甲状腺乳头状癌中VEGF、S100A4、Survivin的表达及其意义*

郭丽霞，兰竞丽，胡兆鹏，许湘萍，王献花，荣军

（江西省萍乡市人民医院1.病理科，2.普外科，江西萍乡337000）

甲状腺乳头状癌中VEGF、S100A4、Survivin的表达及其意义*

郭丽霞1，兰竞丽1，胡兆鹏1，许湘萍1，王献花1，荣军2

（江西省萍乡市人民医院1.病理科，2.普外科，江西萍乡337000）

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）、S100A4及Survivin蛋白在甲状腺乳头状癌（PTC）中的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学技术检测52例PTC患者手术病理标本中VEGF、S100A4与Survivin蛋白的表达情况，并根据临床分期及有无淋巴结转移进行分类统计。结果VEGF、S100A4及Survivin在PTC中的阳性表达率分别为80.77%，86.54%和75.00%，与其在正常甲状腺组织中的阳性表达率相比差异均具有统计学意义（P=0.000）；临床分期Ⅲ、Ⅳ期组和有淋巴结转移组中3者的阳性表达率分别显著高于Ⅰ、Ⅱ期组和无淋巴结转移组，差异有统计学意义（P<0.05）；3者在有淋巴结转移组中的表达以阳性和强阳性为主，在无淋巴结转移组中的表达以弱阳性和阳性为主；而且有淋巴结转移组中无一例3种蛋白同时弱阳性，无淋巴结转移组中无一例3种蛋白同时强阳性。结论VEGF、S100A4及Survivin与PTC侵袭转移密切相关，3者联合检测有助于预测PTC的侵袭转移倾向。

甲状腺乳头状癌；血管内皮生长因子；S100A4；Survivin

甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）是甲状腺癌中最常见的病理学类型[1]，具有相对良好的生物学特性，目前手术切除仍是其主要的临床治疗方法。然而即使是治疗性肿瘤切除，仍然有不少患者在生活后期会出现肿瘤的复发或转移，危害其生命健康。肿瘤的复发转移一般都由微浸润和微转移灶发展而来，微浸润和微转移灶的存在是影响患者预后和复发转移的重要因素。近期研究发现[2-4]，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、S100A4及生存素（Survivin）可能在恶性肿瘤的侵袭和转移中具有重要作用。本研究应用免疫组织化学技术对PTC中VEGF、S100A4与Survivin蛋白的表达进行检测，分析探讨PTC的侵袭转移及其影响因素，寻找与PTC侵袭转移有关的有效诊断指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集萍乡市人民医院2011～2015年经病理组织学检查确诊的PTC石蜡标本52例。平均年龄约50岁；男性23例，女性29例；有淋巴结转移者22例，无淋巴结转移者30例；临床分期Ⅰ、Ⅱ期30例，Ⅲ、Ⅳ期22例。对照组标本来自手术时切取甲状腺良性疾病病灶旁2 cm以上的正常组织，共28例，平均年龄约45岁；男性11例，女性17例。所有病例术前均未经放疗及化疗。

1.2 免疫组织化学染色与结果判定

1.2.1 试剂VEGF兔抗人单克隆抗体、Survivin兔抗人单克隆抗体，S100A4兔抗人多克隆抗体3种试剂均购自中杉（北京）生物科技公司，即用型PV-6000免疫组织化学检测试剂盒亦购自该公司。

1.2.2 方法病例标本均来源于手术切除标本，均用10%中性缓冲福尔马林固定液固定24 h，常规取材、脱水、石蜡包埋、4μm连续切片，置于56℃烤箱中烘烤12 h，用于免疫组织化学染色。采用通用型PV-6000免疫组织化学染色法，并结合抗体说明书进行操作。用已知的阳性组织作阳性对照；用PBS液代替一抗作空白对照。

图1 VEGF、S100A4及Survivin蛋白在PTC癌组织的表达情况（PV6000×200）

1.2.3 结果判定VEGF、S100A4以细胞胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞，Survivin以细胞胞浆或胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞，结合CHEUNG等[5]介绍的判定方法，每例在显微镜下随机观察5个高倍（×400）视野：显色细胞数<10%为阴性（-）；10%～25%为弱阳性（+）；26%～50%为阳性（++）；>50%为强阳性（+++）。

1.3 统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF、S100A4及Survivin在正常甲状腺组织与PTC组织中的表达

VEGF、S100A4及Survivin蛋白在正常甲状腺组织与PTC组织中的表达情况详见图1和表1。统计结果显示，PTC组与正常对照组中3者的阳性表达率差异均具有统计学意义（P<0.05）。

2.2 VEGF、S100A4和Survivin的表达与PTC临床分期及淋巴结转移的关系

VEGF、S100A4及Survivin在PTC组织的表达情况与临床分期及有无淋巴结转移的关系详见表2。PTC组织中3者阳性表达率均随着临床分期的升高而升高（P<0.05）；有淋巴结转移组PTC组织中3者的阳性表达率均较无淋巴结转移组升高（P< 0.05）。

表1 两组VEGF、S100A4及Survivin蛋白的表达%

表2 VEGF、S100A4及Survivin蛋白表达与PTC临床分期及淋巴结转移的关系

3 讨论

肿瘤侵袭转移需以有效的血液供应为基础，新生血管在恶性肿瘤的侵袭转移中起着非常重要的作用。VEGF是目前已知最强的一种促血管生长因子，其异常高表达与肿瘤的侵袭和转移密切相关，是决定肿瘤生物学行为的一个重要因素。研究表明，VEGF在乳腺癌、胃癌、结肠癌等恶性肿瘤中均有高表达，其表达水平的高低与肿瘤转移程度和预后呈正相关[2-6]。本研究中VEGF在PTC组织中的阳性表达率明显高于正常甲状腺组织（80.77%∶3.57%），且临床分期Ⅲ～Ⅳ期组及有淋巴结转移组的VEGF水平均分别明显高于Ⅰ、Ⅱ期组及无淋巴结转移组，与CHANG和GULUBOVA等[7-8]的研究结果相似，提示VEGF与PTC侵袭与转移密切相关。

S100A4是近年来发现的新的钙结合蛋白，可促进血管生成[9]，增强肿瘤细胞的侵袭和活动能力[3]。S100A4蛋白过表达与肠癌、乳腺癌、肾母细胞癌等恶性肿瘤的发生发展密切相关[10-12]，国内也有研究[13-14]表明与甲状腺癌的侵袭和转移有关。本研究结果显示，S100A4在PTC组织中阳性表达率明显高于正常组织的阳性表达率（86.54%∶7.14%），且临床分期高组及有淋巴结转移组的S100A4阳性表达率分别明显高于临床分期低组及无淋巴结转移组的S100A4阳性表达率，提示S100A4蛋白的高表达与PTC的浸润和转移密切相关，与上述研究结果基本一致，但S100A4阳性表达率稍高于其他研究者的研究结果，这可能与本研究的标本来源及标本数量存在差异有关。

Survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员，在多种恶性肿瘤如胃癌、肝癌、乳腺癌等的癌组织中均可检测到Survivin的高表达[4，15]，而在正常组织几乎不表达。研究表明[16-18]，Survivin的表达同甲状腺癌的临床分期、肿瘤包膜完整情况及颈部淋巴结转移等具有相关性。本研究结果提示，Survivin蛋白表达在PTC组织中阳性表达率明显高于正常组织的阳性表达率（75.00%∶14.29%），且与临床分期高组及有淋巴结转移组的Survivin蛋白阳性表达率分别明显高于临床分期低组及无淋巴结转移组的Survivin蛋白阳性表达率，提示Survivin与PTC的临床分期和淋巴结转移密切相关，与SELEMETJEV[19]等的研究结果基本一致。

甲状腺癌侵袭转移研究到目前为止，尚未有一个肿瘤分子标志物能够达到其理想的敏感性和特异性，多个分子标志物联合检测是提高其理想程度的一种有效方法。本研究中发现PTC有淋巴结转移组中VEGF、S100A4与Survivin的表达均以阳性和强阳性为主，无淋巴结转移组均以弱阳性和阳性为主；而且有淋巴结转移组中无一例3种蛋白同时弱阳性，而无淋巴结转移组中无一例3种蛋白均为强阳性；由此推测，对于PTC侵袭转移的预测，联合应用VEGF、S100A4与Survivin 3种蛋白比应用单个蛋白更具有价值，尤其是3种蛋白均为强阳性时，更加支持PTC的高侵袭性和转移性。基于蛋白水平的时间迟滞性，研究人员将从基因水平进行下一步的研究以更好地完善这一结论。

[1]CHEN A S,JEMAL A,WARD E M.Increasing incidence of differentiated thyroid cancer in the United States,1988-2005[J]. Cancer 2009,115(16):3801-3807.

[2]LIU H,JIANG Y,DAI Q,et al.Peripheral enhancement of breast cancers on contrast-enhanced ultrasound:Correlation with microvessel density and vascular endothelial growth factor expression[J].Ultrasound in Medicine and Biology,2014,40(2): 293-299.

[3]OCHIYA T,TAKENAGA K,ENDO H,et al.Silencing of S100A4,a metastasis-associated protein,in endothelial cells in-hibits tumor angiogenesis and growth[J].Angiogenesis,2014,17 (1):17-26.

[4]GÖRGÜN D,SEÇIK F,MIDILLI K,et al.Diagnostic and prognostic significance of survivin levels in malignant pleural effusion [J].Respir Med,2013,107(8):1260-1265.

[5]CHEUNG C C,EZZAT S,FREEMAN J L,et al.Immunohistochemical diagnosis of papillary thyroid carcinoma[J].Mod Pathol, 2001,14(4):338-342.

[6]穆桂芳,穆雪峰,毕海静,等.VEGF和突变型p53在胃癌组织表达及意义[J].中国免疫学杂志,2016,32(1):90-91.

[7]CHANG D F,XU Z Q,SUN B.Retraction Note to:Relationship between VEGF protin expression and lymph node metastasis inpapillary thyroid carcinoma among Asians:a meta-analysis[J]. Tumour Biol,2015,36(9):7305.

[8]GULUBOVA M,IVANOVA K,ANANIEV J,et al.VEGF expression,microvessel density and dendritic cell decrease in thyroid cancer[J].Biotechnol Biotechnol Equip,2014,28(3):508-517.

[9]WANG D,ZHANG J,LIU Z,et al.Functional expression,characterization and application of the human S100A4 protein[J].Mol Med Rep,2015,11(1):175-181.

[10]JIN R,SPENCER K,JOON Y C,et al.S100A4 expression is a prognostic indicator in small intestine adenocarcinoma[J]. Journal of Clinical Pathology,2014,67(3):216-221.

[11]WANG L,WANG X,LIANG Y,et al.S100A4 promotes invasion and angiogenesis in breast cancer MDA-MB-231 cells by upregulating matrix metalloproteinase-13[J].Acta Biochim Pol, 2012,59(4):593-598.

[12]LI HJ,CHEN YX,WANG Q,et al.S100A4 mRNA as a prognostic marker and therapeutic target in Wilms tumor(WT)[J]. Eur Rev Med Pharmacol Sci,2014,18(6):817-827.

[13]侯继院,刘兴安,单国用,等.S100A4调节MMP-13表达对甲状腺癌细胞侵袭能力的影响[J].中华肿瘤防治杂志,2015(7): 514-518.

[14]孙思敬,路忠志,李敏.S100A4和STAT3基因在甲状腺乳头状癌组织中的表达及意义[J].中国现代普通外科进展,2015,18(10): 780-783.

[15]LI Y,ZHOU Y,ZHENG J,et al.Downregulation of survivin inhibits proliferation and migration of human gastric carcinoma cells[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(2):1731-1736.

[16]吴泽建,谢楚平,蒋基令,等.甲状腺癌中survivin与VEGF因子的表达及其临床意义[J].中国现代医学杂志,2011,21(10):1158-1160.

[17]CHEN Z X,LIU N X,ZHU G B,et al.Targeting of the anti-apoptotic gene survivin in human thyroid carcinoma[J].Int J Mol Med,2012,30(3):465-472.

[18]LI J Y,SHI J,SANG J F,et al.Role of survivin in the pathogenesis of papillary thyroid carcinoma[J].Genet Mol Res, 2015,14(4):15102-15111.

[19]SELEMETJEV S,DENCIC T I,MARECKO I,et al.Evaluation of survivin expression and its prognostic value in papillary thyroid carcinoma[J].Pathol Res Pract,2013,210(1):30-34.

（张西倩编辑）

Expression of VEGF,S100A4 and Survivin in papillary thyroid carcinoma and clinical significance*

Li-xia Guo1,Jing-li Lan1,Zhao-peng Hu1,Xiang-ping Xu1,Xian-huaWang1,Jun Rong2
(1.Departmentof pathology,2.General Surgery,Pingxiang people's hospital, Pingxiang,Jiangxi 337000,China)

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of VEGF,S100A4 and survivin in papillary thyroid carcinoma(PTC).MethodsThe expressions of VEGF,S100A4 and survivin in normal thyroid tissues from 28 people and in PTC tissues from 52 inpatients were detect by immunohistochcmistrymethod.ResultsCorrelated with normal thyroid tissues,the VEGF,S100A4 and survivin positive rate in PTC(80.77%,86.54%and 75.00%)was increased(P=0.000).And the positive expression rate in PTC was associated with lymph node metastasis and clinical stage(P＜0.05).Expressions of them in lymphoid metastatic group were primarily positive or strongly positive,which were mainly weakly positive or positive in non-metastasis group.And none was weakly positive at the same time in lymphoid metastatic group,and none strongly positive simultaneously in non-metastasis group neither.ConclusionsVEGF,S100A4 and Survivin are closely related to the aggressive and metastatic character of PTC.A combination of them may have significance for predicting the invasion and metastasis of PTC.

papillary thyroid carcinoma;VEGF;S100A4;Survivin

R 736.1

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.24.014

1005-8982（2016）24-0062-04

2016-02-21

萍乡市科技局指导性科技计划项目（No：2015NO17）