复方银菊合剂对大鼠实验性口腔溃疡愈合及体外抑菌实验研究*

段 赟，夏小军，马 骏，李雪松，开金龙，姚金华

(1.甘肃省肿瘤医院，甘肃 兰州 730050； 2.甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730020；3.庆阳市中医医院，甘肃 庆阳 745000)

·实验研究·

复方银菊合剂对大鼠实验性口腔溃疡愈合及体外抑菌实验研究*

段 赟1，夏小军1，马 骏2，李雪松1，开金龙3，姚金华3

(1.甘肃省肿瘤医院，甘肃 兰州 730050； 2.甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730020；3.庆阳市中医医院，甘肃 庆阳 745000)

目的：复方银菊合剂药效学、毒理学实验研究。方法：观察复方银菊合剂对大鼠实验性口腔溃疡的影响；对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌的体外抑菌作用；多次给药对大鼠口腔黏膜刺激性实验。结果：复方银菊合剂12.5，4.2μL/g体质量2个剂量能明显促进大鼠实验性口腔溃疡愈合；复方银菊合剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌均有体外抑菌作用；复方银菊合剂12.5μL/g体质量连续给药7d，对大鼠口腔黏膜无刺激性反应。结论：复方银菊合剂对大鼠实验性口腔溃疡有明显治疗作用，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌均有体外抑菌作用，多次给药对大鼠口腔黏膜无刺激性反应。

复方银菊合剂/药效学; 复方银菊合剂/毒理学 ;口腔溃疡；实验动物；大鼠

复方银菊合剂是甘肃省庆阳市中医医院研制的防治白血病化疗后口腔溃疡的纯中药制剂(甘药制字号：Z04101016)，由金银花、野菊花、天花粉、生甘草4味中药材组成，具有清热解毒、滋阴降火、祛腐生肌之功效，经10余年的临床运用,疗效显著。现将复方银菊合剂药效学、毒理学实验研究报告如下。

1 材 料

1.1 动 物

Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，体质量180～220g，由兰州大学实验动物中心提供，生产许可证号为SCXK(甘)20090004，合格证号为0000262。

1.2 菌 株

金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、大肠埃希菌(ATCC25922)和白色念珠菌(ATCC10231)，均由兰州大学医学生物化学与分子生物学研究所提供。

1.3 药 品

复方银菊合剂，每瓶100mL,由庆阳市中医医院提供，批号081203；冰硼含片，白云山汤阴东泰药业有限责任公司产品，批号080601；盐酸环丙沙星片，山西津华晖星制药有限公司产品，批号080513；酮康唑片，西安杨森制药有限公司产品，批号081006。以上各药临用前以生理盐水配成所需质量分数溶液，调pH值为7.4，高压灭菌。

2 方法与结果

2.1 统计学方法

2.2 实验性口腔溃疡愈合实验

观察复方银菊合剂对口腔溃疡的治疗作用。实验按照参考文献[1,2]方法进行。

将40只大鼠随机分为模型对照组、冰硼含片组、复方银菊合剂大剂量组、复方银菊合剂小剂量组4组，每组10只。各组大鼠分别用乙醚麻醉，仰卧固定于鼠板。取一根直径为4mm的玻璃管；将一个小棉球置于其一端，使之与管口平齐；将玻璃管的棉球端浸在质量分数为900g/L的 苯酚溶液中，使药液浸透棉球；将其置于大鼠一侧颊黏膜上灼烧约60s。移去玻璃管即可见该区域有直径4～6mm的白色损害；次日肉眼可见大鼠口唇边潮湿，流口水，颊黏膜处红肿，即造模成功。复方银菊合剂大剂量组：给复方银菊合剂12.5μL/g体质量(相当于临床人日用量的15倍)，平均分5次滴入大鼠颊黏膜溃疡处，间隔2h。复方银菊合剂小剂量组：给复方银菊合剂4.2μL/g体质量(相当于临床人日用量的5倍)，平均分2次滴入大鼠颊黏膜溃疡处，间隔4h。冰硼含片组给冰硼含片粉末1.5mg/g(相当于临床人日用量的15倍)，平均分5次置于大鼠颊黏膜溃疡处，间隔2h。模型对照组不给药。每次用药后禁食、禁水30min，连续给药6d。

每日给药前观察大鼠口腔溃疡愈合情况，记录给药6d后口腔溃疡面直径的大小(以mm表示)及大鼠口腔溃疡愈合的时间和数量。愈合标准：溃疡直径<1mm为愈合，溃疡直径≥1mm为未愈合。

结果见表1、表2。与模型对照组对比，连续给药6d，复方银菊合剂大、小剂量组大鼠口腔溃疡面直径减小，口腔溃疡愈合大鼠数量增加，差别均有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结果表明：复方银菊合剂能明显促进大鼠实验性口腔溃疡的愈合。

组 别动物数/只溃疡面直径/mm模型对照组101.88±0.69冰硼含片组100.85±0.35**复方银菊合剂大剂量组100.72±0.22**复方银菊合剂小剂量组101.16±0.63*

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

表2 给药期间各组大鼠口腔溃疡愈合数量对比

注：与模型对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 体外抑菌试验

观察复方银菊合剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌的体外抑菌作用。采用平皿打孔灌药法，按照参考文献[3,4]方法进行。

取灭菌试管7支，编号后排列于试管架上，按照无菌操作法，第1管加入100 0 g/L复方银菊合剂3 mL，第2～4管各加无 菌生理盐水3 mL，然后吸1 000 g/L 复方银菊合剂3 mL加到第2管混匀后，吸出3 mL加到第3管混匀，第3管吸出3 mL加到第4管，混匀。第5管加2 mg/mL的诺氟沙星片水溶液，第6管加1 mg/mL的酮康唑片水溶液，第 7管加无菌生理盐水。取标号灭菌平皿加熔化后冷却到40 ℃的牛肉膏汤琼脂培养基(白色念珠菌用沙氏培养基)20 mL摇匀，待凝固后，用直径6 mm的无菌打孔器在培养基上均匀打孔(3～4孔/皿)，各孔分别加入以上配好的不同质量分数的药液和生理盐水(0.2 mL/孔)，再将培养好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌分别均匀接种各洞口四周，37 ℃孵育24 h，观察并测出抑菌圈直径。

结果见表3。复方银菊合剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌均有体外抑菌作用,且作用随剂量增加而增强。结果表明：复方银菊合剂对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌均有体外抑菌作用。

表3 复方银菊合剂对体外抑菌圈直径的影响 mm

2.4 大鼠口腔黏膜刺激性实验

观察复方银菊合剂多次给药对大鼠口腔黏膜的刺激性反应。实验按照参考文献[2,5,6]方法进行。将20只大鼠随机分为复方银菊合剂组和正常对照组2组，每组10只。复方银菊合剂组给复方银菊合剂12.5μL/g 体质量(相当于临床人日用量的15倍)，在4 h内平均分5次滴入大鼠两侧颊黏膜处。正常对照组不做任何处理。给药24 h后，观察记录给药部位充血和水肿情况，并进行评分；观察动物有无全身不良反应。每日给药并观察，共7 d；停药后继续观察7 d。黏膜充血、水肿评分标准见表4、表5。

结果见表6。给药后24 h、给药7 d期间及停药后7 d，复方银菊合剂组鼠口腔黏膜均未出现充血和水肿症状，刺激反应平均分值为0，未见全身不良反应，与正常对照组对比，无异常。结果表明：复方银菊合剂12.5 μL/g体质量连续给药7 d，对大鼠口腔黏膜无刺激性反应。

表4 黏膜刺激性反应及评分标准

表5 黏膜刺激强度评价标准

表6 各组多次给药后口腔黏膜刺激反应平均分值

n=10

3 讨 论

复方银菊合剂是在课题组反复临床实践的基础上，对白血病化疗后口腔溃疡病因病机进行深入探讨与研究，针对病程中虚火与毒火两大关键病理因素，以清热解毒、滋阴降火、祛腐生肌为治疗原则研制而成。先期的临床研究[7]表明：复方银菊合剂含漱对白血病化疗后口腔溃疡有很好的防治作用。本研究结果显示：复方银菊合剂对大鼠实验性口腔溃疡有明显治疗作用，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌均有体外抑菌作用，多次给药对大鼠口腔黏膜无刺激性反应。此证实了复方银菊合剂含漱对白血病化疗后口腔溃疡的有效性与安全性，也为进一步扩大临床应用范围提供了药理学依据。

[1]朱萱萱,徐轩,施荣山.愈溃宁治疗大鼠口腔溃疡的实验研究[J].中药药理与临床,2001，17(5):35-36.

[2]郑利光,翟所迪.甘草锌膜对实验性口腔溃疡的治疗作用及粘膜刺激性研究[J].中国新药杂志，2006，15(8)：601-603.

[3]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，1994：1340,1387.

[4]陈奇.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，2006：755-756.

[5]国家食品药品监督管理局.中药、天然药物刺激性和溶血性研究的技术指导原则[M].北京：中国医药科技出版社.

[6]中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南[S]：209-215.

[7]段赟，李雪松，夏小军，等.复方银菊合剂含漱防治白血病化疗后口腔溃疡58例[J].中医研究，2013，26(3):23.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2017)01-0070-03

R

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2017.01.32

段赟(1978—)，男(汉族)，甘肃宁县人，副主任医师，主要从事中西医结合血液病临床研究工作。

马骏，教授，硕士研究生导师，binbinduan@126.com

庆阳市科技局2008年科技计划项目(0802NKCM058)

2016-05-05；

2016-11-08