单纯男方因素行卵胞浆内单精子注射结局分析

骆荣++洪焱++胡慧

摘要：目的 分析单纯因男方因素行卵胞浆内单精子注射（ICSI）治疗结局。方法 回顾性分析了2010年～2013年单纯因男方因素致不孕在我中心行ICSI助孕的409个周期，按精子来源不同分为三组，A组重度少弱畸精子症精液精子227周期，B组无精子症附睾穿刺取精（PESA）145周期，C组无精子症睾丸活检取精（TESE）37周期，比较三组行ICSI后受精及临床结局。结果 三组不同来源精子行ICSI结局比较，M2期卵率无差异，B组受精率最高81.45%，但优胚率最低（52.36%），与A、C组（76.70%，57.90%；72.19%，61.48%）比较差异显著（P<0.01）；妊娠率及胚胎着床率均是C组最高（79.31%，60.71%），与A、B组（48.65%，31.08%；52.67%，38.29%）比较差异显著（P<0.01）；活胎分娩率C组（65.52%）最高，与A组（37.84%）比较差异显著（P<0.01）；流产率、早产率、男女比例三组均无差异。结论 附睾来源精子ICSI受精率較高，而睾丸来源精子也能获得较好的结局。

关键词：男方因素；卵胞浆内单精子注射（ICSI）；结局

在不孕症中，男性不育约占40%，如重度少、弱、畸精子症等。自1992年首次报道卵胞浆内单精子显微注射以来[1]，该技术已成为治疗男性不育的重要手段。现对我中心近年来单纯因男方因素行ICSI助孕治疗的受精情况及妊娠结局进行了总结分析。

1资料与方法

1.1一般资料 选取2010年～2013年单纯因男方因素于我中心行ICSI助孕治疗的新鲜周期共计409个周期。根据男方精液来源不同，分为三组：A组重度少、弱、畸精子症射出精子组227个周期（精子浓度<5×106/ml和、或a+b级<10%和、或正常形态精子<4%）；B组无精子症附睾穿刺取精（PESA）组145个周期；C组无精子症睾丸活检取精（TESE）组37个周期。双方染色体检查均无明显异常，女方无明显不孕因素。

1.2研究方法

1.2.1精子的获取及处理 A组患者取精前禁欲3～7 d，取卵当日以手淫方式留取精液标本于无菌取精杯内，液化后采用直接离心法去除上层精浆，留取底部沉淀加入4mlQuinn's1006精子洗涤液（SAGE，美国）重悬离心，留取沉淀备用；B组患者手术取精（PESA），患者取仰卧位，常规消毒铺巾后选择穿刺点，2%利多卡因局部麻醉，持含有2mlQuinn's1006培养液（SAGE，美国）的5 ml注射器进行经皮附睾穿刺，抽出淡黄色浑浊附睾液，倒置显微镜下观察，寻找到精子后直接离心法处理，备用；C组患者手术取精（TESE），体位、消毒、麻醉同PESA，采用钳夹法取出少量曲细精管，研磨后倒置显微镜下观察，找到精子后将含有精子的睾丸组织吹打混匀后直接离心，留取沉淀备用。

1.2.2按本中心常规控制性促排方案进行促排卵，阴道B超进行卵泡监测及取卵。将获取的卵冠丘复合物（OCCs）置于CO2培养箱中培养3～4 h后去除颗粒细胞，对M2期卵进行ICSI受精，完成后置于Quinn's卵裂液（SAGE，美国）中，于CO2培养箱中培养，观察。

1.2.3胚胎观察与移植 ICSI后16～18 h观察卵子受精情况，双原核（2PN）为正常受精。D2、D3观察胚胎发育情况，根据卵裂球大小、是否均匀，有无碎片及发育速度进行胚胎质量的评估。我中心将D3细胞数≥6，细胞碎片≤20%且较D2卵裂球数目有增加的胚胎定义为可移植胚胎，将D3细胞数为7、8、9的可移植胚胎定义为优质胚胎。D3选择优质胚胎在超声引导下进行移植，按卫生部规定移植1～3枚胚胎，剩余可移植胚胎采用玻璃化冷冻保存，移植后常规黄体支持。

1.2.4妊娠结局随访 移植2 w后检测血、尿中人绒毛膜促性腺激素（HCG），阳性者于2 w后行阴道B超检查，提示有孕囊为临床妊娠，并随访至妊娠结束。

1.3统计学处理 数据应用SPSS11.5统计软件，率的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1基本资料比较 A组229个周期，B组145个周期，C组37个周期，三组男方平均年龄、获卵数、移植胚胎数均无差异，C组女方平均年龄最小，但与A、B两组比较差异无显著性，见表1。

2.2 ICSI结局比较 三组M2期卵率无差异，B组受精率最高（81.45%）优胚率最低（52.36%），与A、C组（76.70%，57.90%；72.19%，61.48%）比较差异显著（P<0.01）；妊娠率及胚胎着床率均是C组最高（79.31%，60.71%），与A、B组（48.65%，31.08%；52.67%，38.29%）比较差异显著（P<0.01）；活胎分娩率C组（65.52%）最高，与A组（37.84%）比较差异显著（P<0.01）；流产率、早产率、男女婴比例比较三组均无统计学差异，见表2。

3讨论

卵胞浆内单精子注射（ICSI）是在显微镜下，通过显微操作选择单个精子直接注射到卵胞浆内使卵母细胞受精，该技术可避免因精子功能异常所致的受精失败，是辅助生殖领域的一项重要技术之一。用于ICSI操作的精子可通过射精和手术取精两种方式获取。

精子从产生到排出体外，在体内经历了睾丸和附睾内的一系列成熟过程。理论上，睾丸内的精子已经成为单倍体遗传配子，在一定程度上已经可以使卵子受精。既往关于不同来源的精子对于ICSI受精结局影响的文献报道多存有争议[2-3]，卵母细胞的体外受精率与精子的质量密切相关，不同来源的精子在成熟度、形态、质量及染色体异常等方面存在一定差异[4]，而通过ICSI可利用数量和质量达不到常规体外受精标准的精子使成熟卵母细胞受精。文献报道在ICSI中使用不同来源精子可获得相似的受精率[3]，郑爱燕等[5]报道，不同来源和质量的精子对ICSI的正常受精率存在影响，但不影响其优胚率、临床妊娠率和种植率。精子在附睾中的成熟包括细胞膜结构和功能的变化、顶体外膜抗原分布改变和获能状态的保持等，这些变化可能会增加精子的受精能力，但也存在造成精子DNA损伤的因素[6]。本研究结果显示附睾精子组能获得更高的受精率，与其它两组比较差异显著，这与谢多等[7]报道一致，尽管睾丸精子组受精率低于其它两组，但优胚率、妊娠率和种植率却最高，并获得较高的活胎分娩率。与附睾精子和射出精子相比，睾丸精子虽然成熟度较低，相关功能可能不够完善，但也仅表现为受精率偏低，并不影响ICSI治疗后的结局。有文献报道，睾丸精子与附睾精子相比DNA损伤程度更低[8]，应用附睾精子治疗失败的患者改用睾丸精子治疗可获得更高的临床妊娠率[9]。在无精子症不育夫妇中，女方年龄多偏小，而在辅助生孕过程中，女方年龄是影响妊娠结局的一个重要因素。

本研究还表明不同来源精子ICSI所致卵母细胞正常受精后卵裂率、流产率、早产率及男女婴比例亦无统计学差异。因此通过手术方式取精行ICSI也是治疗男性因素所致不孕症的一种有效方法，附睾，睾丸来源精子也可获得较好的临床结局。

参考文献：

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[2]董瑞娜，郭艺红，孙莹璞，等.3106个不同来源精子ICSI周期临床妊娠结局分析[J].生殖与避孕，2013，4（33）：233-238.

[3]罗开玲，邓志华，丘映，等.精液精子、附睾精子和睾丸精子卵胞浆内单精子注射助孕结局的比较[J].广西医科大学学报，2008，25（2）：275-277.

[4]O'connell M，Mcclure N，Lewis SE.Mitochondrial DNA deletions and nuclear DNA fragmentation in testicular and epididymal human sperm[J].Hum Reprod，2002，17（6）：1565-1570.

[5]鄭爱燕，顾斌，丁洁，等.精子来源和质量对卵胞浆内单精子注射治疗结局的影响[J].中国妇幼保健，2014，29：257-258.

[6]Dozortesv D，Neme R，Diamond MP，et al.Embryos generated using testicular spermatozoa have higher developmental potential than those obtained using epididymal spermatozoa in men with obstructive azoospermia[J].Fertil Steril，2006，86：606-611.

[7]谢多，邱卓琳，罗琛，等.ICSI中不同来源精子对卵母细胞受精、胚胎质量及发育潜能的影响[J].J South Med Univ，2014，34（6）：857-861.

[8]Moskovtsev SI，Jarvi K，Mullen JB，et al.Testicular spermatozoa have statistically significantly lower DNA damage compared with ejaculated spermatozoa in patients with unsuccessful oral antioxidant treatment[J].Fertil Steril，2010，93：114-116.

[9]徐志鹏，孙海翔，张宁媛，等.睾丸精子行ICSI改善严重畸形精子症患者治疗结局5例报告[J].中华男科学杂志，2009，15：218-222.

编辑/申磊