 中药复方免疫增强剂对体液免疫的影响

体液免疫是由B细胞介导的免疫应答，是由B细胞通过对抗原的识别、活化、增殖，最后分化成浆细胞并分泌抗体来实现的，抗体是介导体液免疫的重要分子，在体内可发挥多种免疫功能。许多研究表明中药免疫增强剂可以促进抗体的产生。以当归多糖、黄芪多糖、板蓝根多糖和淫羊藿多糖等组成的中药复方成分增强剂可以显著提高新城疫弱毒苗免疫雏鸡的抗体效价。四君子汤提取液和灭活鸡新城疫抗原混合成水相，制备成肉鸡新城疫灭活油乳剂疫苗注射实验肉鸡可明显促进正常机体的抗体产生，提高肉鸡新城疫抗体效价［11］。

4 结语

“防重于治”一直是我国养殖生产秉持的理念，怎样有效提高抗体水平，一直是人们普遍关注的一个问题，而免疫佐剂是提高疫苗免疫水平不可或缺的一个成分。此外，随着生活品质的提高，食品安全问题也得到人们的重视，逐渐形成了“高品质、低药残、无公害”的消费理念。传统的铝胶佐剂、白油佐剂、黏膜佐剂、微生物佐剂等佐剂，都会或多或少地产生一些毒副作用，因此，寻找安全可靠的新型免疫增强剂是解决疫苗免疫效果的一个必要之举。中药免疫增强剂经研究表明，确实具有一定的免疫促进效果，但是单一的中药免疫增强剂作用有限，而把许多单味中药合理配伍，可形成具有免疫增强效果的方剂。此外，一些经典方剂，如四君子汤、四物汤、小柴胡汤、玉屏风散等，都可以被开发成中药复方免疫增强剂，不仅是对新型免疫增强剂种类的一个补充，也是对我国宝贵的中草药资源、经典方剂的充分利用。

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