深圳肺炎患者不同类型样品中嗜肺军团菌检测及感染调查

周国宏++++++余淑苑++++++彭朝琼++++++方道奎++++++冯锦姝

[摘要]目的 调查深圳市综合医院肺炎患者嗜肺军团菌感染水平及肺炎患者不同样品嗜肺军团菌感染检出率。方法 于2013年4～6月采集深圳市3家大型综合医院81例肺炎住院患者的痰、尿和血清，采用巢氏PCR法检测痰中嗜肺军团菌，酶联免疫吸附法检测尿中嗜肺军团菌抗原和血清嗜肺军团菌抗体。结果 痰嗜肺军团菌、尿嗜肺军团菌抗原和血清嗜肺军团菌抗体阳性率分别为5.9%（3/51）、12.1%（8/66）和22.8%（18/79），深圳市综合医院肺炎患者嗜肺军团菌感染率为32.1%（26/81）。结论 深圳综合医院肺炎患者嗜肺军团菌感染率较高，肺炎患者不同样品嗜肺军团菌感染检出率不同。

[关键词]嗜肺军团菌；肺炎患者；综合医院

[中图分类号] R517.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2016）10（b）-0144-03

[Abstract]Objective To investigate the infection levels of Legionella pneumophila in pneumonia patients and the detection rate of Legionella pneumophila infection from different types of samples in pneumonia patients in Shenzhen comprehensive hospitals.Methods From April to June in 2013，the sputum，urine，and serum from 81 hospitalized pneumonia patients from 3 large scale comprehensive hospitals in Shenzhen were collected.The Legionella pneumophila in sputum was detected by Chao′s PCR，and antigen of Legionella pneumophila in urine and antibody of Legionella pneumophila in serum were detected by enzyme linked immunosorbent assay.Results The positive rates of Legionella pneumophila in sputum，Legionella pneumophila antigen in urine，and Legionella pneumophila antibody in serum were 5.9%（3/51），12.1%（8/66），and 22.8%（18/79） respectively.The infection rate of Legionella pneumophila in pneumonia patients in Shenzhen comprehensive hospitals was 32.1% （26/81）.Conclusion The infection rate in patients suffering from pneumonia in Shenzhen comprehensive hospital is high and different types of samples come out of different detection rates of Legionella pneumophila infection.

[Key words]Legionella pneumophila；Pneumonia patient；Comprehensive hospital

军团菌病（legionellosis）是一种急性呼吸道细菌性感染性疾病，主要因吸入含有军团菌（Legionella）的气溶胶而感染，军团菌病分为3种亚型：①肺炎型军团菌病（LD），以肺炎为主要临床表现的军团菌感染，又称军团菌肺炎；②肺外综合征，即感染从肺部播散至肺外其他系统；③庞蒂亚克热（Pontiac fever），主要表现为急性发热，病程呈自限性。军团菌属系需氧革兰阴性杆菌，广泛存在于天然淡水环境和人工水系中，现已检出50种以上的军团菌，至少20种是人类肺炎的病原菌，其中最常见病原菌为嗜肺军团菌。军团病常以肺炎为主要表现，伴多系统损害，病死率为5%～40%[1]。

WHO及一些发达国家已将军团病纳入法定传染病管理之列[2]。我国自1982年首次发现军团菌肺炎以来各地时有暴发流行及散发病例的报道，到目前为止，尚未建立军团菌病常规检测系统，准确的发病率尚不清楚[3]。为了解综合医院肺炎患者嗜肺军团菌的感染情况及不同样品嗜肺军团菌感染检出情况，笔者对深圳市3家大型综合性医院肺炎住院患者的嗜肺军团菌的感染情况进行了调查。

1材料与方法

1.1调查对象

选择2013年4～6月深圳市福田区、宝安区3家综合性三级甲等医院开展现场调查，调查对象为新入院确诊肺炎患者。

1.2样品采集

痰样本采集：采用自然咯痰法，先用清水反复漱口后用力自气管深部咳出第一口痰，置于无菌容器中尽快送检；尿样本采集：在调查对象入院首日，采集患者晨尿15 ml置于无菌离心管内送检；血样本采集：入院首日采集患者肘静脉血5 ml送检，按1000×g离心10 min分离血清。上述所有样品均存入-70℃低温冰箱保存，并于1周内完成检测。

1.3实验室检测

由中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所负责，痰嗜肺军团菌采用巢式PCR扩增法，尿嗜肺军团菌抗原和血清嗜肺军团菌抗体采用ELISA检测[4]。

1.4统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件进行样品嗜肺军团菌检出率的χ2分析，3种样品之间阳性率的比较，采用χ2分割法进行统计分析，以P<0.05为差异有统计意义。

2结果

2.1一般情况

调查肺炎新住院患者81例，其中男性患者49例，女性患者32例。年龄16～91岁，平均（45.63±20.48）岁。共采集51份痰样，66份尿样，79份血样。

2.2不同类型生物样品嗜肺军团菌检出率

新入院肺炎患者痰嗜肺军团菌阳性率为5.9%（3/51），尿样嗜肺军团菌抗原阳性率为12.1%（8/66），血清嗜肺军团菌抗体阳性率为22.8%（18/79）。不同类型生物样品嗜肺军团菌检出率比较，差异有统计学意义（χ2=7.588，P=0.023），以血清嗜肺军团菌抗体检出率最高，其次是尿液肺军团菌抗原和痰液嗜肺军团菌。痰检测阳性率与血清检测阳性率比较，差异有统计学意义（χ2=6.537，P=0.011），痰检测阳性率与尿检测阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=1.315，P=0.252），尿检测阳性率与血清检测阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=2.779，P=0.096）。

2.3肺炎患者不同样品嗜肺军团菌检出率的比较

在81例患者中，未发现同一患者痰、尿、血清嗜肺军团菌检测均为阳性的病例，仅有1例患者痰和血样品检测均为阳性，2例尿和血清检测均为阳性。有2例患者痰是阳性而血样是阴性，6例患者尿是阳性血样是阴性。按照患者的痰、尿和血清任一样品检测阳性即判断该患者为嗜肺军团菌感染的标准，深圳市大型综合性医院肺炎患者嗜肺军团菌感染率为32.1%（26/81）。

3讨论

WHO及部分经济发达国家已将军团菌病纳入法定传染病管理序列。但是，我国大多数医院未开展肺炎患者军团菌病的病原学诊断，而军团菌病又不属于法定传染病，因此，我国医疗卫生机构无须上报军团菌病，全国缺乏相应的监测报告系统，人群军团菌感染现况和军团菌病流行情况不明[3]。

细菌培养法是实验室诊断和流行病学调查中确定军团菌感染的“金标准”，特异度为100%，敏感度为50%～80%[5-6]，但费时较长，为7～10 d。临床标本中均含有大量杂菌，要从中分离培养军团菌变得尤为困难，给临床诊断带来了一定难度，不适宜临床应用。但尿抗原检测、血清抗体检测和痰中嗜肺军团菌PCR检测等又各有其优缺点[7]。深圳地区医院患者三种标本检出率也明显不同，提示需要进一步研究军团菌病的实验室诊断方法。

从生物样品采集是否便利的角度看，采集尿样本较为方便，因为采集痰样本和血样本可能存在一定的创伤或不适。但从敏感度来看，由于尿样本中嗜肺军团菌抗原仅在发病早期出现，而尿液中可溶性抗原浓度不高，且易受抗生素使用的影响出现假阴性结果的机会较大[8]，敏感度低于血样。从本次检测结果可以看出，尿样嗜肺军团菌抗原阳性率（12.1%）低于血清嗜肺军团菌抗体阳性率（22.8%），但此次调查结果未发现有统计学差异，可能与病例数量较少有关。与其他地区调查相比，尿样中嗜肺军团菌抗原阳性率高于史晓红等[9]在太原地区的调查结果[4.7%（10/213）]。

本次调查结果显示，深圳综合医院肺炎患者血清IgG-IgA-IgM总抗体阳性率为22.8%，明显高于江丽等[10]在福州地区调查呼吸道感染患者血清嗜肺军团菌IgM抗体阳性率12.51%（508/4060）、张晓峰等[11]在江苏省无锡地区肺部感染患者血清嗜肺军团菌IgG抗体阳性率2.42%（124/5131）和路凤等[12]调查北京地区493例呼吸系统疾病就诊患者嗜肺军团菌血清IgG抗体阳性率为4.5%，可能与不同地区嗜肺军团菌感染水平和测量方法不同有关。

痰标本检出率差异也较大，张润梅等[13]调查山西太原地区医院肺部感染患者痰液军团菌阳性率为3.65%（10/274）；何晖等[14]对广州地区痰军团菌阳性率调查结果为15.0%（22/150），深圳医院痰军团菌阳性率为5.9%（3/51），介于上述两项研究结果之间。

近年研究结果显示，呼吸道或肺部疾病人群的军团菌感染率为4.5%～38.9%，健康人群军团菌感染率为1.25%～57.42%[4]。目前军团菌感染现况调查研究中，由于研究对象（不同人群、病情、年龄、性别、采样时间等）、检测生物样品（血液、尿液、痰液等）、检测方法各不同，不同研究结果之间数据的可比性较差，无法判断我国人群军团菌感染水平，也难以系统分析我国军团菌病的流行病学特征。

本次调查结果显示，尚未发现一例患者血液、尿液、痰液3种生物样品均为阳性的情况，仅有3例患者同时出现两种类型生物样品均为阳性的情况，说明同时检测3类生物样品能够有效降低检测结果的假阴性率。深圳地区综合医院肺炎患者嗜肺军团菌感染率高达32.1%，这可能与该地区环境中嗜肺军团菌污染水平及三种生物并行检测有关。提示单一检测方法容易出现漏诊，实际肺炎患者嗜肺军团菌感染率较高。

郭景玉[15]调查全国31个城市自然水环境中军团菌分布情况，南方城市水环境嗜肺军团菌检出率较高，其中广州检出率高达70.8%。而深圳气候环境与广州相似，水环境嗜肺军团菌检出率应该较高。同时，林爱红等[16]调查发现，深圳公共场所冷却水嗜肺军团菌阳性率高达50.9%，淋浴水阳性率为37.0%，自来水阳性率为35.3%。由于深圳地区环境嗜肺军团菌普遍存在，增加了人群接触机会，这可能是深圳地区住院肺炎患者嗜肺军团菌阳性率较高的部分原因。针对以上情况，应加强深圳市公共场所等室内环境空调系统监测和卫生管理，加强军团菌污染及疾病监测工作，探讨军团菌病有关的控制措施。

[参考文献]

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[10]江丽，欧启水，陈静.福州地区4060例呼吸道感染患者病原体检测结果分析[J].检验医学与临床，2014，11（4）：483-484.

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