超声协同电场提取黄花菜多糖的动力学研究*

陆海勤 李毅花 李冬梅 杨日福 杭方学 张丽超 范晓丹

(1.广西大学 轻工与食品工程学院， 广西 南宁 530004； 2.华南理工大学 物理与光电学院， 广东 广州 510640;3.华南理工大学 食品科学与工程学院， 广东 广州 510640)

超声波在液体介质中传播时所特有的空化效应，以及超声波传播产生的机械振动、微射流、微声流等多极效应，能够破坏植物细胞的细胞壁，使有效物质易从原料中溶出[1- 3]；与传统方法相比，具有提取率高、提取时间短、节能环保、不易破坏多糖活性等优点.但国内现有的超声提取装置，功率强度受超声探头的数量制约，难以达到理想的提取效果.

将电场引入超声协同提取，是超声辅助提取多糖的一个新兴应用领域.水分子是一种强极性分子，它的正负电中心不重合，存在分子电偶极矩，通过加入电场可以影响水分子的结构，使水分子的排列更为有序，从而改变水溶剂的性质.目前国内外关于超声-电场协同处理取得了一定的进展：超声波协同电催化可以提高有机物的降解效率，杨日福等[4]关于静电场协同超声提取甘草中甘草酸的研究结果表明，超声与静电场存在协同作用，超声-静电场耦合具有提取均匀性好、提取时间短[5]的优点.谢阁等[6]将高压脉冲电场与超声波技术相结合，提取啤酒酵母细胞中蛋白质和核酸，结果表明，蛋白质和核酸提取率是高压脉冲电场单独作用的1.5倍左右，是超声波单独作用的2倍左右.

目前国内关于超声-电场耦合技术还处于探索阶段，尚未进行深入、全面的研究，国内外关于超声提取的强化机理，尽管有一些学者进行了探讨，但有关电场与超声协同作用机理的研究较少，基本上是立足于超声的空化作用进行一些定性的解释.因此，对超声-电场耦合提取的机理进行深入地研究是非常有必要的.

文中研究了有效扩散系数与超声功率和电场电压之间的关系，以及描述超声协同矩形高压脉冲电场提取过程中有效扩散系数与超声功率和电场电压之间的关系，以期能够构建超声协同电场提取多糖的动力学模型，并初步探究电场与超声协同作用机理，为黄花菜多糖提取工艺的设计提供一定的理论基础.

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

黄花菜，产地广州，购于梅州银新现代农业有限公司；石油醚、无水乙醇、苯酚、氢氧化钠以及无水碳酸钠、无水硫酸铜、硫酸钾、硼酸、甲基红、亚甲基蓝、溴甲酚绿均购于广东光华科技股份有限公司；浓硫酸和浓盐酸购于广州化学试剂厂；葡萄糖购于上海伯奥生物科技有限公司，均为分析纯试剂.

1.2 实验仪器与设备

DFY- 500型粉碎机，浙江省温岭市林大机械有限公司生产；BS200S型电子天平，德国Sartorous公司生产；DHG- 9146A电热恒温鼓风干燥箱，上海精宏实验设备有限公司生产；SX2- 4- 13型马弗炉，上海跃进医疗器械有限公司生产；KDN- 08型自动消化炉，上海新嘉电子有限公司生产；KDF-C型自动凯式定氮仪，上海纤检仪器公司生产；Avanti J-E型高速冷冻离心机，美国Backman Coulter有限公司生产；UV- 5200型可见光分光光度计，上海元析仪器有限公司生产；SB- 5DTD型超声波提取器，宁波新芝生物科技有限公司生产；DE- 100型高精度双极高压静电场发生器，宁波新芝生物科技有限公司生产；SH2-CD型循环水式真空泵，巩义市予华牌循环水真空泵公司生产；DKB- 10型数显智能低温恒温循环器，宁波新芝生物科技有限公司生产.

1.3 超声协同矩形高压脉冲电场辅助提取黄花菜多糖的方法

1.3.1 实验装置

在超声与静电场辅助提取初步实验的基础上对实验装置进行组装，在提取容器内设置中央电极，高压静电场发生器的正电极输出端和负电极输出端通过时间控制器与中央电极接线端相连，静电场发生器的接地端与提取容器侧壁连接，通过时间控制器控制电压方波的变化规律，从而控制电场方向的变化.

超声协同矩形高压脉冲电场提取实验装置如图1所示.实验过程中，保持超声水浴槽中的温度恒定，将装有物料的锥形瓶固定在超声水浴槽的正中心，用橡胶塞密封，带绝缘玻璃的电极底部与料液接触.其中超声发生器的频率为20 kHz，不可调，额定输出电功率为450～1 050 W，作用方式为无间歇连续作用；高精度双极高压静电场发生器的额定输出电压可在0～50 kV间连续变化；矩形脉冲电场的脉冲频率通过时间控制器调节，电压的变化频率如图2所示，时间t可自由调节，正负电压调换有5 s间隔时间；恒温循环器的温度变化范围为-5～100 ℃.提取过程中，超声发生器和电场发生器同时开同时关.

图1 超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖装置

Fig.1 Schematic diagram of ultrasound combined with high pulsed electric field assisted-extraction device

图2 矩形脉冲电场电压变化示意图

Fig.2 Diagram of the change of the electrical field voltage with time

1.3.2 黄花菜多糖的提取方法

称取预处理后的黄花菜粉末5.00 g，按照料/液质量(g)体积(mL)比为1∶25加入125 mL蒸馏水，用橡胶塞密封，固定于超声水浴槽的中央(事先将超声水浴槽中的水温恒定在59 ℃)，同时打开超声和静电场发生器.分别提取5，10,15,20,25,30 min后，在4 000 r/min下离心15 min，收集上清液，用400目的纱布过滤，得到黄花菜多糖的粗提液.精确移取5 mL粗提液，加入4倍体积的无水乙醇进行醇沉，置于4 ℃冰箱中静置24 h后离心(4 000 r/min，4 ℃)，弃去上清液，将沉淀物用蒸馏水复溶，置于250 mL容量瓶中定容，得黄花菜粗多糖溶液.

为了研究超声功率对有效扩散系数的影响，上述实验分别在超声功率为500、600、700 W条件下进行，其他的实验条件为电压14 kV，脉冲频率1/600 s-1.

为研究电场电压对有效扩散系数的影响，分别在电场电压为5、10、15 kV条件下重复上述实验，其他实验条件为超声功率700 W、脉冲频率1/600 s-1.

1.3.3 多糖含量的测定

用硫酸-苯酚法测定其多糖含量[7].每组实验重复3次，取3次实验的平均值作为最终结果.

多糖质量=(硫酸的量-苯酚法测得沉淀中多糖的质量×提取液的总体积)/5×0.9；

其中，0.9 为葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数.

1.4 超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖动力学模型的建立

超声协同矩形高压脉冲电场提取过程与传统的固-液提取过程类似，可以看作是一种特殊的固-液提取.整个提取过程一般可以分为两个阶段：第1阶段是固体颗粒外及破损细胞中的目标组分在溶剂中的溶出过程，此过程速度较快，不受细胞壁、细胞膜阻力的干扰，是提取过程中的快速阶段；第2阶段是溶剂从物料颗粒的外部渗透进入完整细胞颗粒的内部，使目标成分溶解在溶剂中并随溶剂从颗粒内部迁移到颗粒表面，最后溶解在溶剂相中.由于溶剂需要穿过细胞的细胞壁和细胞膜，因此扩散过程的阻力较大，速度较慢.在提取过程中，两个阶段同时进行，但是由于第2阶段的速度较慢，因此是整个提取过程的控速步骤.

为了简化提取过程动力学模型的复杂程度，需要基于几个假设：黄花菜粉末全部为直径0.300 mm均匀大小的球形颗粒；黄花菜颗粒均匀地分布在溶剂中，忽略颗粒表面的的传质阻力；多糖均匀地分布在原料颗粒中，且多糖沿径向进行扩散；在提取过程中任意时间取样，黄花菜多糖的扩散系数保持恒定不变；在提取过程中没有化学反应及超声降解发生；

基于上述假设，以Fick第二扩散定律作为理论基础，建立超声协同矩形高压脉冲电场提取的动力学模型.假设黄花菜颗粒的半径为R1,mm，颗粒外溶剂的体积为V1,cm3，在提取过程中，提取时间为t1,min时，颗粒内距核心r处多糖浓度为ρc1,g/mL，溶剂相中多糖的质量浓度为ρC1,g/mL，提取过程中的有效扩散系数为De，则根据Fick第二扩散定律可得：

(1)

令f=ρcr，则

(2)

边界条件为：

其中,S为黄花菜颗粒与溶剂的有效接触面积.

当提取时间t=0时，提取液中多糖的平均质量浓度为ρC0.

当提取时间t∝∞时，即达到提取平衡时，提取液中多糖的平均质量浓度为ρC∞.

利用傅里叶变换法对方程(2)求解得[8]：

(3)

由于此浓度分布式为无穷级数，且高次项趋于零，可忽略不计，因此，只取n=1的项，结果为

(4)

对式(4)两边求对数得：

(5)

(6)

超声协同矩形高压脉冲电场提取法与传统的浸提法相比主要的不同之处在于，水浸提过程中物料的有效扩散主要是由分子热运动产生的分子扩散，而超声协同矩形高压脉冲电场提取过程中，由超声产生的机械效应和超声空化产生的微射流、冲击波会引起溶液的湍动[8- 9]、使固体颗粒高速碰撞，显著加强溶液的涡流扩散，超声产生的热效应对分子扩散也起到了强化作用；同时电场的加入也加强了溶液中离子的定向运动，进一步增强了分子扩散.由于提取过程中提取液的温度保持恒定，因此忽略超声热效应产生的分子扩散，则超声协同矩形高压脉冲电场提取的有效扩散系数可以表示为

De=DU+DE+DM

(7)

式中：DM是由分子热运动产生的分子扩散系数；DU是由超声作用产生的涡流扩散系数；其与温度、超声功率和超声频率的大小有关[10- 11]；在实验过程中由于超声频率和体系的温度都保持不变，因此不考虑超声频率和温度对涡流扩散系数的影响.DE指由电场产生的强制分子扩散系数，主要与电压大小和电场脉冲频率有关；实验过程中脉冲频率不变，因此，只考虑电压大小对强制分子扩散系数的影响.

在超声和电场的协同作用下，整个提取体系流体的主要运动形式为湍流，湍流漩涡的强烈混合作用引起的物质传递远比分子运动的作用大得多，因此，在本研究中忽略分子热运动产生的分子扩散系数.综上所述，影响分子扩散系数的主要因素有超声功率、电场电压和提取温度.在提取过程中超声功率、电场电压对提取率的影响最大，因此为了研究有效扩散系数与超声功率和电场电压之间的关系，本研究对Gogate[12]和GrI[13]等建立的经验公式作适当的调整，用以描述超声协同矩形高压脉冲电场提取过程有效扩散系数与超声功率和电场电压之间的关系，其公式为

De=a0Pa1Ua2

(8)

式中，a0、a1、a2分别为温度、功率、电压及其相互作用对有效扩散系数影响的回归系数.

1.5 不同工艺条件下提取过程的对比

1.5.1 热水浸提法提取黄花菜多糖

准确称取5.00 g黄花菜颗粒置于500 mL平底烧瓶中，以料液比为1∶25加入蒸馏水，加冷凝管，在59 ℃水浴中回流提取，分别提取10、20、30、40、50、60、90、120、150、180 min后，按照1.3.2中描述的方法对提取液进行处理并测定不同提取时间下黄花菜多糖的提取率.

1.5.2 单独超声辅助水提法提取黄花菜多糖

准确称取5.00 g 黄花菜颗粒置于500 mL锥形瓶中，以料液比为1∶25加入蒸馏水，用橡胶塞封口，在温度为59 ℃，超声功率为700 W条件下，分别提取10、15、20、25、30、35、40、45 min，按照1.3.2中描述的方法对提取液进行处理并测定不同提取时间下黄花菜多糖的提取率.

1.5.3 超声协同矩形高压脉冲电场辅助提取黄花菜多糖

超声协同矩形高压脉冲电场辅助提取黄花菜多糖的提取及测定按1.3.2中描述的方法进行.

2 结果与讨论

2.1 动力学参数的求解

不同超声功率和电场电压提取条件下黄花菜多糖提取率随时间的变化见图3(a)和图3(b).图中曲线的形状与传统热水浸提法提取率随时间的变化曲线相似[14]，这说明超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖的提取过程与传统水提法类似，因此可以视为一种特殊的水提法.当提取时间从5 min增至20 min时，提取率的变化较快，曲线较陡峭，但提取20 min后，曲线的变化开始减缓.这是因为在提取的前期，颗粒表面或者破损细胞中的多糖先被溶剂快速溶解，使提取液中多糖的浓度迅速增加，因此，曲线上升速度较快，较为陡峭；而随着提取的进行，能够被快速溶解的多糖含量减少，溶剂需要进入完整的细胞中将多糖溶出，这个过程需要克服细胞壁和细胞膜的传质阻力，因此较为缓慢.

图3 黄花菜多糖提取率随时间的变化Fig.3 Evolution of extraction yield of polysaccharides with time

由图3(a)中的变化趋势可知，超声功率越大，达到提取平衡的时间越短，提取平衡时的提取率也越大.当超声功率为700 W时，达到平衡时的提取率为10.03%，且提取25 min后，黄花菜多糖的提取率变化极为微小，已趋于平衡；当超声功率为500 W时，提取30 min时达到平衡，提取率为8.91%，但是在20 min和30 min之间，黄花菜多糖的提取率的变化趋势依然较陡；这是因为在超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖的提取过程中，多糖的主要扩散方式为超声场产生的涡流扩散，而涡流扩散系数主要与超声功率、超声频率、换能器的作用面积有关[15]，由于提取过程中超声频率、换能器的作用面积一定，因此，涡流扩散系数主要受超声功率的影响.因此超声功率越大，在体系中产生的振幅也越大，产生的涡流扩散也就越显著，从而加快了提取时多糖的溶出速率和扩散速度，缩短了达到平衡时的提取时间.

由图3(b)中提取率的变化趋势可知，当电场电压从 5 kV增加至15 kV，达到提取平衡时，黄花菜多糖的提取率也随之增加；电场电压为15 kV时，提取20 min后，提取率的变化已不是很明显；电压为10 kV时，提取25 min后，提取率开始趋于平衡；而电压为5 kV时，在提取25 min后，提取率的上升仍较为明显.这是因为在高压脉冲电场的作用下，原料和溶剂中的极性分子由于电场力的牵引，运动方向会随着电场方向的改变而改变，从而增强了溶剂分子的扩散速度和原料中有效成分的溶出速度[16]；同时高压电场还可以改变原料颗粒细胞膜上的电位，增加细胞膜的通透性和可通过性，高压电场产生的电穿孔，可以增加细胞膜上的大分子通过的流通通道，从而降低了溶剂进入细胞内部和大分子多糖溶出细胞的阻力，加快了提取速率[17- 18].在一定范围内电压越大，体系中产生的电场强度就越高，因此，电场的作用也越明显，提取效率也越高.

根据图3(a)和图3(b)中的数据结果对ln[y∞/(y∞-y)]和提取时间t作图，结果为图4(a)和图4(b)，对应的线性拟合方程和动力学参数见表1和表2.表中的相关系数r2均大于0.98，说明在设定的提取条件下，ln[y∞/(y∞-y)]与t的线性关系良好，这表明建立的动力学方程式能够较为准确地与实验数据相匹配.表1和表2中的数据直观地表现了在不同超声功率和不同电场电压条件下提取速率常数和平衡提取率的变化，由表可知，在500～700 W超声功率范围内，随着超声功率的增大，提取速率常数也随之增大，平衡时提取率也随之增大；这与上文所说的超声能够加快提取体系中的物质扩散速率相一致.在5～15 kV电场电压范围内，随着电压的升高，提取速率常数和平衡时的提取率都随之增大，这说明在一定范围内，电场电压的增高可以提高物质的扩散速率，加快提取速率.

图4 ln[y∞/(y∞-y)]与t的关系Fig.4 Relationship between ln[y∞/(y∞-y)]and t

Table 1 Linear fitting equation and kinetic parameters at diffe-rent ultrasonic power

超声功率/W动力学拟合方程r2ρC∞k/10-3s-1500ln[ρCeq/(ρCeq-ρC)]=-0.2207+0.1273t0.98118.912.121600ln[ρCeq/(ρCeq-ρC)]=-0.0880+0.1703t0.99619.562.838700ln[ρCeq/(ρCeq-ρC)]=0.0742+0.1817t0.994310.033.093

表2 不同电场电压条件下的线性拟合结果

Table 2 Linear fitting equation and kinetic parameters at diffe-rent electric voltage

电场电压/kV动力学拟合方程r2ρC∞k/10-3s-15ln[ρCeq/(ρCeq-ρC)]=0.2280+0.0921t0.99128.741.53510ln[ρCeq/(ρCeq-ρC)]=0.0702+0.1274t0.99759.462.12315ln[ρCeq/(ρCeq-ρC)]=-0.1741+0.1786t0.99289.872.977

2.2 有效扩散系数的求解

De=2.34×10-15P1.135U0.588

(9)

将表3中不同组合的超声功率和电场电压代入式(9)，得到用公式计算得到的有效扩散系数的预测值.将实验值和预测值进行对比，结果见图5.

表3 不同超声功率和电场电压条件下的有效扩散系数

Table 3 Effective diffusion coefficient derived from different ultrasonic powers and electrical voltages

P/WU/kVk/10-3s-1De/(10-12m2·s-1)500142.12113.4495600142.83817.9901700143.09319.606570051.5359.73036700102.12313.4577700152.97718.8712

图5 有效扩散系数实验值和预测值的对比

Fig.5 Comparison of predicted values and experimental-determined values of the effective diffusion coefficients

由图5可知，由该经验公式计算得到的预测值和实验值之间存在一定的差异，这是由于一方面在整个计算过程中速率常数是通过线性拟合得到的，本身具有一定的差异性，因此通过k计算得到的De也具有一定的差异性；另一方面，在超声作用和热效应下，颗粒的直径会膨胀、破裂，产生一系列的变化，因此颗粒的直径会发生改变，这就造成了计算结果的差异.但是从图中可以看出，实验值与预测值之间的相关性较为明显(r2=0.928 6)，因此可以用来预测超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖过程中超声功率和电场电压对有效扩散系数的影响.

2.3 对比不同工艺条件下的提取过程

对比回流提取法(RE)、超声辅助提取法(UAE)和超声协同矩形高压脉冲电场辅助提取(UEAE)过程中提取率随时间的变化(见图6)可知.超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖可以大大地缩短提取时间，提高提取效率.提取30 min时，与传统回流提取法相比，超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖的提取率增加了97.05%；与单独超声辅助提取相比，超声协同矩形高压脉冲电场提取的提取率增加了17.04%.这说明在提取过程中超声和电场协同作用比单独的超声作用效果要好很多，在提取有效成分的应用中具有很大的潜力.但是对于超声和电场协同作用的机理还需要更多的实验进行说明.

图6 不同提取工艺条件下提取率的对比

Fig.6 Comparison of polysaccharides yield under different extraction conditions

3 结语

建立了超声协同矩形高压脉冲电场提取黄花菜多糖的动力学模型，模型能够较好地反映提取过程中工艺参数与提取率之间的关系.在不同超声功率和电场电压条件下测定黄花菜多糖提取率随时间的变化，运用这些数据对模型进行了验证，并求得动力学参数，如提取速率常数、平衡浓度、有效扩散系数等，结果表明该动力学模型能够很好地反映提取过程中提取率的变化，为黄花菜多糖提取工艺的设计提供一定的理论基础.建立了一个经验公式来反映主要工艺参数(如超声功率、电场电压)与有效扩散系数的关系，并对实验结果和预测结果进行比较，结果表明该经验公式能够较好地反映超声协同矩形高压脉冲电场提取过程中有效扩散系数与超声功率和电场电压的函数关系.

对比传统的回流提取法、超声辅助提取法和超声协同矩形高压脉冲电场辅助提取法提取过程中提取率的变化，结果表明超声协同矩形高压脉冲电场提取可以大大地缩短提取时间，提高提取效率.在工业化大生产中，要提高多糖的提取率，仅使用一种提取方法很难达到目的，在超声辅助提取的基础上引入电场，也是一个新兴的应用领域.

[1] KONWARH R,PRAMANIK S,KALITA D,et al.Ultrasonication-A complementary‘green chemistry’tool to biocatalysis:A laboratory-scale study of lycopene extraction [J].Ultrasonics Sonochemistry,2012,19(2):292-299.

[2] TABARAKI R,NATEGHI A.Optimization of ultrasonic-assisted extraction of natural antioxidants from rice bran using response surface methodology [J].Ultrasonics Sonochemistry,2011,18(6):1279- 1286.

[3] CARES MG,VARGAS Y,GAETE L,et al. Ultrasonically assisted extraction of bioactive principles from quillaja saponari molina [J].Physics Procedia,2010,3(1):169- 178.

[4] 杨日福,闵志玲,陈维楚,等.静电场协同超声提取甘草中甘草酸的研究 [J].应用声学，2014,33(2):160- 166.

YANG Ri-fu,MIN Zhi-ling,CHEN Wei-chu,et al.Glycyrrhizic acid extraction from licorice using synergetic action of electrostatic field and ultrasound [J].Journal of App-lied Acoustics,2014,33(2):160- 166.

[5] 王家德,陈霞,陈建孟.声电协同氧化2-氯酚的机理及动力学研究 [J].中国科学(B辑),2007,37(5 ):432- 439.

WANG Jia-de,CHEN Xia,CHEN Jian-meng.Acoustoelectric synergy oxidation 2-chlorophenol mechanism and dynamics research [J].Science in China(Series B:Chemistry),2007,37(5):432- 439.

[6] 谢阁,瑞金,卢蓉蓉,等.电场和超声波协同作用破碎啤酒废酵母的研究 [J].食品科学,2008,29(7):133- 137.

XIE Ge,YANG Rui-jin,LU Rong-rong,et al.Breaking of waste brewer yeast with pulsed electric fields combined with ultrasound treatment [J].Food Science,2008,29(7):133- 137.

[7] DUBOIS M,GILLES K A,HAMILTON J K,et al.Colorimetric method for determination of sugars and related substances [J].Analytical Chemistry,1956,27:363- 369.

[8] 赵思明,熊善柏,陈燕平,等.双低油菜籽的油脂萃取力学研究(I)[J].中国油脂,2002,27(4):5- 8.

ZHAO Si-ming,XIONG Shan-bai,CHEN Yan-ping,et al.Study on oil extraction kinetics of Chinese double-low rapeseed(Ⅰ) [J].China Oils and Fats,2002,27(4):5- 8.

[9] NOLTINGK B E,NEPPIRAS E A.Cavitation produced by Ultrasonics[J].Proceedings of the Physical Society(Section B),1950,63:674- 685.

[10] TTHOMPSON D,SUTHERLAND D G.Ultrasonic insonation effect on liquid-solid extraction[J].Industry and Engineering Chemistry,1955,47(6):1167- 1169.

[11] 秦炜,张英,戴猷元.超声场对毛细管内电解质扩散系 数的影响 [J].清华大学学报(自然科学版),2001,41(6):41- 43.

QIN Wei,ZHANG Ying,DAI You-yuan.Effect of ultrasound on diffusivities of electrolyte in a capillary [J].Journal of Tsinghua University Science and Technology(Science and Technology),2001,41(6):41- 43.

[12] GOGATE P R,PANDIT A B.Sonochemical reactors:scale up aspects [J].Ultrasonics Sonochemistry,2004,11(3- 4):105- 117.

[13] GRCIC I,SIPIC A,KOPRIVANAC N,et al.Global parameter of ultrasound exploitation (GPUE)in the reactors for waste water treatment by sono-Fenton oxidation[J].Ultrasonics Sonochemstry,2012,19(2):270- 279.

[14] QU W,PAN Z,MA H.Extraction modeling and activities of antioxidants from pomegranate marc [J].Journal of Food Engineering,2010,99(1):16- 23.

[15] 郭娟,杨日福,范晓丹,等.亚临界水及超声强化亚临 界水提取植物有效成分的动力学模型 [J].现代食品科技,2015,31(1):142- 146，152.

GUO Juan,YANG Ri-fu,FAN Xiao-dan,et al.Kinetic model of subcritical water extraction and ultrasound-assisted subcritical water extraction of the active ingredients of natural plants [J].Modern Food Science and Technology,2015,31(1):142- 146，152.

[16] 于庆宇.高压脉冲电场浸提技术的研究 [D].长春:吉林大学,2012.

[17] ZIMMERMANN U.Electrical breakdown,electropermeabilization and electrofusion [J].Reviews of Physiology,Biochemistry and,1986,105(3):176- 256.

[18] TIAN Y Tsong.Review on electroporation of cell membrances and some related phenomena [J].Biochemical and Bioenergy,1990,24(2):271- 295.