五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠炎性细胞因子表达影响

帅云飞,李鑫,王孟清,荀春铮,曾庆佳,李雪冰

(湖南中医药大学 1. 第一附属医院儿科，2.中医诊断学湖南省重点实验室，湖南 长沙 410007 )

五虎汤对病毒诱发幼年哮喘大鼠炎性细胞因子表达影响

帅云飞1,李鑫2,王孟清1,荀春铮1,曾庆佳1,李雪冰1

(湖南中医药大学 1. 第一附属医院儿科，2.中医诊断学湖南省重点实验室，湖南 长沙 410007 )

RSV(respiratory syncytial virus, 呼吸道合胞病毒)感染介导的Th1/Th2、Th17/Treg失衡诱导儿童支气管哮喘的发生发展[1-2]。五虎汤是由麻黄、杏仁、石膏、甘草、细茶叶组成的治疗小儿哮喘的经典名方。前期研究表明，五虎汤抑制哮喘患儿CD80、CD86及IL-4、IL-5表达，促进IL-2表达[4]。因此，本文拟采用RSV诱导联合OVA(ovalbumin, 卵清白蛋白)致敏复制幼年大鼠哮喘模型，研究五虎汤对Th1/Th2、Th17/Treg 介导IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17炎性细胞因子影响，明确其治疗病毒诱发哮喘的作用机制。

1 材料与方法

1.1 受试药物 五虎汤由本院药剂科提供。制备方法：6倍水先煎麻黄30 min ，去上沫，纳杏仁、石膏、甘草，细茶叶煎1 h，连续提取2次，分别浓缩至含4.752、2.376、1.188 g生药·kg-1。

1.2 仪器、试剂及病毒 酶标仪，318C+型，上海沛欧分析仪器有限公司；低温台式高速离心机，HR/T 16M型，赫西仪器装备有限公司。IL-10、IL-12、IFN-γ及IL-17ELISA试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司提供，批号：EK0418、EK0520、EK0978、EK1527)。RSV，武汉大学医学部病毒研究所提供。1.3 动物分组及给药 SPF级SD大鼠60只，♂/♀，体质量(60±10)g，湖南斯莱克景达实验动物有限公司[许可证号：SCXK(湘)2013-0004]。参照文献[5]，制备RSV诱导OVA致敏大鼠哮喘模型。造模成功后，分层随机分为五虎汤高、中、低剂量组、哮喘模型组及阳性对照组，每组10只。五虎汤高、中及低剂量组po给予4.752、2.376、1.188 g·(kg·d)-1药液，空白对照组、哮喘模型组分别po等容积双蒸水，阳性对照组po地塞米松片2.4 mg·(kg·d)-1，2次/d，持续14 d。

1.4 检测指标 末次给药后，禁食12 h，处死动物，采集支气管肺泡灌洗液(BALF)，检测细胞计数及分类计数；取肺组织，行组织病理学检查；腹主动脉采血， 3 000 r·min-1离心10 min，取血清，ELISA法检测血清IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17表达情况。

2 结果

2.1 对肺组织病理影响 模型组可见支气管壁大量炎性浸润，平滑肌层增厚，杯状细胞增生，上皮细胞大量脱落。五虎汤治疗后呈剂量依赖性明显抑制支气管壁炎性浸润，平滑肌层恢复正常，少量杯状细胞分布，上皮细胞少量脱落。

2.2 对BALF细胞计数及分类计数影响 模型组白细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞比例均较空白组明显升高(P<0.01)。五虎汤高、中剂量白细胞总数、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞均明显下降(P<0.01，P<0.05)。

2.3 对IFN-γ、IL-12、IL-10、IL-17表达影响 模型组较空白组IFN-γ、IL-12降低，IL-10、IL-17升高(P<0.05)。五虎汤治疗后高、中剂量较模型组IFN-γ、IL-12升高，IL-10、IL-17降低(P<0.01，P<0.05)。

3 讨论

五虎汤是治疗小儿哮喘的经典名方，前期研究表明其能抑制呼吸道合胞病毒复制，调控IL-2、IL-4 、IL-5等炎性因子表达[3，6]。RSV感染介导的Th1/Th2、Th17/Treg失衡是引起儿童支气管哮喘的始动因素[1-2]，IL-12诱导Th 1细胞产生IFN-γ[7]，而失衡的Th2细胞诱生IL-10，Th17细胞失衡则促进IL-17的大量生成][8]。研究显示，五虎汤能促进IFN-γ、IL-12表达，抑制IL-10、IL-17表达，并剂量依赖性明显抑制支气管壁炎性浸润，平滑肌层恢复正常。结果提示，五虎汤能显著抑制病毒诱发的幼年大鼠哮喘气道炎症，其作用机制可能与其调节IFN-γ、IL-10、IL-12、IL-17等表达，使失衡的Th1/Th2、Th1/Treg恢复平衡有关。

(致谢：本实验在湖南中医药大学中医诊断学湖南省重点实验室进行，感谢实验室及课题组所有老师的帮助。)

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Effect of Wu-Hu Soup on serum inflammatory cytokines in young rats with virus induced asthma

SHUAI Yun-fei1, LI Xin2, WANG Meng-qing1, XUN Chun-zheng1, ZENG Qing-jia1, LI Xue-bing1

(1.DeptofPaediatrics,TheFirstHospitalofHunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China; 2.HunanProvincialKeyLaboratoryofDiagnosticsinChineseMedicine,HunanUniversityofChineseMedicine,Changsha410007,China)

五虎汤；呼吸道合胞病毒；幼年哮喘大鼠；IFN-γ；IL-10；IL-12；IL-17

Wu-Hu Soup; respiratory tract virus; young rats with virus induced asthma; IFN-γ;IL-10;IL-12;IL-17

时间：2016-12-27 16:13

http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20161227.1613.052.html

2016-09-03,

2016-12-06

湖南省自然科学基金资助项目(No 13JJ3105)；湖南省科技计划项目(No 2015JC3076)

帅云飞(1980-)，男，主治医师，研究方向：中医药诊治小儿呼吸疾病的基础与临床，E-mail:yuanshuai20063048@163.com; 王孟清(1963-)，男，教授，博士生导师，研究方向：小儿呼吸疾病的中医药防治，通讯作者,E-mail:wmqwmq2009@sina.com; 李 鑫(1986-)，男，助理研究员，研究方向：中药及复方作用机制，通讯作者,E-mail:lixin20082005@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2017.01.026

A

1001-1978(2017)01-0145-02

R-332；R289.5；R373.1；R392.12；R725.622.505