八仙花叶中酚酸类化合物的分离和结构鉴定

陈亚军，于莹，高岩，笔雪艳，匡海学

(黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室/黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040)



八仙花叶中酚酸类化合物的分离和结构鉴定

陈亚军，于莹，高岩，笔雪艳，匡海学*

(黑龙江中医药大学教育部北药基础与应用研究重点实验室/黑龙江省中药天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江 哈尔滨 150040)

目的：对八仙花叶的酚酸类化学成分进行研究。方法：采用硅胶柱色谱、ODS柱色谱和HPLC等方法进行分离纯化，并通过1H-NMR，13C-NMR，MS等谱学技术确定结构。结果：从八仙花叶提取物中分离得到8个酚酸类化合物，分别为：vanilloloside(1)，5-羟甲基-2-甲氧基-苯酚-β-D-葡萄糖苷(2)，4-甲氧基-苯甲醛-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)，tachioside(4)，isotachioside(5)，阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(6)，咖啡酸(7)，对羟基苯丙酸甲酯(8)。结论:化合物1～3，6～8为八仙花属中首次分离。

八仙花；分离纯化；结构鉴定；酚酸

八仙花(Hydrangea macrophylla)又名绣球花，为虎耳草科八仙花属多年生草本植物[1]。八仙花为落叶灌木，枝粗壮，叶近革质大而稍厚，边缘有粗锯齿，叶面鲜绿色，叶背黄绿色。花丰满密集，粉红色、淡蓝色或白色。八仙花产于我国长江以南各省区，民间常用其全草治疗痢疾、心热惊悸等疾病。现代药理及临床研究表明,八仙花叶具有很好的抗疟、抗过敏、降脂、降糖[1]等作用。因此对八仙花叶中所含的化学成分进行系统地研究，有利于进一步探究其生物活性。本实验对八仙花叶的化学成分进行了较为系统的研究，从其正丁醇部分分离得到8个酚酸类化合物。

1 材料

JNM-LA270(600 MHz)；JNM-ECA600(600 MHz)型核磁共振仪(TMS为内标)；Waters 2535制备型高效液相色谱仪；Waters 2414型视差检测器；硅胶(薄层色谱和柱色谱,青岛海洋化工厂)；反相ODS(Fuji Silysia Chemical, Ltd.)；高效液相所用试剂为色谱级；其他试剂均为分析纯。

八仙花叶于2013年9月采集于中国四川省石柱县，由黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为八仙花(H.macrophylla)的叶。样本保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室。

2 提取分离

八仙花的干燥叶2.0 kg经甲醇提取3次，每次3 h，合并提取液，浓缩干燥得甲醇提取物452.3 g。将甲醇提取物加水悬浮，依次以等体积乙酸乙酯和正丁醇萃取3次，减压回收溶剂，得正丁醇提取物125.5 g。正丁醇提取物经硅胶柱色谱，用氯仿-甲醇-水(15:3:1～MeOH)溶剂体系梯度洗脱，得到6个组分(Fr.1～6)。Fr.3组分经中压ODS柱色谱，以甲醇-水(10:90 ～ 70:30)梯度洗脱，得到5个组分(Fr.3-1～5)。Fr.3-2经制备型HPLC，以甲醇-水(10:90)等度洗脱，得到化合物1、7。Fr.3-3经制备型HPLC，以甲醇-水(12:88)等度洗脱，得到化合物2。Fr.4组分经中压ODS柱色谱，以甲醇-水(10:90～70:30)梯度洗脱，得到6个组分(Fr.4-1～6)。Fr.4-2经制备型HPLC，以甲醇-水(25:75)等度洗脱得化合物4、5。Fr.4-3经制备型HPLC，以甲醇-水(22:78)等度洗脱得化合物6。Fr.4-4经制备型HPLC，以甲醇-水(25:75)等度洗脱得化合物3、8。

3 结构鉴定

3.1 化合物1

白色粉末，FAB-MS: m/z 339 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.02 (1H, d, J=1.4 Hz, H-3)，6.88 (1H, dd, J=8.2, 1.4 Hz, H-5)，7.13 (1H, d, J=8.2 Hz, H-6)，4.54 (2H, s, H-7)，3.86 (3H, s, OCH3)，4.87 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.45 (1H, dd, J=8.9, 8.3 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, overlapped, H-4′)，3.39(1H, overlapped, H-5′)，3.86 (1H, dd, J=11.7, 2.0 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=11.7, 4.8 Hz, H-6′b)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[2]，故鉴定该化合物为vanilloloside。

3.2 化合物2

白色粉末，FAB-MS: m/z 339 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.96 (1H, d, J=8.0 Hz, H-3)，6.98 (1H, dd, J=8.0, 1.5 Hz, H-4)，7.17 (1H, d, J=1.5 Hz, H-6)，4.51 (2H, s, H-7)，3.87 (3H, s, OCH3)，4.91 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.43 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, m, H-4′)，3.39(1H, m, H-5′)，3.83 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.67 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[2]，故鉴定该化合物为5-羟甲基-2-甲氧基-苯酚--D-葡萄糖苷。

3.3 化合物3

白色粉末，FAB-MS: m/z 337 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.18 (1H, d, J=8.3 Hz, H-3)，7.62 (1H, dd, J=8.3, 1.9 Hz, H-4)，7.66 (1H, d, J=1.9 Hz, H-6)，9.80 (1H, s, H-7)，3.95 (3H, s, OCH3)，5.00 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.45 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.46 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.38(1H, m, H-4′)，3.38(1H, overlapped, H-5′)，3.88 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[3]，故鉴定该化合物为4-甲氧基-苯甲醛-3-O--D-葡萄糖苷。

图1 化合物1～8的结构图

3.4 化合物4

白色粉末，FAB-MS: m/z 325 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.80 (1H, d, J=2.3 Hz, H-2), 6.58 (1H, dd, J=8.5, 2.3 Hz, H-5)，6.69 (1H, d, J=8.5 Hz, H-6), 3.82 (3H, s, OCH3)，4.74 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.43 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.47 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, overlapped, H-4′)，3.40(1H, overlapped, H-5′)，3.86 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[4]，故鉴定该化合物为tachioside。

表1 化合物1～8的13C-NMR数据(150 MHz，CD3OD)

3.5 化合物5

白色粉末，FAB-MS: m/z 325 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.01 (1H, d, J=8.9 Hz, H-3), 6.29 (1H, dd, J=8.9, 2.5 Hz, H-4)，6.46 (1H, d, J=2.5 Hz, H-5)，3.80 (3H, s, OCH3)，4.69 (1H, d, J=7.6 Hz, H-1′)，3.45 (1H, dd, J=8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.39(1H, m, H-4′)，3.39(1H, m, H-5′)，3.86 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.68 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[4]，故鉴定该化合物为isotachioside。

3.6 化合物6

白色粉末，FAB-MS: m/z 379 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.33 (1H, d, J=2.0 Hz, H-2)，7.18 (1H, dd, J=7.6, 2.0 Hz, H-5)，6.80 (1H, d, J=7.6 Hz, H-6)，7.63 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7)，6.47 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8)，3.89 (1H, s, OCH3)，5.46 (1H, d, J=8.0 Hz, H-1′)，3.43 (1H, dd, J = 8.9, 7.6 Hz, H-2′)，3.48 (1H, dd, J=8.9, 8.9 Hz, H-3′)，3.37(1H, overlapped, H-4′)，3.38(1H, overlapped, H-5′)，3.89 (1H, dd, J=12.0, 1.5 Hz, H-6′a)，3.66 (1H, dd, J=12.0, 4.0 Hz, H-6′b)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[5]，故鉴定该化合物为阿魏酸-4-O-β-D-葡萄糖苷。

3.7 化合物7

白色粉末，FAB-MS: m/z 203 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.03 (1H, d, J=1.8 Hz, H-2)，6.71 (1H, d, J=8.4 Hz, H-5)，6.92 (1H, dd, J=8.4, 1.8 Hz, H-6)，7.47 (1H, d, J=16.0 Hz, H-7)，6.20 (1H, d, J=16.0 Hz, H-8)。13C-NMR谱数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[6]，故鉴定该化合物为咖啡酸。

3.8 化合物8

白色粉末，FAB-MS: m/z 203 [M+Na]+。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.99 (H, d, J=8.0 Hz, H-2)，6.70(H, d, J=8.0 Hz, H-3)，6.99 (H, d, J=8.0 Hz, H-5)，6.70(H, d, J=8.0 Hz, H-6)，2.80 (2H, t, J=8.0 Hz, H-7)，2.55 (2H, t, J=80 Hz, H-8)，3.60 (3H, s, H-9)。数据见表1。以上数据与文献报道的数据一致[7]，故鉴定该化合物为对羟基苯丙酸甲酯。

[1] 王知斌,梁军,夏永刚,等.八仙花叶的化学成分及药理作用的研究进展[J].中医药信息,2012,29(5):114-116.

[2] Hideki K, Sayaka Y, Nobuo K, et al. Biotransformation of benzaldehyde-type and acetophenone-type derivatives by Pharbitis nil hairy roots[J]. Chemical & Pharmaceutical Bulletin,2005,53(4):361-365.

[3] Pauli GF, Kuczkowiak U, Nahrstedt. Solvent effects in the structure dereplication of caffeoyl quinic acids[J]. Magnetic Resonance in Chemistry,1999,37(11):827-836.

[4] Zhong XN, Hideaki O, Toshinori I, et al. Hydroquinone diglycoside acyl esters from the leaves ofMyrsine seguinii[J].Phytochemistry,1999,52(5):9237-927.

[5] 徐璐,李艳茸,李春,等.藏药甘青乌头化学成分研究[J].中国中药杂志,2013,38(17):2818-2824.

[6] 陶鑫,许枬,王秀兰,等.兴安毛连菜中有机酸化学成分及其抗氧化活性的研究[J].中国中药杂志,2013,38(17):2818-2824.

[7] Michael J.Pcolinski,Donal P.O’Mathuna,Modifiedlabdane diterpenes from Amphiachyris amoena[J].Journal of Natural Products,1995,58(2):209-216.

Separation and Structural Identification of Phenolic Acids from Hydrangea Macrophylla Leaves

CHEN Ya-jun, YU Ying, GAO Yan, BI Xue-yan, KUANG Hai-xue*

(KeyLaboratoryofChineseMateriaMedica(MinistryofEducation),HeilongjiangUniversityofChineseMedicine,HeilongjangKeyLaboratoryofTCMPharmacodynamicMaterialBases,Harbin150040,China)

Objective: To investigate the chemical constituents of the leaves of Hydrangea macrophylla. Methods: The chemical constituents were separated and purified by various isolation methods (silica gel, ODS and HPLC column chromatography), and their structures were determined by the analysis of spectral data (1H-NMR,13C-NMR and MS). Results: Eight compounds were obtained and elucidated as the following: vanilloloside (1), 5-hydroxymethyl-2-methoxy phenyl--D-glucopyranoside (2), 4-methoxy-benzaldehyde-3-O--D-glucopyranoside (3), tachioside (4), isotachioside (5), ferulic acid-4-O-β-D-glucoside(6), caffeic acid(7), methyl 3-(4-hydroxyphenyl)propionate (8).Conclusion:Compounds 1-3, 6-8 were isolated from Hydrangea macrophylla leaves for the first time.

Hydrangea macrophylla; Separation and purification; Structural identification; Phenolic acids

教育部博士点基金项目(No.20132327120002)；黑龙江中医药大学“优秀创新人才”支持项目(No.2012RCD05)；黑龙江中医药大学“杰出人才培养”基金项目(No.2012cj02)

陈亚军(1992-)，女，硕士研究生，主要研究方向：中药天然药物药效物质基础。

匡海学*(1955-)，男，教授，博士研究生导师，主要研究方向：中药及复方药效物质基础研究，中药性味理论。

2016-09-18

R284

A

1002-2406(2017)01-0010-03

修回日期：2016-10-01