早产患者宫颈长度超声检测与血清IL-18水平的关系研究

杨 敏，牛铭钢

（1.吉林农业科技学院，吉林吉林，132001；2.哈尔滨和美妇产医院，黑龙江哈尔滨，150040）

早产患者宫颈长度超声检测与血清IL-18水平的关系研究

杨 敏1，牛铭钢2

（1.吉林农业科技学院，吉林吉林，132001；2.哈尔滨和美妇产医院，黑龙江哈尔滨，150040）

检测早产患者在会阴超声下宫颈长度及IL-18在早产患者外周血清中的水平表达，并探讨二者与早产的关系，评价其预测早产的可行性。结果表明：（1）经会阴超声测量宫颈长度可作为预测早产的可行性指标，其预测早产的警戒值为宫颈长度＜3.0cm。（2）早产组孕妇血清IL-18水平较正常组孕妇显著升高，IL-18有助于早产的预测，有望成为早产预测的一种辅助性指标。经会阴超声宫颈长度测量和血清IL-18水平的联合应用对早产具有一定的预测价值。对预测早产、提高早产的诊断率，具有一定的指导意义。

早产；彩色多普勒超声；会阴超声；酶联免疫吸附试验；宫颈长度；IL-18

早产（premature delivery）作为围生医学中的一个重要、常见而又复杂的妊娠并发症,目前已经成为一个世界性的卫生问题，原因在于其发病率、死亡率和后遗症较足月者有较显著的升高［1］。关于早产，世界卫生组织将其定义为在37孕周前或者＜259d终止者，在我国目前是指自末次月经第一日开始计算,妊娠满28周但不满37周之间分娩者称为早产，在中医来讲早产先兆或胎动而未产，一般认为属中医的胎动不安。如孕胎已形成而堕者中医称为“小产”或“半产。

目前早产的预测指标除了较常用的物理指标以为还有生化指标和免疫指标。物理指标中超声测量宫颈长度对有早产征象的孕妇发生早产有一定预测意义,其中经会阴超声测量方法准确,成功率高,是值得推广的一种测量方法。在免疫指标中近年研究发现辅助T细胞(Th细胞)在妊娠免疫中发挥重要作用。最新研究发现先兆早产时IL-18也异常增高，推测可以用白介素18预测早产。本试验以国内外最新的研究成果为基准，拟采用经会阴超声技术检测宫颈长度的方法联合酶联免疫吸附试验法(enzymelinkedimmunoadsordentassay，ELISA)检测早产患者外周血清中IL-18水平，探讨其变化规律、掌握其与早产之间的关系。

1 超声测宫颈长度与早产的关系研究

1.1 实验资料

选择2014年12月一2015年12月在哈尔滨红十字中心医院诊治的有早产症状的患者35例，年龄19～39岁，平均年龄（28.2±5.6）岁。孕周28～36周，平均孕周（32.4±2.5）周。同时选取同期来本院就诊的正常妊娠妇女30例作为对照组，年龄20～39岁，平均年龄（27.7±5.3）岁，孕周28～36周，平均孕周（32.1±2.6）周。两组孕妇年龄、孕周差异比较,无统计学意义(P＞0.05)。早产组入选标准，(1)孕周28一36+6周;(2)规律宫缩，宫缩≥2次/10分，每次宫缩持续30秒;(3)宫颈扩张＜30mm;(4)胎膜完整或胎膜早破;(5)测试前未使用任何药物;（6）孕周末次月经日期确定，如未确定选择超声估计的孕周。其中因发生合并医源性早产或剖宫产者5例，不纳入统计。诊断标准参照乐杰主编，全国高等医学院校统编教材《妇产科学》（第7版）。早产：早产的主要临床表现是子宫收缩，最初为不规律宫缩，常伴有少许阴道流血或血性分泌物，以后可发展为规律宫缩，其过程与足月临产相似，胎膜早破较足月临产多。宫颈管先逐渐消退，然后扩张，妊娠满28周至不足37周出现至少10min一次的规则宫缩 （20min≥4次，持续≥30s），伴宫颈短缩≥75%，宫颈扩张2cm以上，诊断为早产临产，部分患者可伴有少量阴道流血或阴道流液，以往有晚期流产、早产及产伤史的孕妇容易发生早产。诊断早产并不困难，但应与妊娠晚期出现的生理性子宫收缩相区别。生理性子宫收缩一般不规则、无痛感，且不伴有宫颈管消退和宫口扩张等改变。

1.2 检测方法

1.2.1 仪器

德国西门子公司Acuson.Sequoia512型彩色多普勒超声诊断仪

1.2.2 经会阴超声检查宫颈方法

嘱患者排空膀胱取截石位,将保护膜覆盖在涂有耦合剂的探头上,大腿充分外展,经会阴前区扫查,将探头以矢状位置置于大阴唇之间、尿道口和阴道口之间,进行矢状扫查。经会阴后区扫查,将探头以矢状位置置于肛门口和阴道口之间。置于大小阴唇之间,超声扫描显示宫颈内口、外口和先露部最低点,准确记录宫颈长度(内外口间距),内口宽度、宫颈回声强度、位置、先露部距阴道口距离。

1.3 统计学方法

应用SPSS17.0中文统计软件进行统计，计量资料数据结果以均数与标准差（±s）表示，差异显著性用配对样本T检验进行测量，以α＝0.05为检验水准，若P＜0.05则此数据有显著性差异，P＞0.05则无显著性差异。

1.4 结果（见表1）

表1 各组孕妇超声下宫颈长度的比较（±s）

表1 各组孕妇超声下宫颈长度的比较（±s）

组别 例数 宫颈长度(mm)正常组早产组 30 30 34.87±3.31 23.90±3.53

从表中可以看出： 正常组平均宫颈管长度为(34.87±3.31)mm，早产组平均宫颈管长度为(23.90 ±3.53)mm，与正常组相比显著变短(P＜0.001)。如图1～图4所示。

图1、2：正常妊娠组宫颈长度超声图（妊娠28+3周右，妊娠35+3周左）

图3、4：早产组宫颈长度超声图（妊娠29+1周左，妊娠35+3周右）

2 血清IL-18水平与早产的关系研究

2.1 实验资料

2.1.1 研究对象

选择2014年12月一2015年12月在哈尔滨红十字中心医院诊治的有早产症状的患者35例，年龄19～39岁，平均年龄（28.2±5.6）岁。孕周28～36周，平均孕周（32.4±2.5）周。其中因发生合并医源性早产或剖宫产者5例，不纳入统计。选取同期在本院妇产科产检的正常妊娠妇女30例为对照组，年龄22～37岁，平均年龄（27.7±5.3）岁，孕周28～36周，平均孕周（32.1±2.6）周。两组孕妇年龄、孕周差异比较无统计学意义(P＞0.05)。诊断标准参照乐杰主编，全国高等医学院校统编教材《妇产科学》（第7版）。

2.2 实验方法及原理

本实验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法对早产患者和正常妊娠孕妇外周血中的IL-18浓度进行测定。试剂盒由上海心语科技有限公司提供，在2-8℃的温度下保存。板内、间变异系数均＜10%。本试剂盒通过人白细胞介素-18（IL-18）为标本采用双抗体夹心法测定其水平。用纯化的人IL-18抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加IL-18，再与HRP标记的IL-18抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-18呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中IL-18浓度。

2.3 实验器材

热恒温水浴箱，型号：HH.W21.600（上海跃进医疗器械厂）；低速离心机，型号：LD5-2A（北京雷勃尔有限公司）；AP-960全自动酶标仪（日本东曹公司）；-80℃冰箱，4℃冰箱（SANYO）；10μl、50μl、100μl、500μl、1000μl精密移液器 （Eppendorf公司）；吸水纸：量筒：蒸馏水。

2.4 实验操作

2.4.1 实验准备

实验前将血清样本从-80℃冰箱中取出，置于室温下解冻至完全溶解。实验前30min将试剂盒从冰箱中取出，以平衡至室温，再进行测定。严格按照试剂盒的说明于实验前将标准品振荡混匀，进行倍比稀释。标本用标本稀释液1：1稀释。洗涤液：蒸馏水50倍稀释。

2.4.2 实验具体步骤

1）加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在空白孔中加入样品稀释液50μl，其余孔分别加标准品和待测样品50μl，立即加入50μl的生物素标记的抗体。避免产生气泡，将样品加在酶标板底部，避免触及孔壁。用封板膜封板后轻轻振荡混匀，37℃温育60min。

2）弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。

3）每孔加入60μl的亲和链酶素-HRP，空白孔除外。轻轻振荡混匀，37℃温育30min。

4）弃去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。

5）依序每孔加底物A液50μl，再加入底物B液50μl，轻轻振荡混匀，37℃避光温育10min。

6）取出酶标板，迅速依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立即转为黄色。

⑺.用酶标仪在450nm波长处依序测量各孔的OD值，在加终止液后15min之内进行检测。

2.5 计算血清中IL-18浓度

横坐标设定为标准物的浓度，纵坐标为OD值，绘出标准的曲线，由标准曲线查出相应的浓度依据样品算出的OD值；用稀释倍数加以相乘。

2.6 统计学处理

应用SPSS17.0中文统计软件进行统计，计量资料数据结果以均数与标准差（±s）表示，差异显著性用配对样本T检验进行测量，以α=0.05为检验水准，若P＜0.05则此数据有显著性差异，P＞0.05则无显著性差异。

2.7 实验结果（表2）

表2 各组孕妇血清中IL-18水平比较（±s）

表2 各组孕妇血清中IL-18水平比较（±s）

组别 例数 IL-18(ng/L)正常组 30 5.60±1.47早产组 30 15.06±3.85

从表中可以看出：早产患者外周血清中IL-18水平与正常组相比较，早产患者外周血清值IL-18明显高于正常妊娠组；正常组孕妇血清IL-18水平是5.60± 1.47ng/L，而早产组血清IL-18水平为15.06±3.85ng/L，两者相比较有极显著性差异（P＜0.01）。

3 早产患者会阴超声下宫颈长度与血清IL-18的相关性研究

在服从正态分布经会阴超声下测宫颈长度和血清IL-18的情况下，分析二者的相关性采用Pearson相关分析。结果研究给出早产组会阴超声下宫颈长度与血清IL-18水平之间关系，r=-0.114,P＞0.05。绝对值中相关系数越大，相关性越强，越接近于1或-1，相关度越强，越接近于0，相关度越弱。

通常情况下通过以下取值范围判断变量的相关强度：相关系数0.8-1.0极强相关，0.6-0.8强相关，0.4-0.6中等程度相关，0.2-0.4弱相关，0.0-0.2极弱相关或无相关。在这里看来早产组会阴超声下宫颈长度与血清IL-18水平经研究有极弱相关关或无相关，因本研究样本量较小，所得出的结论以及超声下宫颈长度与外周血IL-18水平值之间的相互关系，尚有待大样本研究的进一步证实。将超声测量宫颈长度与早产患者外周血清IL-18的检测相结合，将有助于进一步阐明早产发生、发展的病理生理机制；同时也为早产的预测提供了一种新的思路。

4 结论

1）经会阴超声宫颈长度测量可作为预测早产的一种预测指标，具备可行性，其预测早产的警戒值为宫颈长度<3.0cm。

2）早产组孕妇血清IL-18水平较正常组孕妇显著升高，其有助于早产的预测，有望成为早产预测的一种辅助性指标。

3）经会阴超声宫颈长度测量和血清IL-18水平的联合应用对早产具有一定的预测价值。对预测早产、提高早产的诊断率，具有一定的指导意义。

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