复伤糖浆的薄层鉴别及乌头碱限量的检查方法研究

李 霞 邓恢进 张先胜

（武汉市江夏区中医医院药剂科，湖北 武汉 430200）

复伤糖浆的薄层鉴别及乌头碱限量的检查方法研究

李 霞 邓恢进 张先胜

（武汉市江夏区中医医院药剂科，湖北 武汉 430200）

目的 提高复伤糖浆质量控制标准，确保其安全、有效。方法 采用薄层色谱（TLC）法分别用不同提取溶剂制备供试液，并试验几种展开剂展开效果，对复伤糖浆中赤芍、延胡索、牡丹皮进行定性鉴别，对制川乌、制草乌的双酯型生物碱（以乌头碱计）进行限量检查。结果 赤芍、延胡索、牡丹皮的供试品溶液色谱中，阴性对照品溶液都没有被污染，对照溶液、各个样品溶液在色谱相应点上显现出一样的颜色斑点；制川乌、制草乌的样品试验的溶液色谱中，各对照样品相比较，在相应的溶液色谱中，无法显示出斑点，或斑点非常小，明显小于对照品的斑点。结论 该方法快速、简便、针对性强、重复性好，可作为 控制复伤糖浆的质量标准。

复伤糖浆；薄层鉴别；乌头碱限量

1 材 料

1.1 试验材料：复伤糖浆（批号：141031、141211、141216，武汉市江夏区中医医院制剂室生产）；对照品（丹皮酚，批号：110708-200506；芍药苷，批号：110736-200526；延胡索乙素，批号：110726-200409；乌头碱，批号：110720-200410，本实验所有对照品均购自中国药品生物制品检定所），赤芍药材（购自安徽），处方所用药材均符合2010年版《中国药典（一部）》标准，所用试剂均为分析纯[1-2]。

1.2 试验仪器与试剂：光学电子分析天平（TG328B，湘仪天平仪器厂）；pHs-25型数显酸度计（杭州奥立龙仪器有限公司）；恒温水浴箱（北京市医疗设备厂）；电热鼓风干燥箱（上海沪南科学仪器厂）；10 cm×10cm信宜P型单槽层析缸；薄层色谱所用硅胶G（10 cm ×10 cm，青岛海洋化工厂分厂）；其他化学试剂均为分析纯。

2 实验方法与结果

2.1 赤芍的TLC鉴别：①取本品40 mL±1 mL （含赤芍药材3 g± 0.08 g），置于分液漏斗中，加水40 mL，摇匀，加醋酸乙酯40 mL，盖好，横置轻轻滚动振摇提取，再正立静置约10 min，水浴蒸干已萃取醋酸乙酯液，之后加入1 mL甲醇，溶解制作成实验样品溶液。②不含赤芍阴性对照样品的制作：以复伤糖浆处方比例为基础，以其制备工艺为准，选取除赤芍的其他12种药材，量取该对照样品40 mL，同上法制备缺赤芍的阴性对照溶液。③另取赤芍药材5 g，打成粗粉，加水100 mL煎煮约20 min滤过，取滤液40 mL，同供试品溶液制备法制备赤芍药材供试溶液。④芍药苷对照品溶液制作：称取芍药苷对照品1 mg（精密）+1 mL甲醇，溶解制成。⑤吸取上述①～④溶液各5 μL，采用照薄层色谱法试验[2-3]，点于同一个硅胶G薄层板上，以40氯仿：5醋酸乙酯：10甲醇：0.2甲酸作为展开剂，展开大约8 cm，这后取出并晾干。以香草醛硫酸溶液（5%）作为喷洒剂进行喷洒，慢慢均匀加热，一直到斑点清晰为止。通过视检观察结果。结果：阴性对照在相应对照品色谱上没有出现斑点，实验试品和相应对照品色谱的同一个位置上出现斑点，且斑点相同，均为蓝紫色斑点。见图1。

图1 赤芍薄层色谱图1.阴性对照；2～3.供试品；4.赤芍药材；5.芍药苷

图2 延胡索薄层色谱图1.阴性对照；2～3.供试品；4.延胡索乙素

图3 牡丹皮薄层色谱图1.阴性对照；2～3.乙醚提取的供试品；4.乙酸乙酯提取的供试品；5.丹皮酚

图4 乌头碱限量薄层色谱图1～2.乙酸乙酯提取的供试品；3.乙醚提取的供试品；4.乌头碱

2.2 延胡索的TLC鉴别：①取本品40 mL±1 mL （含延胡索药材3 g ±0.08 g），加水40 mL稀释，用氨试液调pH值9～10，置于分液漏斗中，加乙酸乙酯40 mL，盖好，横置轻轻滚动振摇提取，再正立静置约10 min，萃取乙酸乙酯液，水浴蒸干，加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。②按复伤糖浆处方比例及制备工艺取除延胡索外的其他12味药材，制备缺延胡索的阴性对照样品溶液，取样品40 mL，根据上面的方法制作不含延胡索阴性对照溶液。③不含延胡索阴性对照溶液制作：称取延胡索对照品1 mg（精密）+1 mL甲醇，溶解制成。⑤吸不含延胡索阴性对照溶液和实验溶液各5 μL，采用照薄层色谱法试验[2,4]，点于同一个硅胶G薄层板上，以6正己烷：4氯仿：1甲醇作为展开剂，展开大约8 cm，这后取出并晾干。以稀碘化铋钾试液作为喷洒剂进行喷洒，慢慢均匀加热，一直到斑点清晰为止。通过视检观察结果。结果：阴性对照在相应对照品色谱上没有出现斑点，实验试品和相应对照品色谱的同一个位置上出现斑点，且斑点相同，均为橘黄色斑点。见图2。

2.3 牡丹皮的TLC鉴别：①取本品50 mL±1 mL（含丹皮药材1.5 g± 0.03 g），置于分液漏斗中，加水25 mL，摇匀，加乙醚30 mL，盖好，横置轻轻滚动振摇提取，再正立静置约10 min，萃取乙醚液，挥干，然后加丙酮1 mL使溶解，作为供试品溶液。②按复伤糖浆处方比例及复伤糖浆制备工艺取除牡丹皮外的其他12味药材，制备缺牡丹皮的阴性对照样品，量取该对照样品50 mL，同上法制备缺丹皮的阴性对照溶液。③精密称取取丹皮酚对照品1 mg，加丙酮1 mL溶解，作为对照品溶液。④吸取丹皮酚对照品溶液和实验溶各l0 μL，采用照薄层色谱法试验[2,4]，点于同一个硅胶G薄层板上，以3环己烷：1乙酸乙酯作为展开剂，展开大约8 cm，这后取出并晾干。以三氯化铁试液作为喷洒剂进行喷洒，慢慢均匀加热，一直到斑点清晰为止。通过视检观察结果。结果：阴性对照在相应对照品色谱上没有出现斑点，实验试品和相应对照品色谱的同一个位置上出现斑点，且斑点相同，均为暗紫色斑点。见图3。

2.4 乌头碱限量：①取本品50 mL±1 mL（含制川乌、制草乌药材共2 g±0.04 g），加氨试液调pH至9～10，同时再加乙酸乙酯轻摇提取3次，每一次15 mL，合并提取液并蒸干，最后加1 mL无水乙醇，溶解制作而成实验溶液。②乌头碱对照品1 mg+1 mL无水乙醇，溶解制作而成对照品。③吸取实验溶液和乌头碱对照品溶液各5 μL，采用照薄层色谱法试验[2,4]，点于同一个硅胶G薄层板上，以9氯仿：2丙酮：1甲醇作为展开剂，展开大约8cm左右，这后取出并晾干。以稀碘化铋钾试液作为喷洒剂进行喷洒，慢慢均匀加热，一直到斑点清晰为止。通过视检观察结果。结果：阴性对照在相应对照品色谱上没有出现斑点或斑点小于对照品的斑点。见图4。

3 讨 论

①由于复伤糖浆为液体制剂，供试品制备均采用溶剂直接提取。所取样品的量参照药典中该药材的检测量，并结合本试验的实际，选择斑点清晰，易于识别并且操作简便、误差较小的样品量作为检测量。乌头碱限量检查参照药典制川乌、制草乌取样量设定[2]。本制剂日服用量为45～90 mL，折算为乌头碱最大量为0.9～1.8 mg，在最小中毒量以下。本文增加了两味主药延胡索、牡丹皮的薄层鉴定及乌头碱限量检查，规范了赤芍的薄层检查方法，经多次实验，斑点清晰、圆整，重复性好。能很好的控制复伤糖浆的质量。在延胡索的薄层鉴定及乌头碱限量检查中，先分别用的是氯仿和乙醚作提取溶剂，由于氯仿和乙醚为麻醉品毒性较大，属公安部门管制品，所以改用乙酸乙酯用作提取溶剂，结果比用乙醚提取效果更好（图4）。丹皮薄层鉴定也曾考虑用乙酸乙酯提取，由于采用乙酸乙酯提取相对乙醚提取的薄层色谱斑点颜色淡一些，清晰度不如乙醚提取好（图3），故仍然采用乙醚作提取溶剂。②延胡索具有活血散瘀，行气止痛的功效;主治跌打损伤及各种疼痛，丹皮、赤芍的功效都是清热凉血，活血散瘀，均为该方中的主药，所以首选它们作为检验标准。③乌头碱限量先采用环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（6∶4∶1）为展开剂，斑点不够清晰，且二乙胺刺激性大，展开剂容易结晶，效果不稳定，参考多种文献并经多次试验后改用氯仿-丙酮-甲醇（9∶2∶1）效果非常理想。

[1] 黄可婧,王丽娟.附子理中片的质量标准研究[J].天津药学,2014, 26(5):16-20.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:中国医药科技出版社,2010: 36-160.

[3] 武琳,杨光,黄菲.连翘败毒丸质量标准研究[J].中国中医药信息杂志,2014,21(5): 95-97.

[4] 肖霞,曹俊凯.牡丹皮中丹皮酚的薄层层析鉴别[J].中国实用医药,2014,9(26):256-257.

R282.710.3

B

1671-8194（2016）35-0020-02