霉菌毒素生物脱毒剂对肉仔鸡生产性能、免疫功能及肝脏中毒素残留的影响

陈 静， 郭建慧， 刘乃芝， 徐 辉， 任甜甜， 曾佳佳， 谷 巍， 王春凤

（1.山东宝来利来生物工程股份有限公司，山东泰安 271000；2.潍坊职业学院，山东潍坊261031；3.吉林农业大学，吉林长春130000）

添加剂

霉菌毒素生物脱毒剂对肉仔鸡生产性能、免疫功能及肝脏中毒素残留的影响

陈 静1*， 郭建慧2， 刘乃芝1， 徐 辉1， 任甜甜1， 曾佳佳1， 谷 巍1， 王春凤3

（1.山东宝来利来生物工程股份有限公司，山东泰安 271000；2.潍坊职业学院，山东潍坊261031；3.吉林农业大学，吉林长春130000）

试验旨在研究霉菌毒素降解菌复配水合钠钙铝酸盐使用对饲喂霉变饲料肉鸡的生长性能、免疫功能、血清生化指标及肝脏中毒素残留的影响。选取体重均匀、健康状况基本相近的300只白羽肉鸡随机分为3组，每组5个重复，每个重复20只。对照组（Ⅰ组）饲喂正常玉米日粮；发霉饲料组（Ⅱ组）用50%霉变玉米替代正常玉米；霉菌毒素脱毒剂组（Ⅲ组）用50%霉变玉米替代正常玉米+2.0‰霉菌毒素脱毒剂。结果表明∶（1）与对照组相比，发霉饲料组各生长阶段的平均日增重均显著降低（P＜0.05），料重比显著升高（P＜0.05）；与发霉饲料组相比，霉菌毒素脱毒剂组显著提高了各生长阶段肉鸡的平均日增重（P＜0.05），显著降低了各生长阶段肉鸡的料重比（P＜0.05）。（2）24 d 和38 d时均以试验Ⅲ组脾脏指数最高，分别高出发霉饲料组28.93%和11.36%，差异均显著（P＜0.05）；与发霉饲料组相比，霉菌毒素脱毒剂组显著提高了24 d和38 d肉鸡法氏囊指数。（3）38 d时试验Ⅱ组肉鸡血清中谷丙转氨酶和谷草转氨酶均最高，显著高于试验Ⅰ组和Ⅲ组（P＜0.05）；饲喂毒素饲料的试验Ⅱ组总蛋白和白蛋白含量均最低，均显著低于试验Ⅲ组 （P＜0.05）。（4）与试验Ⅱ组相比，试验Ⅲ组黄曲霉菌毒素B1和玉米赤霉稀酮含量分别降低53.53%和58.09%，差异均显著（P＜0.05）。

水合钠钙铝酸盐；益生菌；霉菌毒素；白羽肉鸡；生长性能；免疫性能；血清生化指标；肝脏毒素残留

霉菌毒素是霉菌在生长繁殖过程中产生的有毒次级代谢产物，广泛存在于饲料及饲料原料中，对人和动物健康产生了极大的威胁。全世界每年因霉菌毒素污染的粮食作物占粮食总量的25%以上。目前发现饲料及饲料原料中霉菌毒素种类有100多种，在各种食品与饲料中广泛存在和危害最大的霉菌毒素一般认为有黄曲霉毒素B1（AFB1）、赭曲霉毒素A （OTA）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、T-2毒素等（Hussein等，2001）。对我国的配合饲料和饲料原料进行调查发现，90%以上的混合饲料都含有上述霉菌毒素（王若军，2003）。动物采食霉菌毒素后可导致日增重、采食量下降，料重比增加，还会对肝脏、肾脏、脾脏、胸腺及法氏囊造成严重损伤，更为严重的霉菌毒素可沉积在动物的肝脏、肾脏、肌肉及乳汁等动物产品中，通过食物链进入人体，给人类的健康造成威胁 （李盛唐，2008；戴高德，2005）。

在饲料中添加吸附剂来降低胃肠道对霉菌毒素的吸收，是解决霉菌毒素污染最简单、经济的方法之一，常用的有天然硅铝酸盐类无机吸附剂（如蒙脱石、膨润土等），其对黄曲霉毒素具有较好的吸附功能（齐德生等，2003）。Devegowda等（2001）研究表明，在日粮中添加0.5%天然硅铝酸盐（HSCAS）可减轻黄曲霉毒素B1（日粮中为7.5mg/kg）对来航蛋鸡及肉仔鸡的毒害作用。采用微生物降解霉菌毒素由于其具有高效性、无残留、成本低和操作简单等优点引起广泛关注，尤其是利用微生物或者其产生的酶将霉菌毒素降解为无毒产物成为研究热点。本试验将吸附剂水合钠钙铝酸盐和益生菌复合添加到被霉菌毒素污染的日粮中，研究其对肉鸡生产性能、免疫功能、血清生化指标及肝脏中毒素残留的影响，为吸附剂和益生菌联用在肉鸡养殖中的推广应用提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 材料 霉菌毒素脱毒剂 主要由芽孢杆菌、乳酸杆菌和水合钠钙铝酸盐等成分组成，其中芽孢杆菌可降解玉米赤霉烯酮、乳酸杆菌可降解黄曲霉毒素B1，均由山东宝来利来生物工程股份有限公司研究院提供，活菌数≥5.0×108cfu/g；霉变玉米置于自然条件（温度23~28℃，湿度65%~ 85%）培养制备，将水分提高至20%左右，肉眼观察有明显霉变产生，用霉菌毒素ELISA试剂盒检测，其中黄曲霉毒素B175μg/kg，按照50%霉变玉米替代正常玉米配制试验饲料，其中黄曲霉毒素B122.5μg/kg，已超过肉鸡的安全限度10μg/kg；玉米赤霉烯酮（ZEN）2512μg/kg，按照50%霉变玉米替代正常玉米配制试验饲料，其中玉米赤霉烯酮（ZEN）750.5μg/kg，已超过肉鸡的安全限度500μg/kg。

1.2 试验设计及日粮 1日龄白羽肉鸡正常饲料育雏10 d后，选取体重均匀、健康状况基本相近的300只，随机分为3组，每组5个重复，每个重复20只。具体分组如下：（1）对照组（Ⅰ组）：正常玉米日粮；（2）发霉饲料组（Ⅱ组）：用50%霉变玉米替代正常玉米；（3）霉菌毒素脱毒剂组（Ⅲ组）：发霉饲料+2.0‰霉菌毒素脱毒剂。

饲养过程中防止饲料发霉和霉变饲料继续发霉，将饲料置于干燥、阴凉条件下存放。基础日粮组成及营养水平见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平（干物质基础）

1.3 饲养管理 试验鸡各重复采用分笼饲养，自由采食和饮水。试验前将鸡舍、鸡笼进行彻底清扫，熏蒸消毒。于7和21日龄接种新城疫疫苗，28日龄接种法氏囊疫苗。从第10天正式开始试验，饲喂相应的饲粮。整个试验内，第一周室温控制在32~36℃，以后每周降低2℃，直至温度降到25℃，最后温度控制在22~25℃，相对湿度55%~60%。饲养期为38 d。

1.4 测定指标及方法

1.4.1 生长性能测定 于试验10、17、24、31、38日龄清晨空腹称重，以重复为单位记录各阶段体增重和耗料量，计算各期平均日增重（ADG）和料重比（F/G）。

1.4.2 免疫器官指数测定 分别于试鸡24和38日龄从每个重复中随机抽取3只禁食（自由饮水）12 h后的肉鸡，分别称重，颈动脉放血处死，立即无菌解剖并分离脾脏和法氏囊，剔除脂肪后称鲜重，计算免疫器官指数。

免疫器官指数/（mg/g）=免疫器官重量/活体重。

1.4.3 血清生化指标检测 于试鸡38日龄从每个重复中随机抽取3只禁食 （自由饮水）12 h后的肉鸡，翅下采血，4000 r/min离心取血清。采用日立7020全自动生化分析仪检测血清中谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）和尿素氮（BUN）含量。

1.4.4 肝脏中残留毒素含量的检测 肝脏样品的预处理：于试鸡38日龄从每个重复中随机抽取3只禁食（自由饮水）12 h后的肉鸡，颈静脉放血致死，经正常宰杀，迅速打开腹腔，采集肝脏，放入培养皿中用预冷的生理盐水清洗干净，用滤纸擦去多余的液体后匀浆，称取5 g匀浆样品于125 mL具塞锥形瓶中，准确加入60%甲醇水溶液25mL和正己烷20 mL，加塞振荡10 min，过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层；待下层甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一锥形瓶中。吸取10mL甲醇水提取液于125mL分液漏斗中，加入20mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，取10 mL于20 mL蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入60%甲醇水溶液5 mL，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。取滤液2mL，加入6mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为肝脏待检液。

霉菌毒素含量的测定：肝脏中AFB1、ZEN均采用酶联免疫试剂盒测定，按说明书的方法步骤进行测定，每个样品平行3次。检测限分别为1μg/kg 和10μg/kg。

1.5 数据处理 试验数据用Excel软件进行初步处理后，采用SPSS 13.0进行统计分析，采用Oneway ANOVA进行方差分析，LSD法进行组间多重比较，结果以“平均值±标准差”表示，P＜0.05表示差异显著。

2 结果与分析

2.1 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡生产性能的影响由表2可知，与对照组相比，发霉饲料组各生长阶段的平均日增重均显著降低（P＜0.05），料重比显著升高（P＜0.05），表明饲料发霉显著降低了肉鸡的生产性能。

表2 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡生产性能的影响

与发霉饲料组相比，霉菌毒素脱毒剂组显著提高了各生长阶段肉鸡的平均日增重（P＜0.05），显著降低了各生长阶段肉鸡的料重比（P＜0.05）；与对照组相比，霉菌毒素脱毒剂组各生长阶段平均日增重和料重比差异均不显著（P＞0.05）。表明霉菌毒素脱毒剂完全阻止了饲料发霉所导致的肉鸡生产性能的降低。

2.2 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡免疫器官指数的影响 由表3可知，脾脏指数：24 d和38 d时均以试验Ⅲ组最高，分别高出发霉饲料组28.93%和11.36%，差异均显著（P＜0.05）；与对照组相比，24 d和38 d发霉饲料组差异不显著 （P>0.05）。表明发霉饲料对肉鸡脾脏发育影响不大，霉菌毒素脱毒剂由于益生菌的添加，促进了脾脏的发育。

表3 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡免疫器官指数的影响mg/g

法氏囊指数：与对照组相比，发霉饲料抑制了肉鸡法氏囊的发育，显著降低了法氏囊指数（P＜0.05）；与发霉饲料组相比，霉菌毒素脱毒剂组显著提高了24 d和38 d肉鸡法氏囊指数，促进了肉鸡法氏囊发育。

2.3 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡血清生化指标的影响 由表4可知，38 d时试验Ⅱ组肉鸡血清中ALT最高，分别高出试验Ⅰ组和Ⅲ组39.33%和47.09%，差异均显著（P＜0.05）；试验Ⅱ组肉鸡血清中AST最高，显著高于试验Ⅰ组和Ⅲ组（P＜0.05）。说明试验Ⅱ组饲喂发霉饲料对肉鸡肝脏造成一定程度的损伤，饲料中添加脱霉剂后可以降低血清中由于毒素造成的ALT和AST水平的升高，吸附了一定量的霉菌毒素，对肝脏损伤有保护作用。

表4 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡血清生化指标的影响

肉鸡血清中TP含量：饲喂毒素饲料的试验Ⅱ组最低，分别低于试验Ⅰ组和Ⅲ组7.97%和11.24%，差异均显著（P＜0.05）；ALB含量：饲喂毒素饲料的试验Ⅱ组最低，显著低于试验Ⅲ组（P＜0.05），与对照组差异不显著 （P＞0.05）；BUN含量各组间差异均不显著（P＞0.05）。说明毒素饲料影响了肉鸡的蛋白质代谢，对氨基酸的平衡情况影响不大。

2.4 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡肝脏中毒素残留的影响 由表5可知，对照组的肉鸡肝脏中未检测出霉菌毒素，两个试验组在肝脏中均检测出有霉菌毒素残留。与饲料中的毒素含量相比，试验Ⅱ组霉菌毒素AFB1和ZEN在肝脏中的残留分别为15.11%和6.93%，饲料中添加霉菌毒素脱毒剂的试验Ⅲ组霉菌毒素AFB1和ZEN在肝脏中的残留分别为7.02%和2.90%。与试验Ⅱ组相比，试验Ⅲ组AFB1和ZEN含量分别降低53.53%和58.09%，差异均显著（P＜0.05）。

表5 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡肝脏中毒素残留的影响 μg/kg

3 讨论

3.1 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡生产性能的影响饲料中的霉菌毒素对动物生产性能具有严重的负面影响，同时其在动物产品中的残留对人类健康也存在极大的威胁，因此很多国家或组织对霉菌毒素做出了限量规定。肉鸡对霉菌毒素十分敏感，霉菌毒素污染肉鸡饲料造成肉鸡生产性能下降及大面积死亡（戴晋军等，2010；张勇，2009）。本试验结果表明，霉菌毒素降低了肉鸡的平均日增重和饲料转化效率，霉菌毒素脱毒剂复合了乳酸菌、芽孢杆菌和毒素吸附剂水合钠钙铝酸盐，完全阻止了饲料发霉所导致的肉鸡生长性能的降低。刘少文等（2015）、Neeff等（2013）、李娟娟等（2009）研究发现，在霉变饲料中添加物理性霉菌吸附剂后能有效缓解霉菌毒素造成的影响，但全部物理性霉菌吸附剂在吸附霉菌的同时，对饲料中重要营养成分也存在一定的吸附作用，降低了饲料的营养价值。乳酸菌和芽孢杆菌作为肠道益生菌群，对动物的生产性能、养分消化率及免疫功能等都有显著的改善作用。本试验结果表明，在霉变饲料中添加乳酸菌和芽孢杆菌能有效缓解霉菌毒素对肉鸡的毒性作用，显著提高平均日增重和饲料转化率。

3.2 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡免疫器官指数的影响 Leeson等（1995）研究表明，霉菌毒素能显著改善肉鸡内脏器官的相对大小，导致肾脏、肝脏和法氏囊减小。本试验结果表明，发霉饲料组由于饲喂发霉饲料显著抑制了脾脏和法氏囊的发育，与林庆森等（2006）和王慧容（2008）的研究一致。林庆森（2006）试验发现，以10μg/g剂量添加的黄曲霉毒素使鸡的胸腺和法氏囊分别减轻55%和33%。王慧容（2008）研究发现，发霉饲料组显著降低了肉鸡的胸腺指数，抑制了免疫器官的发育。

添加2.0‰霉菌毒素脱毒剂于发霉日粮中阻止了发霉饲料引起的脾脏和法氏囊的萎缩。分析原因可能是吸附了更多的霉菌毒素，减轻了对动物的毒害作用，同时由于添加了益生菌，提高了机体免疫力，抵抗霉菌毒素的能力增强。

3.3 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡血清生化指标的影响 ALT和AST是反映肝脏有无损伤的重要指标。霉菌毒素能够改变血清中酶类的活性，肝脏损伤时，由肝脏产生的各种酶活性发生变化，因此肝脏中和血清中酶活性变化是评估动物损伤程度的可靠依据。畜禽摄食含有霉菌毒素的饲料后，血清中ALT和AST活性升高 （Aravind等，2003；Raju等，2002）。Raju等（2000）研究表明，霉菌毒素使血清中ALT和AST活性提高。黄晓林（2012）研究表明，不同含量霉菌毒素处理肉鸡时，使得血清中ALT明显升高，血清中AST显著升高。本试验结果表明，饲喂霉菌毒素饲料后使得肉鸡血清中ALT和AST显著升高，这与前人的研究结果一致，使用霉菌毒素脱毒剂后使得ALT和AST显著降低，说明霉菌毒素脱毒剂吸附了霉菌毒素，减少了对肝脏的损伤。

血清尿素氮是反映机体的营养状况以及蛋白质代谢水平的指标（万家余等，2003）。Scott等指出，血清尿素氮浓度可以较准确地反映动物体内蛋白质代谢和氨基酸之间的平衡状况 （Scott等，1982）。血清尿素氮含量与蛋白质的利用率为显著负相关，可准确反映动物体内蛋白质分解代谢水平，其水平越低则氮的利用率越高。本试验结果表明，各组血清中尿素氮差异均不显著，说明饲喂霉菌毒素和霉菌毒素脱毒剂饲料对肉鸡蛋白质代谢和氨基酸代谢影响不大。

血浆蛋白分为白蛋白、球蛋白和纤维蛋白原。血浆白蛋白和部分球蛋白在肝脏中合成，肝脏严重损伤时血浆蛋白显著减少（王慧容，2008）。本试验结果表明，饲喂霉菌毒素饲料后降低了白蛋白水平，显著降低了总蛋白含量，说明霉菌毒素饲料饲喂肉鸡后对肝脏造成损伤。霉菌毒素脱毒剂组白蛋白和总蛋白含量稍高于对照组，但差异不显著，说明使用霉菌毒素脱毒剂后吸附了大量的毒素，对肝脏的损伤减至对照相当水平，同时由于添加了益生菌，对肝脏有较好的保护作用。

3.4 霉菌毒素脱毒剂对肉仔鸡肝脏中毒素残留的影响 肝脏作为动物机体主要的代谢器官，具有很强的生物转化功能和解毒功能，也是霉菌毒素进入机体后攻击的主要器官。史莹华（2007）等在生长肥育猪饲粮中添加100μg/kg的AFB1后，过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著降低。吕武兴等（2013）在饲粮中添加AFB1纯品饲喂肉鸭后发现，低剂量AFB1导致肝小叶形态模糊，少量肝细胞坏死；高剂量AFB1导致肝组织出现大量的颗粒变性和水泡变性，同时伴有纤维结蹄组织增生和胆管增生。本试验结果显示，日粮中AFB1进入肉鸡体内后，在肝脏中有一定程度的蓄积，饲喂霉菌毒素饲料后肝脏中AFB1残留量为15.11%，使用霉菌毒素脱毒剂后AFB1残留量为7.02%，说明使用该脱毒剂后显著降低了肝脏中AFB1的残留。

ZEN通过被污染的谷物和肉、奶等制品进入人体。ZEN及其代谢物主要在肝脏中残留，James等（1982）给猪饲喂含有ZEN污染的日粮（40mg/kg）4周，肝脏中ZEN的浓度为78~128μg/kg。本试验结果表明，肉鸡采食含有ZEN的日粮28 d，肝脏中ZEN含量为51.99μg/kg，残留量为6.93%，添加 2.0‰霉菌毒素脱毒剂后使得残留量降至2.90%，显著降低了ZEN在肝脏中的残留。

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The experimentwas conducted to evaluate the detoxication effects ofmycotoxin degradation strains with hydrated sodium calcium aluminosilicates on growth performance，immune function，the serum blood biochenmical indexes and liver toxin residue of broilers fed the grains contaminated with mycotoxins.Three hundred one-day-old white feather chicken broiler chickens were randomly allotted into 3 groups with 5 replicates of 20 each.The chickens in the control group（GroupⅠ）were only fed basal diet，moldy feed group（GroupⅡ）were fed with 50%mycotoxins contaminated maize；mycotoxin removal agentgroup（GroupⅢ）were fed with 50%mycotoxins contaminatedmaize adding 2‰mycotoxin detoxicant.The results showed that：（1）In every test period，compared with the control group，the average daily gain of broilers in groupⅡwere significantly lower（P＜0.05），the feed/gain were significantly higher（P＜0.05）；compared with themoldy feed group，the average daily gain ofbroilers inmycotoxin detoxification agentgroup were significantly higher（P＜0.05），and the feed/gain were significantly lower（P＜0.05）.（2）At the age of 24 days and 38 days，the spleen index in groupⅢ were 28.93%and 11.36%higher than that in groupⅡ （P＜0.05），respectively；the bursa index in groupⅢwere higher than those in groupⅡ （P＜0.05）.（3）At the age of 38 days，serum alanine aminotransferase（ALT）and oxalacetic aminotransferase（AST）in groupⅡwere significant higher than those in groupⅠand GroupⅢ（P＜0.05）.serum total protein（TP）and albumin（ALB）in groupⅡwere significant lower than those in groupⅢ（P＜0.05）.（4）compared with groupⅡ，the contents of aflatoxin B1（AFB1）and zearalenone（ZEN）in groupⅢwere all significantly decreased 53.53%and 58.09%，respectively（P＜0.05）.

hydrated sodium calcium aluminosilicates；probiotics；mycotoxin；white feather chicken；growth performance；immunity；serum biochemical indexes；liver toxin residue

S816.7

A

1004-3314（2016）22-0016-05

863课题“新型抗感染功能型微生态制剂研制与应用”（2013AA102806）

*通讯作者

DOI∶10.15906/j.cnki.cn11-2975/s.20152206