癌组织TTF-1、CK7及p63蛋白检测对不同病理类型NSCLC的鉴别诊断价值

王建国，史春云，王建飞，曹丽，钟理

(1河北大学附属医院，河北保定071000；2保定市儿童医院；3河北大学生命科学院)



癌组织TTF-1、CK7及p63蛋白检测对不同病理类型NSCLC的鉴别诊断价值

王建国1，史春云2，王建飞3，曹丽3，钟理3

(1河北大学附属医院，河北保定071000；2保定市儿童医院；3河北大学生命科学院)

目的 探讨癌组织甲状腺转录因子1(TTF-1)、细胞角蛋白7(CK7)及p63蛋白检测对不同病理类型非小细胞肺癌(NSCLC)的鉴别诊断价值。方法 收集NSCLC组织标本106例份,106例患者中鳞癌39例、腺癌56例、腺鳞细胞癌11例，采用免疫组化SP法检测诊断TTF-1、CK7及p63蛋白在NSCLC组织中的表达，并分析其与临床病理特征的关系。计算三者单独或联合检测诊断NSCLC的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。结果 TTF-1及CK7在肺癌细胞中定位于细胞核，呈棕黄色；p63定位于胞质，呈棕黄色。TTF-1、CK7、p63蛋白表达均与患者病理类型、性别有关(χ2分别为53.972、57.691、52.051,7.832、6.171、8.715；P<0.01或<0.05)。TTF-1(+)、CK7(+)对肺腺癌诊断的敏感性为96.1%，特异性为79.5%，阳性预测值为87.1%，阴性预测值为93.9%，均较单独检测提高。p63(+)、 TTF-1(-)或p63(+)、CK7(-)对肺鳞癌诊断的敏感性和特异性均较单独检测高。结论 NSCLC组织中TTF-1、CK7和p63蛋白的表达均与肺癌病理类型密切相关，TTF-1和CK7主要表达于肺腺癌中，而p63则主要表达于肺鳞癌中，联合检测TTF-1、CK7及p63蛋白有助于提高肺腺癌和鳞癌诊断的准确性。

非小细胞肺癌；甲状腺转录因子1；细胞角蛋白7；p63蛋白

肺癌早期缺乏有效的诊疗手段，超过70%的患者确诊时已经处于晚期[1，2]；另外，晚期肺癌特别是非小细胞肺癌(NSCLC)对化疗的敏感性差，故其病死率较高。目前诊断肺癌有很多手段，包括痰细胞学检查、支气管镜检查、经胸腔的细针穿刺活检、纵膈镜检查、开胸活检、其他细胞或病理检查(胸腔积液、淋巴结等)、胸腔镜检查、肿瘤标志物等[3]。肺癌的肿瘤标志物很多，如癌胚抗原(CEA)、神经烯醇酶(NSE)、铁蛋白等，但缺乏特异性及敏感性。甲状腺转录因子1(TTF-1)、细胞角蛋白7(CK7)和抑癌基因p63蛋白作为新的免疫组化生物学标志物，对肺癌均具有较高的敏感性及特异性。本文通过检测TTF-1、CK7及p63蛋白在不同NSCLC中的表达情况，探讨了它们与NSCLC病理特征的关系及其对不同病理类型肺癌患者的鉴别诊断价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2013年7月～2015年6月河北大学附属医院手术切除或活检的肺癌组织标本106例份，均经病理检查确诊为NSCLC。标本均为肺部原发病例且在获得标本前均未经过放化疗。106例患者中男77例、女29例，年龄38～87岁、中位年龄60岁。根据2004年WHO制定的肿瘤分型标准及分期，病理分型中鳞癌39例，腺癌56例，腺鳞癌11例。其中高分化6例，中分化44例，低分化66例；Ⅰ期29例，Ⅱ期29例，Ⅲ期23例，Ⅳ期25例。

1.2 组织TTF-1、CK7、p63蛋白表达的检测 采用免疫组化SP法。肺活检或手术切除组织标本，经10%中性甲醛固定；常规石蜡包埋，连续切5～6张4 μm切片，使用多聚赖氨酸作为防脱片剂，并将切片置于烤箱中2 h，使切片紧密黏附，取1张HE染色并核实组织病理学诊断，其他切片用于免疫组化染色。严格按照美国Leica公司免疫组化试剂盒说明书进行，抗体稀释倍数1∶400，组织切片常规脱蜡、水化后，用PBS缓冲液连续冲洗2次，每次3 min；切片经乙醇脱水干燥后用中性树胶封片，置于40倍光镜下观察结果；用PBS缓冲液取代一抗作阴性对照。

阳性判断标准：TTF-1蛋白定位于细胞核，阳性染色为棕黄色颗粒；p63定位于细胞核，阳性染色为棕黄色或棕褐色颗粒；CK7定位于细胞质，阳性染色为黄色或棕黄色颗粒。由经验丰富的病理科医生对染色结果进行判定。无阳性细胞或阳性细胞所占百分数<1%为阴性,≥1%为阳性。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。TTF-1蛋白表达率与临床病理资料的比较采用χ2检验或Fisher′s确切概率法。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织TTF-1、CK7、p63蛋白表达与NSCLC患者临床病理参数的关系 TTF-1蛋白表达于细胞核，CK7蛋白表达于细胞质，阳性染色均为棕黄色颗粒；p63蛋白表达于细胞核，为棕黄色或棕褐色。TTF-1、CK7、p63蛋白表达均与病理类型、性别有关(χ2分别为53.972、57.691、52.051, 7.832、6.171、8.715；P<0.01或<0.05)。见表1。

表1 癌组织TTF-1、CK7、p63蛋白表达与NSCLC患者临床病理参数的关系[例(%) ]

2.2 TTF-1、CK7、p63蛋白在NSCLC鉴别诊断中的价值 TTF-1、CK7和p63蛋白单独或联合检测在肺腺癌和鳞癌鉴别诊断中的价值见表2。

表2 TTF-1和CK7、p63蛋白在NSCLC诊断中的价值(%)

3 讨论

TTF-1的表达多与肿瘤组织来源有关。有文献[4]研究显示肺癌中TTF-1在小细胞肺癌中阳性表达率最高，为82.5%～95%，其余依次为腺癌、大细胞癌、鳞癌。本文中TTF-1在肺鳞癌中的表达率仅为20.5%，在肺腺癌中的表达率高达91.1%，与文献报道一致。这些差异性可以用来鉴别肺鳞癌和肺腺癌。对肺腺癌诊断的敏感性为91.1%，特异性 为79.5%，阳性和阴性预测值分别为86.4%和86.1%，与文献[5]报道一致。另有文献[6]报道，TTF-1蛋白在女性、不吸烟及无症状者肺癌患者中升高，主要表达于肺腺癌(191/227)，其诊断敏感性和特异性分别达84.1%和89.8%，阳性表达率随着腺癌分化程度的增加而增加。本研究发现，TTF-1在女性患者阳性表达率为86.2%，高于男性57.1%。也有报道[7]认为TTF-1的表达与患者的性别无关。TTF-1的表达在年龄、TNM分期及肿瘤分化程度方面均无统计学差异，与报道[8，9]一致。有报道[10]认为TTF-1表达与肿瘤分化程度有关，高分化腺癌组表达率高于低分化腺癌组。这些差别需要通过进一步扩大样本量，严格筛选临床病例资料进行验证。刘翼军等[10]研究结果表明TTF-1在小细胞肺癌中表达率为90.5%，鳞癌中表达率为18.2%。认为TTF-1在小细胞肺癌中的表达高于低分化鳞癌；同时联合p63蛋白的检测(鳞癌表达高于小细胞肺癌)在区分小细胞肺癌和低分化鳞癌中具有重要的鉴别诊断意义。本研究结果只用于鉴别NSCLC中肺腺癌及肺鳞癌，而TTF-1在小细胞肺癌中表达率最高，亦可用于鉴别小细胞肺癌及低分化鳞癌。

CK多表达于上皮细胞质中，构成角质细胞的骨架蛋白，主要维持上皮组织的连续性及完整性。CK7多表达于肺脏、乳腺、卵巢、子宫内膜、胰腺等上皮细胞中，而其在胃肠道多不表达。有文献报道，CK7在涎腺恶性多形性腺瘤(MPA)及传统肺腺癌中表达率均较高，CK7在MPA中阳性表达率为100%(15/15)，在传统肺腺癌中表达率为96%(48/50)，而TTF-1在MPA中阴性表达率较高，因此，当CK呈阳性表达的同时，TTF-1呈阴性表达，可诊断为MPA。亦有研究表明，在不吸烟的女性肺癌组织中CK7阳性表达率明显增高。

p63并不是单纯的抑癌基因，不表现为基因突变，在肿瘤中常表现为表达异常。有文献报道,p63多在肺鳞癌中呈阳性表达，阳性表达率为97.0%，并具有较高的敏感性(97.0%)和特异性(74．8%)，诊断的准确性为85.5%，本研究与其一致。

TTF-1、CK7和p63作为诊断、鉴别诊断肿瘤的标志物，单独检测均不具备良好的敏感性及特异性。本研究结果显示，TTF-1(+)、CK7(+)对肺腺癌诊断的敏感性为96.1%，特异性为79.5%，阳性预测值为87.1%，阴性预测值为93.9%，均较单独检测高。p63(+)、TTF-1(-)或p63(+)、CK7(-)对肺鳞癌诊断的敏感性和特异性均较单独检测高。两种联合表达可提高诊断的准确性，可用于诊断及鉴别诊断肺腺癌及肺鳞癌。

综上所述，本研究发现，在NSCLC中，TTF-1、CK7、p63蛋白的表达与肿瘤病理类型密切相关，TTF-1、CK7蛋白在肺腺癌中的表达高于肺鳞癌，p63蛋白在鳞癌中的表达高于肺腺癌，均对肺腺癌和鳞癌的鉴别诊断有一定价值。

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史春云(E-mail：Scyun2011@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.45.019

R734.2

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1002-266X(2016)45-0060-03

2016-07-19)