干细胞标志Nanog在食管鳞癌组织中表达及预后关系

麻成方++余征++李绍鹏++李志华++魏春勇++汪礼旭++洪琼川

摘要：目的 探讨食管鳞癌组织中干细胞标志Nanog表达及其与肿瘤病理特征和预后的关系。方法 采用免疫组化方法测定60例食管鳞癌组织和10例癌旁组织中干细胞标志Nanog的表达情况，比较它在组织中的表达差异，及其与食管癌相关临床病理特征和预后的关系。结果 在60例患者中，26例出现复发转移，Nanog在转移组中表达率分别为61.5%（16/26），在非转移组中分别为26.5%（9/34），差异有统计学意义，P值<0.05。食管鳞癌原发灶分化程度不同，Nanog表达存在差异，但是同T和N分期没有明显的相关性（P>0.05）。Nanog为阳性表达其转移率显著高于为阴性表达者。结论 食管鳞癌组织中Nanog 表达与患者术后复发转移有一定关系，该检测有助于预后的评价。

关键词：食管鳞癌；Nanog

Expression and Clinical Significances of Nanog in Esophagea Squamous Carcinoma

MA Cheng-fang1， YU Zheng2， LI Shao-peng1， LI Zhi-hua1， WEI Chun-yong1， WANG Li-xu1， HONG Qiong-chuan1

（1.Department of Cardiothoracic Surgery， Longgang District Central Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518116， Guangdong，China；

2. Department of Physical Examination， People Hospital of Shenzhen Longgang District，Shenzhen 518116， Guangdong，China）

Abstract：Objective To investigate the expression of Nanog in esophageal squamous carcinoma and their correlations with the pathologic parameter of cancer and prognosis.Methods The expression of Nanog in 60 surgical specimens of esophageal squamous carcinoma and 10 paracarcinoma tissues was detected by immunohistochemistry method. The correlations between the expression of Nanog and the clinical pathological characteristics were analyzed statistically.Results Relapse and metastasis of 26 cases was detected in all patients. In metastasis group， the positive expression rate of Nanog was 61.5 %（16/26））. And the positive expression rate of Nanog in non-metastasis group was 26.5%（9/34）.The difference was signigicant （ P < 0. 05）. Expression of Nanog signigicantly correlated with differentiation， but was not associated with T stage or N stage . Metastatic rate in positive expression was higher than in negative expression.Conclusion The expression of Nanog related with progression and prognosis of esophageal squamous carcinoma， they are both hopeful predictors for patients with esophageal squamous carcinoma.

Key words：Esophageal squamous carcinoma；Nanog

食管癌是我國高发肿瘤之一，食管鳞癌术后的复发转移是目前临床常见的现象，总体治疗效果不佳，如何有效的评估预测是目前国内外研究的一个热点。近年出现的干细胞理论证实与肿瘤的发生、侵润和转移密切相关，迄今已在多种恶性肿瘤中鉴定出具有干细胞性质的恶性肿瘤细胞。作为全能或多能性干细胞的标志，Nanog基因是维系干细胞自我更新的关键性基因。本研究采用免疫组化方法对食管鳞癌组织中干细胞标志Nanog表达情况进行分析，探讨其与食管鳞癌临床特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2011年1月～2012年12月在我院胸外科住院治疗并确诊的食管鳞癌患者60例，其中男性32例，女性28例。年龄38～71岁，中位年龄为49岁。根据食管鳞癌TNM分期（AJCC2009）标准，ⅡA期28例，ⅡB期11例，ⅢA期21例。26（43.3%）例患者确诊复发转移，其中9例为吻合口复发，10例为单个脏器转移，7例为多发脏器或淋巴结转移。所有患者术前未行放化疗，术前检查及术中探查均未发现明确远处转移。术后行辅助PF或TP方案化疗4～6个周期。随访时仍生存37例，已死亡23例。

1.2免疫组化

1.2.1 60例标本取自食管癌术后标本中的无坏死癌灶，并在其中随机抽取10例癌旁组织（距癌灶4 cm以上）作为对照，经4%多聚甲醛溶液固定，常规脱水石蜡包埋，连续切片，切片厚度4～6 μm。均经HE染色并由组织学证实为鳞状细胞癌。

1.2.2采用免疫组化方法检测食管鳞癌组织、癌旁组织中干细胞标志Nanog的表达情况，操作步骤严格按照免疫组化单克隆抗体试剂盒（Santa Cruz公司）说明进行检测，并由有经验的病理科医师单盲阅片。Nanog阳性表达为细胞核染色，阳性细胞数>10%为阳性表达。

1.3预后评价方法 患者每3～4个月复查血清CEA、X线（包括食管钡餐和胸片），彩超（颈部和腹部），每6～12个月复查胸腹部CT和消化内镜，如CT提示吻合口、肺、肝或局部淋巴结转移时，尽可能行局部穿刺活检证实，以CT提示时间为转移发生时间。采用转移发生时间进行预后评价。随访截止至2014 年12 月。

1.4统计学分析 应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，比较Nanog表达与临床参数之间的关系时采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Nanog表达与临床病理特征的关系 Nanog阳性表达主要表现为肿瘤细胞核染色，见图1，在转移组中阳性表达率为61.5 %（16/26），而非转移组为26.5%（9/34），差异有统计学意义（P<0.05）。且在原发灶分化程度不同的组织中，Nanog的阳性率表达也不同，低/未分化组呈高表达率，差异有统计学意义（P<0.05）；在不同T和N分期中Nanog表达虽然存在差异，但是无统计学意义（P>0.05）。

图1 Nanog在细胞核的阳性表达（光镜40×）

2.2 Nanog表达与术后复发转移关系 在60例食管鳞癌组织中，Nanog为阳性表达14例，其中发生复发转移11例；Nanog为阴性表达21例，其中复发转移5例。不同表达状态与复发转移的差异有统计学意义，P<0.05。Nanog阳性表达者转移发生率为78.6%（11/14），显著高于阴性表达者的23.8%（5/21）。

2.3 Nanog表达与食管鳞癌临床病例特征的关系，见表1。

3 讨论

食管癌是现阶段全球最常见的恶性肿瘤之一，近年来我国食管癌的发病率及死亡率逐年增高。在我国食管癌占全部恶性肿瘤死因的第4位[1]。目前食管癌的主流治疗措施是以手术为主联合放化疗的综合治疗，其治疗后的5年生存率只有约14%[1]，造成这种困境的原因是大部分的患者术后出现了复发转移，是临床亟待解决的重点问题。

现阶段肿瘤治疗和评价预后的标准主要是TNM分期，但由于个体的差异和腫瘤的异质性，已无法准确反映肿瘤的术后复发和预后状况。随着现代分子生物技术的发展，如能找寻出食管癌中有预后价值的生物标志物，将其与临床病理指标（组织学分级和肿瘤分期）结合，建立一种分子分期的新系统，将对指导个体化治疗和评价预后很有帮助[2]。因此，寻找能评价其预后的肿瘤标志物已成为目前食管癌临床和基础研究的主要热点。

近年来国内外提出的肿瘤干细胞理论为这个问题的解决提供了新途经。前期大量研究显示肿瘤组织内一部分具有干细胞特征的癌细胞，又称癌干细胞（cancer stem cells，CSCs），是诱发及维持肿瘤不断生长、转移、耐药的源头[3]。迄今为止已相继在乳腺癌[4]、胰腺癌[5]、肝癌[6]和胃癌[7]等多种恶性肿瘤中鉴定出干细胞性质的恶性肿瘤细胞。2003年国外学者将在胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）内新发现的重要基因Ecat4（ES cell associated transcripts 4）命名为 Nanog[8]，近年研究发现，它与CSCs关系密切，是维持干细胞自我更新和亚全能性的关键性基因，同时也是全能或多能性的干细胞标志物[9]。Nanog 在某些生殖细胞肿瘤如睾丸原位癌、精原细胞瘤和胚胎性癌细胞株NCCIT等[10]，以及体细胞肿瘤如乳腺癌、胃癌和前列腺癌等[11]的表达已有相继报道，它与这些肿瘤的生物学行为密切相关，高水平表达者进展快、易发生复发转移及预后差。在本研究中，60例食管鳞癌组织中有25例出现Nanog蛋白的阳性表达，这些阳性表达细胞在肿瘤组织中的分布形态多为点状聚集，罕有灶状或巢形聚集，说明即使Nanog阳性表达，也只是少部分细胞表达，这和某些学者提出的肿瘤干细胞在肿瘤组织中只占很少一部分的理论是符合的[12]。同时，Nanog阳性表达率高的患者术后复发转移发生率明显高于阴性表达者，也说明Nanog蛋白高表达的肿瘤侵袭性要高于低表达的肿瘤患者。

本研究通过对Nanog的分析发现，表达为阳性表达的患者其转移率明显高于均为阴性患者。该项指标的高表达提示肿瘤复发转移的风险较低表达者更高，属于预后不良因素。综上所述，检测食管癌术后患者Nanog的表达，可作为预测术后早期复发转移及预后判断有临床意义的指标，从而更好的指导个体化治疗，提高患者的生存质量。

参考文献：

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[12]余宏，張昌明，吴永寿.肿瘤干细胞及其耐药性的研究进展[J].癌症，2010，29（3）：279-283. 编辑/罗茗柯