可溶性CD44s、SF、LDH在鉴别巨幼细胞贫血和骨髓增生异常综合征中的意义

杨洁 杨永宾 李杰 张晓霞 王瑞仓 郝洪岭 李燕 袁军 赵培

可溶性CD44s、SF、LDH在鉴别巨幼细胞贫血和骨髓增生异常综合征中的意义

杨洁 杨永宾 李杰 张晓霞 王瑞仓 郝洪岭 李燕 袁军 赵培

目的 测定巨幼细胞贫血(MA)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者的血清可溶性CD44s(solCD44s)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清铁蛋白(SF)水平，来探讨此三项指标在MDS与MA的鉴别诊断中的意义。方法112例初诊患者为研究对象，其中MDS患者58例(MDS组)，MA患者39例(MA组)，健康成年人15例作为对照(对照组)。留取血清标本，采用ELISA法检测血清solCD44s，速率法测定LDH水平及电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定SF水平。结果MDS组血清solCD44s水平明显高于对照组与MA组(P<0.05)，MA组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。MDS组与MA组血清LDH水平均明显高于对照组，两两比较MDS组LDH水平低于 MA组(P<0.05)。MDS组与MA组血清SF水平均明显高于对照组，两两比较MDS组SF水平高于MA组(P<0.05)。结论MDS患者血清可溶性CD44s、SF水平较MA患者明显升高，MDS患者LDH水平低于MA患者。血清可溶性CD44s、LDH、SF可作为MA与MDS鉴别诊断的参考指标。

可溶性 CD44s；巨幼细胞贫血；乳酸脱氢酶；骨髓增生异常综合征

骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome,MDS)是一组以感染、贫血、出血为主要临床表现的克隆性造血干细胞疾病，单独的基因事件(如基因突变等)并不能解释MDS的病程，目前的观点是基因改变和表观遗传修饰共同作用，导致了MDS无效造血、表型异质性、易向白血病转化等特点[1]。巨幼细胞贫血(MA)与MDS血常规都可有贫血、伴或不伴白细胞及血小板减少，临床表现都以贫血为主，骨髓可见病态造血现象，这些表现有很大的相似性，甚至有些MDS表现全血细胞减少，检测血清叶酸和(或)维生素 B12水平低下，无原始细胞比例增高或增高不明显，且未发现染色体克隆性表现，此类MDS早期与MA鉴别有一定困难。因两种疾病治疗与预后截然不同，因此二者的鉴别具有重要的临床意义。CD44是单链膜表面糖蛋白，属于黏附分子家族，它与细胞黏附、淋巴细胞活化和归巢、肿瘤生长和转移密切相关[2]。血清可溶性CD44(solCD44s)是指CD44从细胞表面脱落而释放入血[3]，此过程需在蛋白水解酶作用下完成。目前国内外关于实体肿瘤、白血病、恶性淋巴瘤等患者的血清solCD44s水平升高的报道已较多，而血清solCD44s水平在MDS患者升高的报道相对较少[4],到目前为止尚未见到MA患者血清solCD44s水平的研究报道。本研究以MA和MDS患者为主要对象，采用ELISA方法测定此两种疾病患者血清solCD44s水平，速率法测定血清乳酸脱氢酶(LDH)水平和电化学发光免疫分析法测定血清铁蛋白(SF)水平，探讨以上三项指标在MA与MDS鉴别诊断的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2011年2月至2015年2月收治的血液病初诊患者97例，其中MDS 58例，MA 39例。血液病的诊断符合《血液病诊断与治疗标准》[5](张之南主编)。MDS组中男38例，女20例；年龄33～81岁，平均年龄(61±8)岁。MA组中男21例，女18例；年龄39～80岁，平均年龄(40±9)岁。在我院体检的健康成年人15例为对照组，其中男6例，女9例；年龄32～57岁，平均年龄(47±8)岁。3组一般资料具有均衡性。

1.2 仪器与试剂 人solCD44s ELISA 试剂盒(博海生物技术有限公司)，全自动酶标仪。

1.3 试验方法

1.3.1 标本采集：治疗前将试验对象及对照组病例采集空腹静脉血3 ml于无抗凝试管，采集后2 h内离心(2 000 r/min，5 min)，在EP管内留取上层血清，每管分装为0.5 ml，保留在-80℃冰箱待测。

1.3.2 血清solCD44s水平检测：应用ELISA方法，按说明书将试剂盒从8℃取出，先在室温下平衡30 min后开启，再进行标准品稀释(应用试剂盒提供的原倍标准品，在小试管中进行稀释)，然后进行加样、温育、配液、洗涤、加酶、温育、洗涤、显色、终止、测定(注：加终止液后立即将空白孔调零，450 nm波长测量各孔的吸光度，此过程在15 min内完成)。

1.3.3 LDH:速率法测血清LDH，由我院检验科代为完成。

1.3.4 SF:电化学发光免疫分析法测SF，由我院核医学科代为完成。

2 结果

2.1 血清solCD44s 的水平比较 对照组血清solCD44s水平为(341.07±64.94)μg/L。MDS组血清solCD44s水平为(564.51±121.96)μg/L，明显高于对照组(P<0.05)。MA 组血清solCD44s水平为(375.93±71.97)μg/L，与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。MDS 组血清solCD44s水平明显高于 MA组(P<0.05)。见表1。

2.2 血清 LDH测定 血清LDH测定：MA组为(815.97±358.58)U/L，MDS组为(348.97±134.76)U/L，均显著高于对照组(151.83±37.29)U/L，差异有统计学意义(P<0.05)。MA组患者血清LDH水平高于MDS组(P<0.05)。SF测定MA组为(432.17±96.02)ng/ml，MDS组为(673.85±336.51)ng/ml，均显著高于对照组(153.59±67.85)ng/ml，差异有统计学意义(P<0.05)。MA组患者SF水平显著低于MDS组(P<0.05)。见表1。

组别血清solCD44s水平(μg/L)血清LDH水平(U/L)SF水平(ng/ml)MA组(n=39)375.93±71.97815.97±358.58*432.17±96.02*MDS组(n=58)564.51±121.96*348.97±134.76*#673.85±336.51*#对照组(n=15)341.07±64.94151.83±37.29153.59±67.85

注：与对照组比较，*P<0.05；与MA组比较，#P<0.05

3 讨论

MA是由于缺乏叶酸和(或)维生素B12，引起脱氧核糖核酸(DNA)合成障碍导致的贫血。MDS是造血干细胞恶性克隆性疾病，属于恶性肿瘤。二者疾病性质不同，治疗及预后也截然不同。MA和MDS在临床上都以贫血为主要表现，伴或不伴出血、感染，外周血象都可有一系、两系或全血细胞减少，常表现大细胞性贫血，骨髓形态学检查都可看到红系、粒系、巨核细胞的生成异常，如巨幼样改变、红细胞大小不均、可见异形红细胞及有核红细胞，粒细胞分叶过多，可见大巨核细胞等，两者容易混淆[6]，且主观因素影响较大。所以找到能够鉴别二者的检验指标十分重要。

血清solCD44s是由CD44胞浆外段从细胞表面脱落释放入血而来，此过程需在蛋白水解酶作用下完成，而内生蛋白水解酶则来自于快速增殖的恶性肿瘤细胞，由此造成solCD44s的增高。在细胞与细胞以及细胞与基质间的信号传导及相互作用中，CD44胞浆外段的脱落起到了重要的调控作用[7]。文献报道，CD44高表达于所有AML亚型原始细胞上[8]，已有文献报道血清solCD44s水平增高与某些人类肿瘤的不良预后有关[9]。并有相关文献提到恶性血液病患者血清solCD44s水平有所升高[10]，如慢性粒细胞白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、AML及MDS等，并提出solCD44s可以作为影响MDS生存的一个独立预后因素。CD44的胞外裂解常见于包括髓系肿瘤在内的很多类型的人类肿瘤[11]，此过程活跃，受高度调控。已脱落下来的solCD44s，其生物学功能仍被保留[12]，即参与细胞活化、抑制肿瘤生长、诱导凋亡。转染的solCD44s可发挥巨大作用，导致细胞增殖，并增加抗凋亡能力，因此认为solCD44s在肿瘤细胞可成为一个新靶点[13]。Moreno等[14]提出，血清solCD44s与肿瘤负荷相关，认为其可成为髓系肿瘤(包括MDS)可靠的肿瘤标志物。本研究中MDS的solCD44s明显高于对照组和MA组，这可能与solCD44s在恶性肿瘤中表达水平较高有关。而MA组与对照组相比无明显统计学意义，这也与其疾病性质相符，因此solCD44s可以作为鉴别MA与MDS的一项辅助指标。

LDH是一种糖酵解酶，广泛存在于人体的各组织中，心肌、骨骼肌、肾脏含量最丰富，红细胞及肿瘤组织中也极为丰富，目前该指标的检测在各大医院广泛开展。正常人血清LDH含量极低，而血清LDH明显升高多见于组织细胞破坏，LDH释放入血。MA与MDS患者在红细胞破坏过多，及骨髓中幼红细胞溶血方面有相似之处，此时LDH释放增加，导致血清LDH升高，但机制却不同。MA是由于叶酸或维生素 B12缺乏致DNA合成障碍，引起细胞核发育障碍，该巨幼细胞易在骨髓内破坏，出现无效性红细胞生成，即骨髓原位溶血、红细胞破坏增加导致了血清LDH增高。肿瘤细胞存在基因调控失调、细胞损伤、能量代谢障碍等特点，目前认为LDH升高与此有关，此机制致肿瘤细胞内LDH释放增多[15]，可反映肿瘤增殖活性[16]。MDS起源于早期多能造血干细胞，其发生和进展是一个多步续过程，受损的干、祖细胞逐步成为单克隆造血，伴有基因组不稳定性，基因突变率高[17]，易发生继发性细胞遗传学异常，MDS血清LDH升高与能量代谢障碍和细胞损伤相关。MA骨髓中存在大量巨幼细胞和大红细胞，其生存期短，过早破坏，合并原位溶血，以上方面均较MDS突出，这些方面均导致LDH明显升高。

SF是去铁蛋白和Fe3+形成的复合物，是铁的贮存形式。MA患者红细胞破坏增多，骨髓增生紊乱，铁利用障碍，SF轻度增高。而MDS属于恶性肿瘤，肿瘤细胞铁蛋白合成增加，清除障碍[18]，加之致癌因子对铁代谢直接或间接的干扰，且MDS患者铁利用障碍、骨髓无效造血、正常造血受抑等都导致SF明显增高。

血清LDH、SF作为MA与MDS鉴别指标的文献报道已不少见[18]，但未见solCD44s在MA中表达的研究。本文进行了MA与MDS两种疾病血清solCD44s、LDH、SF的水平测定，认为在MA与MDS二者鉴别中除了结合外周血及骨髓细胞形态、骨髓病理、细胞遗传学以外，此三项指标可以作为协助鉴别的血清学指标，MA的LDH水平高于MDS，solCD44、SF水平低于MDS，参考这些指标有助于提高诊断的准确性。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2016.24.026

050051 石家庄市，河北省人民医院血液科(杨洁、李杰、张晓霞、王瑞仓、郝洪岭、李燕、袁军)，普外二科(杨永宾)，检验科(赵培)

郝洪岭，050051 石家庄市，河北省人民医院血液科；

E-mail：h0707@163.com

R 551.31

A

1002-7386(2016)24-3773-03

2016-08-05)