黑面神药材70%乙醇提取部分的化学成分研究Δ

彭伟文，何文生，纪梦颖，王珠强（.广州中医药大学附属中山中医院药学部，广东中山5840；.重庆大足区人民医院，重庆 40360）

黑面神Breynia fruticosa（L.）Hook.F.为大戟科黑面神属植物，广东道地药材。2010年版《中国药典》（一部）以鬼画符名称收载[1]，且药用部位为干燥全株，主要分布于广东、海南、云南、福建等地，具有清热解毒、祛湿通络和活血化瘀等功效，主治腹泻、缠腰火丹、皮炎、漆疮、风湿痹痛、湿疹、产后乳汁不通、阴痒等症[2]。此外，民间亦用黑面神药材治疗慢性支气管炎，为中国南部傣族习用药[3]。现代药理实验已证实，黑面神药材具有抗炎止痒、抑菌、免疫抑制、抗Ⅰ型超敏反应及抗病毒等作用[4-6]。目前，关于黑面神药材化学成分的研究报道较少，已报道的化学成分主要为一些小分子酚酸类化合物，此外还含有萜类、甾体、黄酮、木脂素、螺缩酮苷等成分[7-8]。本课题组探讨了黑面神药材70%乙醇提取部分的化学成分，以期为其质量评价奠定基础。

1 材料

1.1 仪器

AV-500型核磁共振仪、AV-400型核磁共振仪（瑞士Bruker公司）；6540型四级杆串联飞行时间质谱仪（美国Agilent公司）；FI/IR-480型红外光谱仪、WFH-203B型紫外分析仪（日本Jasco公司）；LC-6AD型半分析半制备液相色谱仪（日本Shimadzu公司）；KQ5200B型超声波清洗器（广州浩瀚仪器有限公司）；ME104型电子分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]。

1.2 试剂

D101大孔树脂（成都金山化学试剂有限公司）；柱色谱用硅胶、薄层色谱用硅胶（青岛海洋化工厂，粒度：200～300目）；氘代核磁溶剂（美国西格玛奥德里奇公司）；反相硅胶柱色谱（ODS，日本YMC公司）；Sephadex LH-20凝胶色谱（美国Pharmacia公司）；甲醇、二氯甲烷为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 药材

黑面神药材（2015年8月采自广东省中山市金钟水库）经广州中医药大学中药学院黄海波教授鉴定为真品，标本保存于广州中医药大学附属中山中医院药学部。

2 提取、分离和纯化

取干燥的黑面神药材全株50 kg，粉碎后用70%乙醇溶液回流提取3次（70%乙醇溶液用量分别为300、200、100 L），每次2.5 h，温度80～90 ℃，合并提取液，减压浓缩后得浸膏12.6 kg，依次用水、30%乙醇溶液、60%乙醇溶液、95%乙醇溶液超声（功率：200 W；频率：40 kHz）萃取30 min，萃取液于半径12 cm、3 000 r/min离心20 min，取上清液，上清液分别上样于填有D101大孔树脂的色谱柱，分别用水、30%乙醇溶液、60%乙醇溶液、95%乙醇溶液洗脱。取60%乙醇洗脱部位（500 g），反复经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（100∶0、99∶1、98∶2、97∶3、95∶5、9∶1、85∶15、75∶25，V/V）系统梯度洗脱，收集洗脱液并经薄层色谱鉴别后富集浓缩，得各部位洗脱液（Fr A～H），取Fr E经ODS柱，以甲醇-水（30∶70、40∶60、50∶50、60∶40、80∶20，V/V）梯度洗脱，经薄层色谱鉴别后富集浓缩，以半制备半分析高效液相色谱进一步纯化，得化合物 1（13.9 mg）、2（7 mg）、3（10.9 mg）、4（20.6 mg）、5（5 mg）、6（36.3 mg）、7（7.5 mg）、8（58.5 mg）、9（6.4 mg）、10（3.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末，分子式为C15H10O6，不饱和度Ω＝11。HR-ESI-MS：m/z 287.055 4[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.41（1H，dd，J＝8.0，2.5 Hz，H-6′），7.39（1H，d，J＝2.5 Hz，H-2′），6.88（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5′），6.66（1H，s，H-3），6.43（1H，s，H-8），6.18（1H，d，J＝1.5 Hz，H-6）。13C-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：164.0（C-2），102.8（C-3），181.6（C-4），157.3（C-5），98.9（C-6），163.9（C-7），93.9（C-8），161.5（C-9），103.6（C-10），121.4（C-1′），113.3（C-2′），145.8（C-3′），149.9（C-4′），116.0（C-5′），119.0（C-6′）。以上数据与文献[9]报道的一致，故该化合物鉴定为木犀草素（Luteolin）。

化合物2：黄色粉末，分子式为C15H10O7，不饱和度Ω＝11。HR-ESI-MS：m/z 303.050 7[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.67（1H，s，H-2′），7.41（1H，d，J＝8.4 Hz，H-6′），6.88（1H，d，J＝8.8 Hz，H-5′），6.40（1H，s，H-8），6.18（1H，s，H-6）。13C-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：146.8（C-2），135.7（C-3），175.8（C-4），156.2（C-5），98.2（C-6），164.1（C-7），93.4（C-8），160.7（C-9），102.9（C-10），122.0（C-1′），115.0（C-2′），145.1（C-3′），147.7（C-4′），115.6（C-5′），120.0（C-6′）。以上数据与文献[10]报道的一致，故鉴定该化合物为槲皮素（Quercetin）。

化合物3：黄色粉末，分子式为C15H10O6，不饱和度Ω＝11。HR-ESI-MS：m/z 287.055 9[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：8.04（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3′，5′），6.44（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，500 MHz）。13C-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：146.8（C-2），135.7（C-3），175.9（C-4），160.7（C-5），98.2（C-6），164.0（C-7），93.5（C-8），156.2（C-9），103.0（C-10），121.7（C-1′），129.5（C-2′，6′），115.5（C-3′，5′），159.2（C-4′）。以上数据与文献[11]报道的一致，故鉴定该化合物为山柰酚（Kaempferol）。

化合物4：黄色粉末，分子式为C30H26O13，不饱和度Ω＝18。HR-ESI-MS：m/z 595.139 9[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：12.56（1H，s，5-OH），10.18（3H，brs，7，4′，4″′-OH），7.99（2H，d，J＝8.5 Hz，H-2′，6′），7.37（2H，d，J＝9.0 Hz，H-2″′，6″′），7.35（1H，d，J＝16.0 Hz，H-7″′），6.85（2H，d，J＝9.0 Hz，H-3′，5′），6.78（2H，d，J＝ 9.0 Hz，H-3″′，5″′），6.37（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.14（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6），6.14（1H，d，J＝16.0 Hz，H-8″′），5.45（1H，d，J＝7.5 Hz，Glc-H-1″），5.46（1H，brs，Glc-2″-OH），5.21（2H，brs，Glc-3″，4″-OH），4.27（1H，d，J＝11.5 Hz，Glc-H-6″A），4.03（1H，dd，J＝11.5，6.5 Hz，Glc-H-6″B），3.37～3.41（m，Glc-H-2″～5″）。13C-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：156.9（C-2），133.5（C-3），177.3（C-4），161.6（C-5），99.3（C-6），165.1（C-7），94.2（C-8），156.8（C-9），104.2（C-10），121.2（C-1′），131.3（C-2′，6′），116.2（C-3′，5′），160.3（C-4′）；糖上碳信号δ：101.5（C-1″），74.7（C-2″），76.7（C-3″），70.4（C-4″），74.6（C-5″），63.4（C-6″）；糖C-6″取代基（反式香豆酰基）碳信号δ：125.4（C-1″′），130.6（C-2″′，6″′），115.6（C-3″′，5″′），160.5（C-4″′）δ：145.1（C-7″′），114.1（C-8″′），166.6（C-9″′）。以上数据与文献[12]报道的一致。故鉴定该化合物为山柰酚-3-O-β-D-（6-O-反式香豆酰基）-葡萄糖苷，即银椴苷（Tiliroside）。

化合物5：红褐色油状，分子式为C22H28O8，不饱和度Ω＝9。HR-ESI-MS：m/z 421.183 2[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.95（2H，s，H-2′，6′），6.80（1H，s，H-6），5.09（1H，d，J＝6.0 Hz，H-7′），4.09-4.22（4H，m，H-9，9′），3.80（3H，s，5-OCH3），3.79（3H，s，3-OCH3），3.67（6H，s，3′-OCH3，5′-OCH3），3.14（2H，m，H-7），1.81（1H，m，H＝8′），1.41（1H，m，H-8）；13C-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：129.9（C-1），27.0（C-2），148.5（C-3），139.7（C-4），148.3（C-5），107.7（C-6），34.1（C-7），41.8（C-8），66.7（C-9），60.0（3-OCH3），56.4（5-OCH3），139.3（C-1′），107.5（C-2′，6′），149.2（C-3′，5′），135.9（C-4′），42.6（C-7′），49.6（C-8′），64.3（C-9′），56.7（3′-OCH3，5′-OCH3）。以上数据与文献[13]报道的一致。故鉴定该化合物为（+）-南烛木树脂酚[（+）-Lyoniresinol]。

化合物6：红褐色油状，分子式为C20H24O6，不饱和度Ω＝9。HR-ESI-MS：m/z 383.149 8[M+Na]+。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.73（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5′），6.70（1H，d，J＝1.6 Hz，H-2′），6.65（1H，s，H-6），6.60（1H，dd，J＝8 Hz，1.6，H-6′），6.18（1H，s，H-3），3.80（3H，s，5-OCH3），3.80（1H，d，J＝10.0 Hz，H-7′），3.77（3H，s，3′-OCH3），3.70（2H，m，H-9），3.65（1H，dd，J＝10，3.6 Hz，H-9′），3.40（1H，dd，J＝11.2，40 Hz，H-9′），2.78（2H，d，J＝7.6 Hz，H-7），2.00（1H，m，H-8）。13C-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：129.1（C-1），134.3（C-2），117.6（C-3），145.6（C-4），147.4（C-5），112.5（C-6），33.7（C-7），40.1（C-8），66.1（C-9），56.51（5-OCH3），138.6（C-1′），113.9（C-2′），149.3（C-3′），146.4（C-4′），116.2（C-5′），123.4（C-6′），48.2（C-7′），48.1（C-8′），62.3（C-9′），56.46（3′-OCH3）。以上数据与文献[14]报道的一致，故鉴定该化合物为（+）-异落叶松脂素[（+）-Isolariciresinol]。

化合物7：无色结晶性固体，分子式为C20H22O7，不饱和 度Ω ＝10。HR-ESI-MS：m/z 375.145 4[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.71（1H，d，J＝2.5 Hz，H-2′），6.70（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5′），6.68（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5），6.67（1H，d，J＝1.5 Hz，H-2），6.60（1H，dd，J＝8.2 Hz，H-6），6.57（1H，dd，J＝8.0 Hz，2，H-6′），3.98（2H，d，J＝8.0 Hz，H-9），3.81（3H，s，3-OCH3），3.78（3H，s，3′-OCH3），3.12（1H，d，J＝13.5 Hz，H-7′），2.85（1H，d，J＝14.0 Hz，H-7′），2.80（1H，dd，J＝13.5，5.0 Hz，H-7），2.38-2.53（2H，m，H-7，H-8）。13C-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：132.1（C-1），113.7（C-2），149.2（C-3），146.3（C-4），116.4（C-5），122.5（C-6），32.4（C-7），44.8（C-8），72.0（C-9），128.4（C-1′），115.1（C-2′），149.0（C-3′），146.8（C-4′），116.2（C-5′），124.2（C-6′），48.2（C-7′），77.6（C-8′），180.8（C-9′），56.6（3-OCH3），56.5（3′-OCH3）。以上数据与文献[15]报道的一致。故鉴定该化合物为（+）-Nortrachelogenin。

化合物8：无色结晶性固体，分子式为C22H26O8，不饱和 度Ω ＝10。HR-ESI-MS：m/z 419.168 2[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：6.65（4H，s，H-2，2′，6，6′），4.70（2H，d，J＝4.0 Hz，H-7，7′），4.25（2H，dd，J＝9.2，6.8 Hz，H-9a，9′a），3.13（2H，m，H-8，8′），3.87（2H，d，J＝9.2、3.6 Hz，H-9b，9′b），3.83（12H，s，OCH3-3，3′，5，5′）。13C-NMR（CD3OD，400 MHz）δ：133.3（s，C-1，1′），104.6（C-2，2′，6，6′），149.5（C-3，3′，5，5′），136.3（C-4，4′），87.7（C-7，7′），55.7（C-8，8′），72.9（C-9，9′），56.9（OCH3-3，3′，5，5′）。以上数据与文献[16]报道的一致，故鉴定该化合物为（+）-丁香树脂醇[（+）-Syringaresinol]。

化合物9：淡黄色无定形固体，分子式为C22H28O9，不饱和度Ω＝9。HR-ESI-MS：m/z 475.138 7[M+K]+。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.75（4H，s，H-2，2′，6，6′），4.97（2H，d，J＝8.0 Hz，H-7，7′），3.88（12H，s，3，3′，5，5′-OMe），3.61-3.65（4H，m，H-9，H-9′），2.33（2H，H-8，H-8′）。13C-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：134.4（C-1，C-1′），105.0（C-2，C-2′，C-6，C-6′），149.5（C-3，C-3′，C-5，C-5′），136.4（C-4，C-4′），84.7（C-7，C-7′），55.3（C-8，C-8′），61.8（C-9，C-9′），57.0（3，3′，5，5′-OCH3）。以上数据与文献[17]报道的一致，故鉴定该化合物为IcariolA2。

化合物10：黄色油状物，分子式为C22H26O9，不饱和度Ω＝10。HR-ESI-MS：m/z 435.166 0[M+H]+。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.35（2H，s，H-2，6），6.77（2H，s，H-2′，6′），4.71（1H，d，J＝8.5 Hz，H-7′），4.11-4.25（2H，m，J＝8.6，4.7 Hz，H-8，9），3.88（6H，s，3，5-OCH3），3.86（6H，s，3′，5′-OCH3），3.55-3.95（1H，m，H-8′，9′）。13C-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：127.9（C-1），108.7（C-2，6）、149.4（C-3，5），142.9（C-4），199.7（C-7），50.0（C-8），72.2（C-9），133.2（C-1′），105.4（C-2′，6′），149.1（C-3′，5′），136.5（C-4′），85.6（C-7′），55.5（C-8′），61.0（C-9′），56.9（3，5-OCH3），56.7（3′，5′-OCH3）。以上数据与文献[18]报道的一致，故鉴定该化合物为5，5′-二甲氧基-7-氧代落叶松脂醇（5，5′-Dimethoxy-7-oxolariciresinol）。

4 讨论

本研究从黑面神药材中分离得到10个化合物，利用波谱方法分别鉴定为木犀草素（1）、槲皮素（2）、山柰酚（3）、银椴苷（4）、（+）-南烛木树脂酚（5）、（+）-异落叶松脂素（6）、（+）-Nortrachelogenin（7）、（+）-丁香树脂醇（8）、IcariolA2（9）、5，5′-二甲氧基-7-氧代落叶松脂醇（10），且以上10个化合物均为首次从黑面神植物中分离得到。本研究可为进一步阐明黑面神药材化学成分，建立其质量标准提供一定参考。

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