陈李好
【摘要】 目的:对酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法检测HBsAb的临床效果进行对比。方法:选择196份接种乙肝疫苗后血清标本作为研究对象,分别采取酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法检测HBsAb,并对两种方法的检测阳性率和HBsAb最低检出结果进行对比分析。结果:196份标本经酶联免疫吸附法检测,检出HBsAb阳性标本139份,阳性率为70.92%;经微粒子酶免疫分析法检测,检出HBsAb阳性标本157份,阳性率为80.10%。微粒子酶免疫分析法检测阳性率较酶联免疫吸附法高(P<0.05)。微粒子酶免疫分析法测定HBsAb浓度为14.1 IU/L时,酶联免疫吸附法检测结果呈现为阴性。结论:采取微粒子酶免疫分析法对HBsAb定量检测,不但可在儿童乙肝疫苗接种后展开HBsAb浓度变化动态观察,进而对免疫效果进行判断,且还能够以HBsAb浓度变化来对再次免疫接种时间予以确定,对比酶联免疫吸附法具有一定的优势。在今后的临床检验工作中,值得对其给予足够的重视,并展开推广,改善乙肝疫苗接种后免疫效果监测工作质量。
【关键词】 酶联免疫吸附法; 微粒子酶免疫分析法; HBsAb; 定量检测; 对比
doi:10.14033/j.cnki.cfmr.2016.33.024 文献标识码 B 文章编号 1674-6805(2016)33-0048-02
目前在国内,大部分医院的检验科会采取酶联免疫吸附法对血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)以及乙型肝炎表面抗体(HBsAb)展开检测。酶联免疫吸附法在检验工作中,具有操作简单等优势,但是值得注意的是,其灵敏度、重复性相对较差,很容易受到钩状效应、标本浓度等因素的影响,进而出现假阴性结果,造成漏诊或者是误诊[1]。近几年,随着科学技术的提高,微粒子酶免疫分析法问世,文献[2]报道,微粒子酶免疫分析法在HBsAb检测中,存在一定的优势。有研究表明儿童在接种乙肝疫苗后较成人更易产生乙型肝炎表面抗体[3],本次研究中,出于对酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法检测HBsAb的临床效果进行对比的目的,对196份接种乙肝疫苗后血清标本分别采取酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法检测HBsAb,并对比分析结果,现汇报如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究中资料来源于笔者所在医院收集到的接种乙肝疫苗后血清标本,共选择196份作为研究对象。标本来源于123例女性和73例男性。标本受试者均采取0、1、6个月3针的免疫程序接种乙肝疫苗。
1.2 方法
1.2.1 研究方法 将选择的196份接种乙肝疫苗后血清标本分别采取酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法两种不同的方法检测HBsAb,并对检测结果进行对比分析。
1.2.2 检测方法 本次研究的检测过程中所需要的仪器主要包括:Biocel l2010酶标仪、美国雅培I2000全自动免疫分析仪及其配套试剂、ELISA试剂盒(由厦门英科新创生物工程有限公司提供)及Biocel lA201洗板机。酶联免疫吸附法:采取双抗原夹心法,严格按照试剂盒说明书操作。微粒子酶免疫分析法:同样采取双抗原夹心法进行。被测抗体与包被在微粒子上的抗原进行充分的结合,然后将其与标记碱性磷酸酶的抗原进行充分的结合,ALP可对4-甲基伞形酮磷酸盐产生催化作用,使其分解成为具有一定荧光性的物质,荧光变化率水平与被测抗体的浓度水平呈现正比例关系,浓度测定结果超过10 IU/L时,视为检测结果阳性,浓度测定结果不足10 IU/L时,视为结果阴性[4]。
1.3 观察指标及评价标准
(1)观察酶联免疫吸附法与微粒子酶免疫分析法两种方法的检测阳性率;(2)酶联免疫吸附法与微粒子酶免疫分析法检测HBsAb最低检出结果。取1份HBsAb阳性标本,经酶联免疫吸附法及微粒子酶免疫分析法测定3次,求得其检测结果的平均值,倍比稀释血清分别采取酶联免疫吸附法及微粒子酶免疫分析法进行检测,重复检测3次之后取平均值即得。HBsAb检测结果阳性的判定标准包括:微粒子酶免疫分析法检测结果达到10 IU/L以上,酶联免疫吸附法检测的样本吸光度/CUTOFF值水平>1.0。
1.4 统计学处理
数据用SPSS 18.0软件处理,计数资料以率(%)表示,比较用字2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 酶联免疫吸附法与微粒子酶免疫分析法检测结果比较
196份标本经酶联免疫吸附法检测,检出HBsAb阳性标本139份,阳性率为70.92%;经微粒子酶免疫分析法檢测,检出HBsAb阳性标本157份,阳性率为80.10%。经酶联免疫吸附法检测出的阳性结果使用微粒子酶免疫分析法检测均为阳性,微粒子酶免疫分析法检测阳性率较酶联免疫吸附法高,差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 酶联免疫吸附法与微粒子酶免疫分析法检测HBsAb最低检出值比较
微粒子酶免疫分析法测定HBsAb浓度为14.1 IU/L及以下时,酶联免疫吸附法检测结果呈现为阴性,由此证实,微粒子酶免疫分析法对血清HBsAb定量检测的准确性更高,可以对乙肝疫苗接种后免疫效果进行反映,具体见表1。
3 讨论
目前临床上多采取酶联免疫吸附法对血清乙肝表面抗体进行检测,从而实现对乙肝疫苗免疫效果进行了解的目的。然而,实践与研究发现,这一操作比较繁琐,重复性相对较差,检测所需时间较长,无法对体内HBsAb展开定量检测。近期文献[5]报道发现,微粒子酶免疫分析法在HBsAb定量分析中,具有快速、特异性强、灵敏度高等诸多优势。
本次研究中,出于对酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法检测HBsAb的临床效果进行对比的目的,对196份接种乙肝疫苗后血清标本分别采取酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法检测HBsAb,并对两种方法的检测结果进行了对比分析,结果发现,196份标本经酶联免疫吸附法检测,检出HBsAb阳性标本139份,阳性率为70.92%;经微粒子酶免疫分析法检测,检出HBsAb阳性标本157份,阳性率为80.10%,且经酶联免疫吸附法检测出的阳性结果使用微粒子酶免疫分析法检测均为阳性,微粒子酶免疫分析法检测阳性率较酶联免疫吸附法高,差异有统计学意义(P<0.05)。另外,通过酶联免疫吸附法与微粒子酶免疫分析法检测HBsAb最低检出值分析,微粒子酶免疫分析法测定HBsAb浓度为14.1 IU/L时,酶联免疫吸附法检测结果呈现为阴性。由此证实,微粒子酶免疫分析法对血清HBsAb定量检测的准确性更高,可以对乙肝疫苗接种后免疫效果进行反映,在今后的临床检验工作中,应对其给予足够的重视。根据肖琴[6]的报道,采用酶联免疫吸附试验法和微粒子酶免疫分析法法测定乙型肝炎病毒血清标志物,各有其优点,但采用微粒子酶免疫分析法的灵敏度更具有一定的优势,更能为临床提供诊断依据。姜立民等[7]也报道了通过酶联免疫吸附法和微粒子酶免疫分析法对乙型肝炎病毒血清标志物测定,结果显示,微粒子酶免疫分析法比酶联免疫吸附法更加精确,这与本文的研究结果一致。
通过本次研究笔者体会到,酶联免疫吸附法为对血清HBsAb进行检测的主要方法的一种,且属于抗原抗体在固相表面进行充分反应,参与仅为孔底的接触部分,其余的抗原或抗体均需要实施扩散处理,与固相抗体或固相抗原进行充分的接触,属于逐渐平衡的过程,因此检测过程中所需的时间相对较长。除此外,酶联免疫吸附法的手工操作过程相对比较的复杂,检测的灵敏度水平却相对较低,不能够对检测额进行准确的测定,由于需要对处于结合态的抗原或抗体、游离状态下抗体或抗原实施准确的分离处理,因此大多数情况下需要进行反复加样、洗板等操作,很容易造成人为误差[8-10]。微粒子酶免疫分析法主要是利用荧光酶免技术,经全自动酶免分析仪对HBsAb水平进行准确的测定,从标本加样操作开始直到得出相应的结果,均由相关仪器在自动化状态下完成,从而有效避免了人为误差,实现了全自动、快速、准确,并且可定量分析,灵敏度以及特异性均显著提高,重复性得到改善[11]。
综上所述,采取微粒子酶免疫分析法对HBsAb定量检测,不但在儿童乙肝疫苗接种后展开HBsAb浓度变化动态观察,进而对免疫效果进行判断,且还能够以HBsAb浓度变化来对再次免疫接种时间予以确定,对比酶联免疫吸附法具有一定的优势。在今后的临床检验工作中,值得对其给予足够的重视并展开推广,改善乙肝疫苗接种后免疫效果监测工作质量。
参考文献
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