高效液相色谱在食品检测中的应用

□ 卫润鑫 徐子婷 河南省产品质量监督检验院

高效液相色谱在食品检测中的应用

□ 卫润鑫 徐子婷 河南省产品质量监督检验院

本文分析了高效液相色谱法特点，性质及原理，利用高效液相色谱法进行试验，对样品维生素在皂化过程会发生分离，检测奶粉中维生素D的含量，最终得出奶粉中维生素D的含量为398.0μg/100g。

高效液相色谱法；维生素D；食品检测

高效液相色谱法在食品检测中已经应用很长时间，高效液相色谱法的缺点也很明显，设备成本较高，检测样本需要数量大，标本前处理过程复杂，对操作人员要求高，目前临床使用较少。而且，HPLC虽然能够分开25-（OH）D2和25-（OH）D3，但25-（OH）D2浓度太低，HPLC检测限达不到要求[1]。由于维生素D不稳定、测定方法复杂、变异大和受影响因素多等特点，目前维生素测定方法主要采用高效液相色谱法，可以测定蛋白质、多肽、碳水化合物、核酸、寡核苷酸等物质，有分辨率高、高效率分离的特点[2]。

1 高效液相色谱法特点

1.1 高压

液相色谱法以载液形式传输，液体在传输的过程中会到达色谱柱，在色谱柱内阻力较大，因此要迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。需要的压强一般为（150～350）×105Pa[3]。

1.2 高速

流动相流速在柱内速度可达1～10 mL/min。高效液相色谱法耗时短，一般少于1 h[4]。

1.3 高效

高效液相色谱法在食品检测的应用效率比其他方法更高效稳定，这主要得益于高压，高速的环境下，流动相的高效亲和力更有利于色谱分析。

2 性质及原理

高效液相色谱法，根据固定相可以分为凝胶渗透色谱可以分为高效疏水色L高分辨率反相高效液相色谱法和离子交换色谱和高效高亲和力的高效液相色谱类型。用不同类型高效液化合物分离原理基本上与普通液体色谱分析相似。高效液相色谱法的特点是高分辨率、快速、灵敏和重复性好[5-6]。

IEC本质上是离子交换的产物，交换过程可表示为：[X-(溶剂中]+[树脂-R4N+Cl-]= [树脂-R4N+X-]+Cl-[溶剂中]。

当交换过程达到平衡时：KX=[-R4N+X-][Cl-]/[-R4N+Cl-][X-]。

分配系数为：DX=[-R4N+X-]/ [X-]=KX[-R4N+Cl-]/[Cl-]。

只要能在溶剂中电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来做色谱分离。

3 实验

3.1 原理

选取维生素在皂化过程中与脂肪分离，以石油醚萃取后，用正相色谱柱提取富集，用反相色谱柱，紫外检测器定量测定。

3.2 适用范围

本方法来源于GB/T 5413.9－1997一般食品和乳粉维生素A、维生素D、维生素E的测定。适用于大部分食品或强化食品及饲料中的维生素D含量的测定。

3.3 主要仪器

高压液相色谱仪（具有可变波长的紫外检测器，数据处理系统或记录仪）；旋转蒸发器；平底烧瓶（250 mL）；分液漏斗（500 mL）。

3.4 试剂

所有试剂，如未注明规格，均指分析纯，所有实验用水均指蒸馏水。异丙醇（色谱纯）；2%焦性没食子酸乙醇溶液（取2 g焦性没食子酸溶于100 mL无水乙醇中）；75%氢氧化钾溶液（取75 g氢氧化钾溶于100 mL水中）；石油醚（沸程30～60 ℃）；甲醇（色谱纯）；正己烷（色谱纯）；环己烷（色谱纯；）维生素D标准溶液。

3.5 计算

X=[(As/Asd)×ρs×ρ]sd/m

式中：X——样品中维生素D，mg/100g；

m——称样量，含量，IU/100g；

ρs——进样液中维生素D的浓度，μg/mL；

As——进样液中维生素D的峰面积，μg；

Asd——标样中维生素D的峰面积，μg；

ρsd——标样中维生素D的浓度，μg/mL。

3.6 实验结果

称取婴儿奶粉10.8 g，经过实验的提取取后，测得维生素D峰面积为18 692μg，标样峰面积为24 767μg，带入公式计算，得出奶粉中维生素D的含量398.0 IU/100g。

4 结论

随着现在食品行业的快速发展，人们对食品安全越来越重视，高效液相色谱分析技术也日渐完善，高效液相色谱分析法将会在未来应用越来越广泛。

[1]孙长颢.营养与食品卫生学(供预防医学类专业用)[M].6版.北京:人民卫生出版社,2012.

[2]高海燕,王善广.利用反相高效液相色谱法测定梨汁中有机酸的种类和含量[J].食品与发酵工业,2004,30(8):96-100.

[3]钟慈平.固相萃取—超高效液相色谱检测食品中直接红染料方法的研究[D].重庆：西南大学,2014.

[4]黄国宏.高效液相色谱技术在食品分析中的应用[J].食品工程,2006(4):47-51.

[5]李红艳,王瑾,邵亮亮,等.固相萃取-高效液相色谱法测定功能性饮料中微量维生素B(12)[J].浙江农业科学,2012,1(3):384-386.

[6]李菁菁,叶润,崔亚娟,等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定配方奶粉中泛酸、生物素和氰钴胺素[J].食品工业科技,2015,36(12):61-64.

卫润鑫（1988—），男，河南郑州人，本科，工程师。研究方向：食品分析。