柞蚕败血病致病菌赛氏杆菌对柞蚕幼虫及成虫感染试验

2017-01-09 06:23赫英姿刘孝良于庭洪左玲玲
北方蚕业 2016年4期
关键词:经口柞蚕菌液

赫英姿 刘孝良 于庭洪 贾 姝 赵 翀 左玲玲 宋 策

(辽宁省蚕业科学研究所,辽宁凤凰蚕药专业技术创新平台,辽宁省野蚕研究重点实验室,辽宁凤城 118100)

柞蚕败血病致病菌赛氏杆菌对柞蚕幼虫及成虫感染试验

赫英姿 刘孝良 于庭洪 贾 姝 赵 翀 左玲玲 宋 策*

(辽宁省蚕业科学研究所,辽宁凤凰蚕药专业技术创新平台,辽宁省野蚕研究重点实验室,辽宁凤城 118100)

柞蚕败血病在室内养蚕试验中时常发生,尤其是赛氏杆菌感染致死蚕(蛾)呈现鲜艳的玫瑰红色而容易辨别。通过试验表明:赛氏杆菌在柞蚕幼虫之间主要是通过体表抓伤传染,在蛾体也是以体壁创伤的方式感病较重。

柞蚕幼虫 柞蚕蛾 经口添食 经皮注射 感染 赛氏杆菌

在柞蚕室内试验中,常常由于饲养环境密闭,蚕群密度较大而大量发生柞蚕败血病,成为影响试验结果的一大因素。柞蚕幼虫和成虫原发性败血病(细菌直接从蚕的体壁伤口侵入血淋巴内而引起发病)和继发性败血病(败血病菌在蚕消食管内繁殖,是否发病由蚕发育状况决定)[1]的发病率究竟怎样目前还未见报道。下面仅以赛氏杆菌感染为例作一研究。

1 材料与方法

1.1 材料

试验柞蚕成虫:本所二化一放课题组抗大品种母蛾。

试验蚕: 本课题组抗大x9906杂交种卵所孵化幼虫。

赛氏杆菌病原菌为本课题组保存。

1.2 方法

1.2.1 赛氏杆菌菌悬液制备

培养基配方:氯化钠0.5%,牛肉膏0.5%,蛋白胨1%,琼脂2%,pH7~7.2。 每支试管加注5 mL培养基,摆成斜面,接菌备用。取若干支菌管,刮下斜面菌落,每管加无菌水10 mL,收集到三角瓶中震荡备用。

1.2.2 对柞蚕幼虫感染试验

春柞蚕种卵消毒,收蚁,饲养至二眠起即三龄蚕。

1)经口添食。每瓶1头蚕,共30头蚕。另设清水对照。选取大小均匀的30片叶片,用棉球蘸取制备好的赛氏杆菌的菌液涂布叶片,以叶片涂满为度,阴干。另取新鲜叶片用作对照。试蚕饥饿半天后统一饲喂。24 h后除沙,换新鲜叶片。

2)经皮注射。取30头三龄柞蚕,每养虫瓶1头,用微量进样器每头注射5微升上述菌液,另有30头注射无菌水作为对照。

1.2.3 对柞蚕成虫的感染试验

1)空气喷洒菌液。取30头二化一放抗大品种母蛾,每养虫瓶装入1头,然后装入一个纸箱,用小喷壶在箱内喷洒菌液,然后盖上纸箱口。设喷清水对照。

2)蛾体注射菌液。取30头母蛾,每蛾用微量进样器注射5微升上述菌液,另取30头注射无菌水作为对照。室温23~30℃。

2 结果

2.1 幼虫感染结果

幼虫经口添食赛氏杆菌,5天后,有3头蚕发生败血病,体色微红,至第十天另有3头发病,清水对照始终没有发病。结果见表1。

幼虫经皮注射赛氏杆菌,次日,处理和对照各有两头死蚕,至第三日处理死蚕体色变成粉红色,对照死蚕体色不变。第三天处理区80%蚕死亡且体色发红,为赛氏杆菌感染所致,对照没有发病。结果见表2。

表1 赛氏杆菌对柞蚕三龄幼虫经口添食感染情况

表2 赛氏杆菌对柞蚕三龄幼虫经皮注射感染情况

2.2 成虫感染结果

成虫喷洒赛氏杆菌,5天后蛾大部分死亡,蛾肚干涸,颜色不变或为黑色。对照蛾死亡,蛾肚干涸,颜色不变。结果见表3。

成虫经皮注射赛氏杆菌5微升,5天后均发病,蛾肚环节露出粉红色,掰开蛾肚呈现粉红色脂肪。对照蛾大部分死亡,但蛾肚为黑色或不变色。结果见表4(说明:柞蚕成虫的自然寿命是7 d左右)。

表3 赛氏杆菌喷洒蛾体感染情况

表4 赛氏杆菌注射蛾体感染情况

3 结论

3.1 通常发生在柞蚕幼虫和成虫期的柞蚕败血病,以细菌经体壁伤口侵入而引起的原发性感染发病为重。以赛氏杆菌为例,三龄幼虫经口添食,10天的发病率为20%;经皮注射,3天的发病率达到80%。成虫空气喷洒菌液,至一周左右死亡,处理区与对照死亡症状相同,解剖后没有出现特有的粉红色脂肪,为自然死亡;经皮注射,5天后处理区全部发病,蛾肚呈现粉红色,为赛氏杆菌致死,对照死亡蛾体不变色或为黑色。

3.2 柞蚕在饲养过程中要经过3至4次的移蚕,在装筐时密度大,蚕很容易抓伤,这时如果空气中或蚕具上携带有败血病致病菌,就很容易感染败血病。尤其是室内养蚕试验,蚕群密度大,蚕体抓伤后很容易感染败血病菌,从而给试验结果带来影响。而经口感染败血病的几率不大[2]。

3.3 柞蚕制种工作中由于抓蛾不及时导致蛾体相互抓伤,伤口若感染败血病菌,发病率高达100%。

3.4 由于柞蚕幼虫、成虫原发性感染赛氏杆菌病原菌的发病率均较高(80%以上),因此考察赛氏杆菌的稳定性及理化灭菌方法成为了我们的工作目标之一[3]。

[1] 李树英,秦利.柞蚕病理学[M].沈阳:辽宁科学技术出版社,2015:124-127.

[2] 秦利.中国柞蚕学[M].北京:中国科学文化出版社,2003:559-561.

[3] 宿桂梅,赫英姿,刘孝良,等.几种常见物理灭菌方法对柞蚕链球菌的灭活作用[J].蚕业科学,2015,41(2):387-390.

Experiment on Infection of Serratia marcescens Bizio Tussah Septicemia Pathogeny for Tussah’s Larva and Adult Worm

HE Yingzi,LIU Xiaoliang,YU Tinghong,JIA Shu,ZHAO Chong,ZUO Lingling,SONG Ce*

(Liaoning Institute of Sericultural Sciences,Liaoning Phoenix Professional and Technical Innovation Platform for Tussah Silkworm Medicine,Key Lab on Wild silkworm Research of Liaoning Province,118100, Fengcheng, Liaoning, China)

Tussah septicemia often occurs in indoor test, especially caused by Serratia marcescens Bizio infection which is easily identified because of the rosy color of dead worms (moths). The test indicated that Serratia marcescens Bizio affected larva by body surface scratch and adult by serious body wall trauma.

tussah larva; tussah adult; per os feeding; percutaneous injection; affect; Serratia marcescens Bizio

* 资助项目:现代农业产业技术体系建设专项(CARS-22);辽宁省科技厅项目(2012201024-6-1)

赫英姿(1973—),女,大学本科,副研究员。

宋策(1966—),男,硕士,研究员。E-mail:songce@163.com

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