不同炮制方法对五味子中木脂素类成分含量的影响分析

李海涛

（长春中医药大学附属医院药学部，吉林 长春130021）

五味子是常用中药材，具有益气生津、收敛固涩、补肾宁心的功效[1]。五味子中木脂素类主要包括醇甲、醇乙、甲素、乙素等，其成分含量是发挥药效的重要决定因素[2]。为观察探究不同炮制方法对五味子中木脂素类成分含量的影响，特对经过上述方法炮制的7种五味子样品分别采用高效液相色谱法对木脂素类成分含量及溶出率进行检测，并分析不同炮制方法对其成分的影响，旨在为五味子炮制及应用提供参考。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：高效液相色谱仪 (Agilent 1200型) ；色谱工作站 (N22000)；电子分析天平（梅特勒AG285型）；超声清洗器（大连依利特科学仪器有限公司）。

1.2 试剂：试验用五味子均为成熟野生鲜品，采自黑龙江鸡西，真空包装；对照品五味子醇甲（批号：110857-201506）、醇乙（批号：110858-201509）、甲素（批号：110764-201507）、乙素（批号：110765-201509）均购自药品检验所。以甲醇为色谱纯、实验用水均为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

1.3 方法

1.3.1 样品加工及炮制方法。加工方法：将实验样品在室内通风处铺匀，注意经常翻动，温度保持20～25 ℃，湿度保持30%～50%，待20 d后开始炮制。

炮制方法：①生五味子：无需特殊处理；②醋蒸：按照1∶5比例将米醋与五味子混合均匀后放置于保鲜盒中，密闭并隔水加热，待样品变为黑色后停止加热，干燥后称重；③酒蒸：按照1∶5比例将黄酒与五味子混合均匀后加工，方法同上；④蜜蒸：按照1∶5比例将炼蜜与五味子混合均匀后加工，方法同上；⑤酒浸：按照1∶2比例将黄酒与五味子混合均匀后浸泡24 h，置于50 ℃干燥箱中干燥至恒重；⑥清炒：取生五味子用文火干炒至表面变为紫褐色，并置于50 ℃干燥箱中干燥至恒重；⑦蜜炒：按照1∶10比例将炼蜜与五味子混合均匀后用文火干炒至表面变为紫褐色，并置于50 ℃干燥箱中干燥至恒重。

1.3.2 供试品与对照品溶液制备。供试品溶液制备：取7种五味子炮制品适量，粉碎后过60目筛，然后将其置于105 ℃干燥箱中进行干燥处理，各精密称取1.00 g粉末分别置于容量瓶（25 mL）中，加入适量甲醇后超声提取30 min，并用甲醇定容，采用滤膜（0.45 μm）过滤即可。对照品溶液制备：分别取五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素置于容量瓶（25 mL）中，加入甲醇定容，溶液浓度分别为0.460、0.218、0.397、0.550 g/L，采用滤膜（0.45 μm）过滤后各取1 mL置于容量瓶（10 mL）中并用甲醇定容，得对照品溶液。

1.3.3 色谱条件：色谱柱为C18柱4.6×150 mm2，5 μm；流动相为1∶1∶1的甲醇：乙腈：重蒸馏水；流速设置为1 mL/min；检测波长为250 nm；柱温为25 ℃；进样量为10 μL。分别去对照品和供试品溶液进样，并记录峰面积。取得较好的分离后确定对样品测定无不良干扰。

1.3.4 方法学试验。线性关系：分别取对照品溶液制成不同溶质的系列质量浓度的溶液，所用方法为倍比稀释法，依据上述色谱条件进样，记录峰面积，以对照品质量溶度C为横坐标，以峰面积Y为纵坐标，行线性回归分析，所得方程和线性系数分别为Y=26078C，r=0.9999；Y=31507C，r=0.9999；Y=36075C，r=0.9999；Y=25314C，r=0.9999，可知在0.01～0.50 g/L浓度范围内质量浓度均与峰面积存在良好的线性关系。

稳定性试验：按照上述色谱条件取对照品混合溶液分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h进样，测得峰面积在24 h内均无明显变化，且RSD=1.89%，表明在24 h内测定具有较高的稳定性。

精密度试验：按照色谱条件分别将对照品溶液连续6次进样，测得峰面积的RSD分别为0.46%、0.49%、0.47%、0.49%，表明具有良好的精密度。

重复性试验：取生五味子和清炒五味子供试品溶液分别按照色谱条件进样，测得峰面积的RSD分别为0.87%、0.83%，证明本实验具有较强的重复性。

加样回收率试验：分别取7种五味子供试品粉末加入对照品0.3mg制备溶液后按照色谱条件进样，记录峰面积并采用外标法对回收率进行计算，平均回收率分别为99.26%、99.37%、99.54%、101.21%，且RSD分别为0.95%、0.85%、0.89%、0.92%，表明可采用此种方法检测回收率。

1.3.5 样品木脂素类成分含量测定：分别取7种五味子炮制品适量，每种炮制品分别精密称取3份，按照供试品溶液制备方法处理后依据色谱条件进样，记录峰值面积，并采用外标法利用其测定五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素，并按照公式[（炮制品木脂素类含量×炮制品质量）-（残渣木脂素类含量×残渣质量）]/（炮制品木脂素类含量×炮制品质量）计算不同组分的溶出率。

2 结 果

生五味子、醋蒸、酒蒸、蜜蒸、酒浸、清炒、蜜炒7种方法五味子炮制品中五味子醇甲含量和溶出率分别为0.1326%和60.29%、0.1096%和52.75%、0.1589%和63.74%、0.1198%和56.93%、0.1637%和65.41%、0.0832%和36.51%、0.0729%和29.83%；五味子醇乙含量和溶出率分别为0.5987%和52.96%、0.4257%和40.73%、0.6396%和55.25%、0.3217%和50.62%、0.6689%和58.74%、0.1524%和36.82%、0.2017%和33.21%；五味子甲素含量和溶出率分别为0.2154%和22.86%、0.2031%和11.02%、0.2976%和25.78%、0.1932%和10.26%、0.2764%和24.37%、0.1137%和8.95%、0.1028%和5.73%；五味子乙素含量和溶出率分别为0.7935%和29.38%、0.5241%和9.12%、0.8129%和31.07%、0.7015%和9.85%、0.7935%和29.74%、0.3204%和6.12%、0.2950%和5.09%。酒蒸和酒浸五味子中五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素类成分含量和溶出率均最高，其次为生五味子，且炒法五味子供试品中木脂素类成分含量及溶出率均较低。

3 讨 论

不同五味子炮制方法可对其中木脂素类成分含量产生一定影响，进而在不同程度上影响药效的发挥。关于五味子炮制方法及工艺介绍在古代中医典籍上有详细的介绍，现代中医学家将五味子炮制方法分为生五味子、醋蒸、酒蒸、蜜蒸、酒浸、清炒、蜜炒共7类[3]。因而探究不同炮制方法对五味子中醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素类成分含量的影响对指导制药和用药均具有重大作用。

本研究采用高效液相色谱法对不同炮制方法供试品中五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素等木脂素类成分含量及溶出率进行测定，结果发现酒蒸和酒浸五味子中不同木脂素类成分含量及溶出率均最高，其次为生五味子，说明酒蒸和酒浸炮制的五味子中不同木脂素类成分含量均较高，可充分发挥功效。既往多项研究证实[4-6]，酒蒸和酒浸炮制的五味子中具有强壮作用的木脂素类成分含量均明显高于生五味子和炒制品，与本研究结果一致，提示应当采用酒蒸和酒浸法对生五味子进行炮制以增强药效。分析其中原因为，乙醇为黄酒中的主要成分，而多种木脂素类成分均可溶于乙醇，因而用酒蒸和酒浸法炮制五味子能够将更多的木脂类成分溶于其中。综上，在炮制五味子时，可考虑采用酒蒸和酒浸法，以充分利用药材中强壮成分，增强药效。

[1] 胡俊扬,陆兔林,毛春芹,等.HPLC法同时测定不同产地五味子中8种木脂素类成分[J].中成药,2012,34(2):313-316.

[2] 贺凤成,李守信,赵志全,等.一测多评法测定五味子中4种木脂素类成分的含量[J].药学学报,2012,47(7):930-933.

[3] 蒋益萍,张巧艳,张宏,等.正交试验优选五味子木脂素类成分的提取工艺[J].中成药,2013,35(11):2390-2394.

[4] 于晓礼,皮子凤,胡秀丽,等.高速逆流色谱结合电喷雾多级串联质谱方法高效分离制备、鉴定五味子木脂素类成分[J].药学学报,2014,49(1):78-82.

[5] 窦志华,安莉萍,陈敏,等.一测多评法同时测定五味子中6种木脂素类成分含量[J].中国药学杂志,2014,49(2):147-151.

[6] 邱宏涛,赵筱萍,李正,等.基于网络药理学的五味子木脂素类主要药效作用研究[J].中国中药杂志,2015,40(3):522-527.