农药残留快速检测方法及经验探讨

谭泽芬，刘绍莲

（永胜县农产品质量安全检测中心，云南 丽江 674200）

农药残留快速检测方法及经验探讨

谭泽芬，刘绍莲

（永胜县农产品质量安全检测中心，云南 丽江 674200）

通过介绍农药残留的快速检测方法，具体分析了不同检测环节对检验结果的影响，同时提出了在操作中遇到具体问题的处理方式以及注意事项，供参考借鉴。

农药残留；检测方法；经验

用农药残留速测仪检测农药残留，方便快捷、前处理简单、对检测人员要求低、操作简便且灵敏度高，便于农药残留检测部门开展快速检测工作。但目前速测仪厂家多、型号多，仅永胜县农产品质量安全检测中就有3个厂家的速测仪：PR-410型、海荭兴HHXSI-24NC以及CL-BIII型等。

但万变不离其宗，根据多年的工作经验，速测仪的原理相同，操作步骤大致一样，只是试剂、样品的取样量不同而已，快速检测技术有一定的技巧可循，掌握了这些方法，对农药残留快速检测工作就能透彻理解、准确操作，有效地做好快速检测工作，从而达到对农产品质量安全有效监管的目的。

1 检测范围

所有农药残留速测仪都只检测有机磷类和氨基甲酸酯类两类农药，因现阶段我国有机磷类和氨基甲酸酯类农药使用量约占95%以上，且在蔬菜和水果上使用最多，也是最容易引起中毒的两大类农药，是国家重点监控的目标，为此只要监管好这两类农药，就基本可避免食用蔬菜和水果中毒事件发生。

2 检测原理

乙酰胆碱酯酶（或丁酰胆碱酯酶）水解后，水解产物碘化硫代乙酰胆碱与显色剂二硫双硝基苯甲酸（DTNB）反应生成黄色物质，而有机磷类和氨基甲酸酯类农药可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性，使这种酶不能被水解或水解程度下降，从而无显色反应或黄色产物减少，用此判断有机磷类和氨基甲酸酯类农药是否存在。

在反应完成后，用分光光度计测定黄色产物随时间变化的吸光值，计算出抑制率，以此判断蔬菜和水果中含有机磷类和氨基甲酸酯类残留的情况。根据抑制率来判断检测结果，依据农药含量做出是否合格的判断。

抑制率（%）=△Ao-△At/△Ao×100%

式中：△Ao——对照液反应后吸光度的变化值；

△At——样品溶液反应后吸光度的变化值。

3 检测试剂的准备

3.1 缓冲液的配制

将缓冲试剂倒入烧杯中，加入规定量的娃哈哈纯净水或二级及以上的超纯水溶解，混匀即可。

3.2 底物

底物用规定量的缓冲液溶解。

3.3 酶和显色剂

如不是溶液，都要用规定量的配制好的缓冲液溶解后才可使用。

配制好的底物、酶及显色剂需放入冰箱冷藏（0～5℃）切勿冷冻结冰。配好的缓冲液常温保存即可。

4 空白对照及检测样品的制备

不同型号的仪器设备的农残速测仪，其空白对照及检测样品的制备顺序都相同，都是按酶—缓冲液（待测液）—显色剂—底物的顺序加入，不同的只是酶、显色剂及底物的取用量不同，样品的取样量不同而已。下面以海荭兴HHXSI－24NC速测仪为例来说明对照及样品的制备。

4.1 空白对照的制备

取酶100 μL于轧口瓶中（或者试管），加入缓冲液2.5 mL，再加入显色剂100 μL、底物20 μL，摇匀后立即倒入比色皿中，放入仪器指定通道，按操作进行测量。

4.2 检测样品的制备

称取2.0 g样品于三角瓶中，加入10 mL缓冲液（如称取4.0 g样品，则加入缓冲液20 mL），摇匀振荡1 min，稍静置后，倒出样液备测。取一轧口瓶（或试管），加入100 μL酶、2.5 mL待测液，混匀静置10 min，再加入显色剂100 μL、底物20 μL，摇匀后立即倒入比色皿中，放入仪器指定通道，按操作进行测量即可。

5 碰到的问题及处理

在检测中，时常碰到以下问题，可通过这些方法进行处理。

5.1 对照值偏小

仪器工作以前，应先预热5～10 min，使仪器状态稳定；其次，将显色剂和底物加入提取液后的时间严格控制，加入底物后应立即检测，尽量缩短操作时间。

5.2 样品吸光值偏高

这现象是由于酶本身活性低、样品待测液颜色深以及反应中化学和物理干扰所造成。解决办法：①将酶和其他试剂恢复至室温，酶用前要摇匀；②制样时样品切成见方为宜，不可过碎，以免色素、纤维素等成分释放。果实类蔬菜如西红柿等应避免汁水带入样品中导致试样混浊，烂叶、枯叶中的某些成分也会导致溶液混浊，干扰测定；③发现样品混浊时，适当增加静置时间，可消除上述不利影响的发生；④严格控制提取时间，时间过短不能有效提取蔬菜表面的农药残留，时间过长会把蔬菜中的色素提取。

5.3 检测结果中抑制率不正常

对照测试时间与样品测试时间相隔太久，导致对照与样品测试温度条件相差较大；其次，跟试剂的取用量是否准确有关。

5.4 辛辣蔬菜等农药残留假阳性问题

某些蔬菜如葱（含有挥发性硫化物）、姜（含有姜辣素）以及蒜类（含硫挥发物，如硫化亚磺酸）等，萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，会引起干扰产生假阳性。可采取增大样品切块，减少浸提时间的方法。

6 注意事项

6.1 移液枪要正确使用

移液枪使用的好坏，决定着试剂的取用量是否准确。使用时，吸头管要牢固装好，取样时只按压至第一停点，将吸头置于液面下，慢慢松开，千万不要按压到底取液，会导致取液量偏大。为避免损坏液枪，移液枪的移液量不能超出其范围，吸头内含有液体时不可将移液枪水平放置，不使用时，将量程调为最大。

6.2 酶试剂的保存及使用

平常要在0～5℃环境条件下冷藏保存，酶试剂使用前要晃均匀，即用即取，要防止其他物质的污染，以免溶液中毒失效。

6.3 试剂“只出不进”

每次测试时，从试剂瓶中抽取的试剂不管是否使用，只要吸出来了，用不上或用不了，即使造成浪费也不要打回去。否则容易污染整瓶试剂，造成更大的损失，甚至影响以后所有的测试，产生错误的测试数据。

1005-2690（2017）04-0124-02

：S481+.8

：A

2017-03-06）