Sprague-Dawley大鼠自发性乳腺癌分子分型的动物实验研究

郭缙 戴顺东

Sprague-Dawley大鼠自发性乳腺癌分子分型的动物实验研究

郭缙1，2戴顺东1

目的 探讨Sprague-Dawley（SD）大鼠患有自发性乳腺癌的分子分型情况。方法 选取20只无特定病原体级雌性4周SD大鼠。通过分析全部大鼠乳腺癌分子分型，找到自发性乳腺肿瘤相关分子分型特点。结果 LuminalA型（55．00%）乳腺癌大鼠显著高于Basal-like型、LuminalB型和Her-2过表达型（P均＜0．05），其余三组差异无统计学意义（P均＞0．05）。结论 临床上除常规生化指标及影像学诊断以外，配合ER、CerbB-2及PR检测对早期鉴别大鼠乳腺癌有积极意义。

Sprague-Dawley大鼠；自发性乳腺癌；分子分型

随着分子生物学技术的高速发展，人类完整基因图谱得以描绘，乳腺癌的分子分型也逐渐受到更多妇科专家的重视[1]。本研究通过对雌性SD大鼠罹患乳腺癌及其分子分型数据改变的分析，旨在找到乳腺癌分子分型与疾病相关的规律，为临床上乳腺癌的预防和预后提供一定参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

选取无特定病原体级4周龄雌性SD大鼠20只。全部大鼠均购自北京维通利华实验动物公司（许可证号：SCXK京 2006～0009）。全部大鼠均在屏障环境动物室饲养，室内相对湿度维持在50%上下，温度控制在24℃上下，令大鼠自行进食摄水，保持室内空气新鲜，定时清理消毒。

1.2 乳腺癌大鼠建模

待大鼠适应2 w后，对所有大鼠一次性皮下注射二羟甲基丁酸（上海谱振生物科技公司提供）按体重20 mg/100 g，且每日向大鼠饮水中添加紫苏油（由上海谱振生物公司提供）液体，诱导大鼠乳腺癌模型成立。

1.3 试剂与仪器

本实验主要仪器为光学显微镜（由上海光学仪器厂提供）、石蜡切片机、组织包埋仪、组织摊片烤片机（均由湖北徕克医疗仪器公司提供），本实验图像分析程序为MoticImagesAdvanced 3.0。试验中所需CerbB-2（即癌基因产物-胞膜-阳性率）、孕激素受体（progesteronereceptor，PR）、雌激素受体（estrogenreceptor，ER）羊抗鼠单克隆抗体（均由赛默飞世尔公司提供），DAB二抗与显色试剂盒（由福州迈新生物公司提供）。

1.4 实验方法

用3%水合氯醛注射建模成功的SD大鼠腹腔，待其麻醉后处死，摘取其乳腺组织，以10%甲醛固定，进行基础透明、渗蜡、包埋等处理后制成4μm切片，脱蜡后行HE染色和免疫组化染色。在光学显微镜下观察切片形态，计算高倍镜下腺体均值。再按照试剂盒的操作说明，分别行PR、CerbB-2和ER染色。以免疫组化染色SP法进行，DAB显色，吹干，观察各指标阳性情况。

1.5 评价指标[2]

通过CerbB-2、PR和ER表达情况进行分型。分为：（1）LuminalA型：ER和/或PR（阳性），CerbB-2（阴性）；（2）LuminalB型：ER和/或PR（阳性），CerbB-2（阳性）；（3）Her-2过表达型：ER和/或PR（阴性），CerbB-2（阳性）；（4）Basal-like型：ER和/或PR（阴性），CerbB-2（阴性）。分别统计各型大鼠比率。

1.6 统计学方法

应用SPSS 18.0统计工具分析数据，计数资料表达方式为率（%），组间比较行χ2检验，P＜0.05，为差异具有统计学意义。

2 结果

本研究大鼠全部建模成功，其中LuminalA型大鼠11只（55.00%），LuminalB型2只（10.00%），Basal-like型大鼠4只（20.00%），Her-2过表达型3只（15.00%）。LuminalA型高于其他类型乳腺癌大鼠（P均＜0.05），其他三组组间差异无统计学意义（P均＞0.05）。

3 讨论

乳腺癌严重危害女性生存安全和心理健康，且近几年乳腺癌呈现年轻化发展趋势，其患病率逐年增高[3-4]。临床有研究发现，病理分期与组织学形态相同的乳腺癌患者，在治疗反应性、临床症状及生存期限等方面却往往有很大差别，因而，有专家揣测，这可能与乳腺癌具有不同的分子分型结构有关[5-7]。现今，临床上常见的乳腺癌分子分型主要有[8]：LuminalA型，该组类型内分泌或辅助化疗疗效相对较好，预后情况普遍较好；LuminalB型，经过内分泌治疗有一定效果，但其药效低于LuminalA型，现临床普遍采用化疗、内分泌与靶向联合治疗；Her-2过表达型，该种类型内分泌治疗效果欠佳，化疗疗效相对较好，通常采用化疗辅助靶向治疗；Basal-like型，临床常用化疗治疗，对内分泌疗法敏感性较差，预后情况最差。虽然对乳腺癌分子分型有一定划分，但其临床实际应用案例较少，本实验以SD大鼠为研究对象，通过研究发现，LuminalA型乳腺癌大鼠患病率显著高于其他三型，说明CerbB-2、PR和ER检测在确定乳腺癌分子分型中有一定意义，可进一步推广到临床人体诊断研究。

综上所述，对SD大鼠进行自发性乳腺癌模型实验，能够分析出其不同的分子分型，有助于乳腺癌的临床治疗和预后评价。

[1] 齐殿君，张清富，冯亮，等． 有氧运动对DMBA诱导大鼠乳腺癌发生的影响及其机制的研究[J]． 中国妇幼保健，2014，29（18）：2981-2983．

[2] 孙永强，施文． 患乳腺癌大鼠骨髓间充质干细胞定向分化能力实验研究[J]． 现代肿瘤医学，2012，20（9）：1791-1794．

[3] 邹利光，张松，戚跃勇，等． 二甲基苯蒽诱发大鼠乳腺癌的组织形态学和微血管密度观察[J]． 现代肿瘤医学，2012，20（1）：24-27．

[4] 贾罗琦，王超，程明军，等． 裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型的建立和评价[J]． 复旦学报医学版，2014，41（5）：685-689．

[5] 何晓玲，邹凌云，曹瑶，等． 不同强度有氧运动对乳腺癌大鼠癌因性疲乏及血清IL-6、TNF-α、IL-1β水平的影响[J]． 中国康复医学杂志，2015，30（9）：872-876．

[6] 张绪良，黄绪群． 分子分型在乳腺癌辅助治疗选择中的临床研究[J]． 现代肿瘤医学，2015，23（19）：2747-2750．

[7] 乔广东，朱世光，林骏，等． 基于分子分型的早期乳腺癌保乳治疗的疗效分析[J]． 中国实用医药，2013，8（17）：40-41．

[8] 金妙妙，傅健飞． 阳和化岩汤对大鼠乳腺癌癌前病变细胞超微结构的影响[J]． 中国中医急症，2015，24（7）：1162-1164．

Animal Experimental Study on Spontaneous Breast Cancer Molecular Classifcation of Sprague-Dawley Rats

GUO Jin1,2DAI Shundong11 Pathology Teaching and Research Section, Basic Medical College, China Medical University, Shenyang Liaoning 110122, China; 2 Toxicity Pathology Lab, Drug Safety Evaluation Center, Shenyang Chemical Industry Research Institute Co., LTD, Shenyang Liaoning 110141, China

Objective To discuss the situation of spontaneous breast cancer molecular classifcation of Sprague-Dawley (SD) rats. Methods 20 females 4 weeks SD rats without specific pathogen were selected. Through the analysis of all rats breast cancer molecular classifcation, to fnd the related molecular classification characteristics of spontaneous breast cancer. Results Luminal A type (55.00%) breast cancer rats was signifcantly higher than Basal-like type, Luminal B and Her-2 expression type (P ＜ 0.05), there was no signifcant difference in other three groups (P > 0.05). Conclusion In clinic, in addition to the conventional biochemical indexes and imaging diagnosis, the ER, CerbB-2 and PR detection have positive signifcance for early identifcation of breast cancer in rats.

Sprague-Dawley rats; spontaneous breast cancer; molecular classifcation

R-332

A

1674-9316（2017）02-0147-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．02．091

1 中国医科大学基础医学院病理学教研室，辽宁 沈阳110122； 2 沈阳化工研究院有限公司新药安全评价中心毒性病理研究 室，辽宁 沈阳110141

戴顺东，E-mail：raejj070885@qq．com