窄谱中波紫外线耐受白癜风皮损区SCF、IL—6表达的临床研究

罗光浦

【摘要】目的：探讨窄谱中波紫外线（NarrowBandUltraviolet，NB-UVB）对白癜风患者皮损内SCF及IL-6的影响。方法：选取30例白癜风患者，应用ELISA、RT-PCR等方法测定在窄谱中波紫外线治疗前A1组（未经照射组）及治疗后A2组（显效期皮损组）、A3组（平台期皮损组）SCF及IL-5含量及角质形成细胞SCF mRNA及IL-5 mRNA的表达量。同时测定正常皮肤对照组SCF及IL-6含量及角质形成细胞SCF mRNA及IL-6 mRNA的表达量。结果：A1组与正常皮肤对照组相比，IL-6及IL-6mRNA平均水平明显降低，SCF及SCFmRNA平均水平明显偏高。窄谱紫外线照射2 0次后，A 3组与正常皮肤对照组相比，IL-6及IL-6mRNA平均水平差异无统计学意义，SCF及SCFmRNA平均水平差异无统计学意义。窄谱紫外线照射2 0次及1 0次后，A 3组与A2组相比，IL-6及IL-6mRNA平均水平升高，差异有统计学意义（P<0.05），SCF及SCFmRNA平均水平下降，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：IL-6在经UVB照射1 0次及2 0次后逐步恢复至正常水平，可能是UVB治疗白癜风的机制之一。SCF在经UVB照射20次后其含量下降，可能是白癜风患者进入平台期的原因之一。

【关键词】NB-UVB；白癜风；SCF；IL-6

窄谱中波紫外线在皮肤科对多种疾病的治疗均有较为显著的效果，尤其在治疗白癜风时，受到皮肤科医生的青睐。既往研究证实，窄谱中波紫外线可刺激KC产生细胞因子如SCF、IL-6等，并以旁分泌作用的方式诱导Mc的黑素生成。

1资料与方法

1.1一般资料

入选的30例患者均来自我科2014年3月至2016年1月就诊的白癜风患者。男17例，女13例（年龄15-45岁），平均（27.7±2.8）岁。病程6个月至11年。平均（4.12±3.16）年。选取10个健康人作为对照组。所有参加者均知情同意，治疗方案经本院伦理委员会讨论通过。

1.2方法

1.2.1皮损选择及干预措施

每名患者的腹部皮损均选三处：分别标记为A1组（未经照射组）、A2组（显效期皮损组）、A3组（平台期皮损组）或选取一个皮损分为3处：分别标记为A1组（A1在行照射治疗前进行遮盖）、A2组、A3组。A1组皮损不进行照射，A2组皮损照射治疗10次，A3组皮损照射治疗20次。另选10个健康人作为正常皮肤对照组，男6名，女4名，年龄23-39岁，平均25.88±5.32岁。根据患者最小红斑量值，设立起始照射量，A2组、A3组皮损起始照射剂量、照射间隔时间、每次照射剂量增幅均相同。采用德国Waldmann（沃曼1公司的UV1001KLNB-UVB皮肤病治疗系统，所有患者单纯接受311nnmUVB，隔日照射。如再次照射时出现轻度红斑、瘙痒，照射剂量不变，直至症状消失。如有疼痛性红斑、水疱，待皮损消失后再进行皮损照射，照射剂量减少0.1J/cm2。

1.2.2负压吸引发疱提取疱液

A1组：采用BY--1I型皮肤分离仪负压吸引发疱，受皮区选择健康腹部皮肤，白斑区和供皮区先用75%乙醇消毒后同时发疱。负压设定为50 kPa，温度设定为50℃，完整、饱满的水疱形成后，用1mL灭菌注射器分别收集两处疱液（弃去血性疱液1，置-70℃冰箱；应用眼科剪，剪取疱壁，备用。正常皮肤对照组发疱方法同上。

A2区：选择目前正处于复色良好的显效期皮损（连续4次之内明显复色者），采用以上1步完全相同的负压、温度等条件，获取疱液及疱壁，备用。

A3区：选择平台期皮损（已连续8次以上复色无进展的），采用以上1步完全相同的负压、温度等条件，获取疱液及疱壁，备用。

1.2.3实验方法

应用双抗夹心ELISA方法，检测正常皮肤对照组及A1组、A2组、A3组SCF及IL-6含量。

1.2.4引物设计

应用RT-PCR技术分别检测正常皮肤对照组、A1组、A2组、A3组角质形成细胞SCF及IL-6 mRNA的表达量；用超纯RNA提取试剂盒提取组织样本中总RNA。实验操作按产品说明书进行。采用PCR仪进行扩增，引物序列如下：SCF引物：上游引物：5′-GATGTTTTGECAAGTCATTGTTGG-3′。下游引物：5′-AETGAETETGGAATETTTETEAGG-3′。IL-6引物：上游引物：5′-GAGACGCCTTGAAGTAACTG-3′。下游引物：5′-AACCAAAGATGTTCTGAACTGA-3′。

1.2.5统计学方法

应用SPSS 13.0软件对实验数据进行处理。采用配对样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1 A1、A2、A3组与正常皮肤IL-6、SCF的表达比较结果

见表1。

2.2 A1、A2、A3组与正常皮肤，IL-6mlKNA及SCFmRNA比较结果

见表2。

3讨论

有研究表明，多数学者认为除节段型白癜风外，白癜风的发生与自身免疫密切相关，而角质形成细胞（KC，keratinocyte）在其中起到了关键作用。KC通过释放细胞因子调节MC细胞的生长、分化、增殖、凋亡及黑素的产生及转运。既往研究表明，IL-6作为KC分泌的重要细胞因子，与白癜风的发生密切相关。我们的研究发现白癜风未照射区皮损内IL-6及IL-6mRNA与正常皮肤对照组相比明显降低，提示其降低可能与KC功能受损有关，与Tu等的研究相反。白癜风未照射区皮损内SCF及SCFmRNA与正常皮肤对照组相比明显升高，与Kitamura等研究一致。

NB-UVB照射能促进KC分泌多种细胞因子，并诱导T细胞凋亡、抑制前炎症因子的释放，通过影响细胞因子的相互作用调节表皮黑素细胞的功能，促进黑色素生成。我们的研究发现，经NB-UVB照射10次、20次后，白癜风皮损内IL-6及IL-6mRNA持续升高，基本接近正常水平，可能为NB-UVB照射治疗白癜风的机制之一。这与Eberlein-KonigB等通过体外实验研究UVB对人类鳞癌细胞分泌IL-6的实验结果基本一致。但目前KC分泌IL-6的机制尚不清楚，有待进一步研究。

窄谱紫外线照射20次及10次后，白癜风皮损内SCF及SCFmRNA平均水平下降，是否由于UVB照射治疗使部分KC凋亡，因而导致SCF及SCFmRNA表达平均水平降低尚有待于进一步研究。SCF与MC关系密切，在经UVB照射20次后其水平的下降可能影响MC增殖与迁移，这可能是白癜风皮损进入平台期的原因之一。