猪链球菌的分离鉴定及药敏试验

李 娟

(蓬莱市动物卫生监督所,山东蓬莱 265600)

猪链球菌的分离鉴定及药敏试验

李 娟

(蓬莱市动物卫生监督所,山东蓬莱 265600)

猪链球菌病对生猪养殖危害严重，虽然致死率并不高，但是对生猪的生长发育尤为不利。

1 检测方法

1.1 涂片镜检

在无菌条件下采集病猪相关病料，制成触片，然后对其进行革兰氏染色镜检。

1.2 细菌分离培养

在无菌条件下进行病料的采集，之后分别进行画线，在37℃的条件下进行培养24h之后，观察其菌落的特征。然后选取特征性显著的单个菌落进行革兰氏染色镜检，分别将其接种于三种培养基，即普通的琼脂斜面培养基、血清肉汤培养基以及营养肉汤培养基，进行24h的培养。获取分离菌的纯培养物并观察其在三种不同培养基上的生长状况。

1.3 培养特性

把纯净的培养物接种到鲜血琼脂斜面培养基上，分别放在37℃的温度条件、10℃的条件以及45℃的条件进行培养，观察它们的生长状况。

1.4 生化试验

将已经分离的菌血清肉汤培养物分别进行接种，接种的生化培养基是葡萄糖、甘露醇、蔗糖以及麦芽糖，在37℃的条件下进行24h的培养后，观察它们的生化反应特性。

1.5 药敏试验

用无菌的棉签蘸取分离菌的肉汤培养物后，将其涂布到琼脂平板。稍微干一些后，用不带菌的镊子分别夹取各种药敏纸片，将其平贴到培养基的表面，培养24h以后，就抑菌环的大小进行观察和测定。具体的标准就是如果抑菌环的直径超过了15mm，就是高度敏感；如果是在10mm到15mm的话，则是中度敏感；如果低于10mm的话，则是低度敏感；如果没有抑菌环出现的话，就是不敏感。

1.6 动物实验将

试验用的10只健康的小白鼠，随机分成2组，在试验组小白鼠的腹腔上进行上述肉汤培养物的注射，注射的剂量为每只0.5ml；而对照组则是注射无菌的生理盐水，观察发病和死亡情况。

2 结果

2.1 涂片镜检

将病料涂片，经革兰氏染色后镜检能够看到呈现成对排列或者短链状排列的革兰氏阳性细菌。

2.2 分离培养

在37℃条件下进行24h的培养之后，在鲜血琼脂平板上有小菌落形成，呈现半透明状，另外，需要注意的是，在外层有溶血环的出现，而且生长状况良好；在普通的琼脂板上，菌落则相对贫瘠；而在血清肉汤中先是均匀，而后是浑浊，最后有沉淀物形成，但是并没有菌膜的形成。

2.3 动物试验

试验组的5只兔子在接种2～3d的时间后，呈现出了不同的症状变化，其中有两只在接种2～3d之后先后死亡，而另外的三只则表现出了食欲的减退，精神萎靡不振，在下颌部位有淋巴结肿胀现象。如果进行剖检的话，会发现肝脏、脾脏以及肾脏都有肿大现象。如果将心血和胸腔内的积液取出进行涂片的话，进行镜检，则会发现有革兰氏阳性球菌。但是，在对照组并没有发现任何异常现象。

3 药敏试验

通过药敏试验发现，链球菌依次敏感的药物分别是头孢菌素、青霉素、卡那霉素，敏感的程度差异并非十分显著。但是，对于环丙沙星、链霉素、庆大霉素、多西环素以及阿莫西林和土霉素则具有抗药性。

4 体会

结合临床的诊断情况，以及实验的具体情况，可以确诊为当地某生猪养殖场的患病猪的确是感染了猪链球病，而致病的病原就是链球菌。这种菌的显著特点就是很容易产生抗药性，因此在治疗之前一定要首先进行药敏试验，等到筛选出敏感的药物之后，再开始进行治疗，才有可能达到预期的治疗效果。另外，需要注意的是，通过药敏试验发现，这种菌对头孢菌素以及青霉素和卡那霉素及其敏感，而对于环丙沙星和阿莫西林等则有抗药性。

目前，对于链球菌的分离方法主要有两种，分别是血清学试验和生化试验，其中第一种检测方法比较简单，但是不太容易获取标准的阳性血清；而第二种方法目前只能对菌群进行鉴定，无法实现定型鉴定。此外，患病生猪和带菌生猪是重要的传染源。为此，猪场一定要有严格的防疫制度和消毒制度，一旦发现，就要果断采取隔离；对于那些患病致死的生猪一定要进行无害化的处理，有效防止病原的扩散，同时对被污染的圈舍以及用具等进行严格的消毒。总而言之，依托分离的菌株，进行自家苗的制备，可以说是对猪链球菌的预防能够起到积极的效用，而且成本低，值得广泛推广。

猪链球菌病对生猪的生长发育有着至关重要的影响，因此，在日常的饲养过程中，一定要注意观察，一旦发现，果断采取有效措施，将不良影响降低到最低。目前，疫苗接种可以说对于这种疫病的预防具有积极的效果，因此笔者建议，一定要在技术人员的指导下，及时进行接种，切实保证防疫的效果，全面实现生猪养殖的预期良好经济收益。

[1] 赵恒章，刘保国，姜金庆，等.致病性猪链球菌的分离鉴定及药敏试验[J].湖南农业科学，2007，（4）：173-175.

[2] 杨霞，卢中华，张红英，等.猪链球菌病病原的生化分群鉴定和药敏试验[J].中国畜牧兽医，2004，31（4）：32-33.

[3] 尹争艳.猪链球菌病病原流行病学研究及防治措施[D].华中农业大学，2007.