大米蛋白肽对冷应激时鹌鹑健康状况和血液生化指标的影响

刘卫东 程 璞 王章存 靳双星

大米蛋白肽对冷应激时鹌鹑健康状况和血液生化指标的影响

刘卫东1程 璞1王章存2靳双星1

（河南牧业经济学院动物科技学院1，郑州 450046）
（郑州轻工业学院食品与生物工程学院2，郑州 450002）

选择3月龄健康黄羽雄性鹌鹑600只，随机分为5组，每组120只，下设3个重复，每个重复40只，各组鹌鹑养在不同的舍中。0组房舍人工采暖，舍温22～24℃，平均为23℃；1～4组自然舍温，温度为9～13℃，平均为11℃，0组、1组喂不含大米蛋白肽的基础日粮，2～4组分别喂含1.5%、2.0% 和2.5% 的大米蛋白肽的日粮，试验期为18 d。添加2%～2.5% 的大米蛋白肽，使鹌鹑的发病死亡率、血清酶、血清中的醛固酮（ALD）、皮质醇（FC）和甲状腺素（T4）含量显著或极显著降低（P＜0.05或P ＜0.01），总脂（TG）和总蛋白（TP）含量明显上升（P＜0.05）。显示大米蛋白肽能明显降低处于冷应激状态中的鹌鹑的发病死亡率，并有利于维持其机体的内稳态。

大米蛋白肽 冷应激 鹌鹑 发病死亡率 生化指标

我国是世界第一的鹌鹑养殖大国，饲养量占世界的五分之一。鹌鹑喜温怕寒，而国内的鹌鹑养殖主要集中在华东和中原地区，这些地区冬春季节的低温是引起鹌鹑生理异常和发病死亡的重要应激原，给鹌鹑生产造成巨大损失，生产者急需找寻一种方法来解决此问题。使用安全无污染的营养型添加剂无疑是一种好方法。小肽是蛋白质经酶水解的产物，也是动物体内蛋白质消化吸收的主要方式［1］，它不仅具有远高于游离氨基酸的营养吸收效率，而且还具有多种生理功能，如提高动物的免疫力和增进动物的食欲、增加养分的消化吸收［2-4］、减少房舍内的有害气体［5-6］等，因而推测小肽在动物的抗冷应激上可能有好的作用，但目前鲜见相关报道。大米蛋白肽是大米蛋白经酶水解的产物，属于小肽，本试验对大米蛋白肽在鹌鹑抗冷应激方面的效果进行了研究。经在冬季鹌鹑的日粮中使用大米蛋白肽后，其发病死亡情况和生理状况均得到了明显的改善。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 材料

大米蛋白肽：自制，平均肽链长度3.56，蛋白质质量分数75.05%。

1.1.2 仪器

HITCHI-7600-010型全自动生化分析仪：日本日立公司；Berthold Centro LB 960化学发光酶标仪：德国维克托公司。

1.2 试验设计

选择3月龄健康黄羽雄性鹌鹑600只，随机分为5组，分别为0组（非冷应激组），1组（冷应激对照组），2～4组（冷应激试验组），每组120只，下设3个重复，每个重复40只，各组鹑养在不同的舍中。0组房舍人工采暖，舍温22～24℃，平均为23℃，1～4组自然舍温，温度为9～13℃，平均为11℃，试鹑自由采食与饮水，0组、1组喂基础日粮，2～4组分别喂含1.5%、2.0% 和2.5% 的大米蛋白肽的日粮，各组日粮的组成与营养成分见表1。每天观察鹑群，及时记录发病死亡情况，试验期为18 d。

表1 试验日粮组成与营养水平

1.3 样品采集与测定方法

1.3.1 血清样品的的采集与制备

于试验结束的早晨每个重复选1只鹌鹑空腹颈静脉采血约4 mL。

测定丙氨酸氨基转移酶（ALT）、肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）和胆碱脂酶（CHE）等血清酶时血清样本制备：取2 mL采集好的血液，置于离心管中，37℃ 恒温水浴20 min，4℃、3 500 r／min离心10

min，收集血清，将血清样品装在离心管中，置于冰箱中-70℃低温保存待用；测定醛固酮（ALD）、皮质醇（FC）、总蛋白（TP）、总脂（TG）、甲状腺素（T4）等指标时血清样本的制备：取1.5～2 mL采集好的血液，注入离心管中，3 000 r／min离心15 min，取出血清装入离心管，-20℃保存待用。

1.3.2 血清生理生化指标的测定

ALT、CK、LDH、CHE 采用试剂盒法，用全自动生化分析仪进行测定；TG、TP用全自动生化分析仪进行测定；T4采用试剂盒法，用化学发光酶标仪测定；ALD、FC用试剂盒测定。

1.3.3 发病死亡情况观测统计

每天观察鹑群，重点观测眼病、呼吸道疾病及死亡情况，并计算发病率和死亡率。

发病率＝试验期发病鹑数×发病时间（d）／试验期鹑数×试验时间（d）×100%

死亡率＝试验期死亡鹑数／开始试验时鹑数×100%

1.4 数据处理

试验数据用SPSS11.0统计软件进行统计分析，差异显著时用SSR法进行多重比较，试验数据用平均数±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 鹌鹑的发病死亡情况

冷应激时鹌鹑的发病死亡率极显著升高，使用大米蛋白肽后，鹌鹑的健康状况得到改善（表2）。1组鹌鹑的眼病发生率、呼吸道发病率和死亡率都低极显著高于0组（P＜0.01），2组的眼病发生率、呼吸道发病率和死亡率明显低于1组（P＜0.05），但眼病发生率和死亡率明显高于0组（P＜0.05）；3、4组的眼病发生率、呼吸道发病率和死亡率极显著的低于1 组（P ＜0.01），与0 组差异不显著（P ＞0.05）。

表2 试鹑的发病死亡情况

2.2 鹌鹑血清酶含量

对血清酶的测定结果（表3）显示，2、3、4组的ALT含量明显低于1组（P＜0.05），而与0组接近（P＞0.05）；2 组与1 组CK、LDH 和CHE 差异不显著（P ＞0.05），而3、4 组的CK、LDH 和CHE 明显低于1 组（P ＜0.05）。

表3 试鹑的血清酶含量

2.3 鹌鹑血清中营养物质与激素含量

对血清中营养物质与激素含量的测定结果（表4）表明，TP：2、3、4 组明显的高于1 组（P ＜0.05），而与0组差异不显著（P＞0.05）；TG：2组与1组差异不显著（P＞0.05），3组和4组显著高于1组（P＜0.05），且与0 组不存在显著差异（P ＞0.05）；ALD：2、3组与1组差异不显著（P＞0.05），4组明显低于1组（P ＜0.05），与0 组相似（P ＞0.05）；FC：2 组与1组差异不显著（P ＞0.05），3、4组明显低于1组（P ＜0.05），而与0 组的差异不显著（P ＞0.05）；T4：2 组与1组差异不显著（P＞0.05），3、4组明显低于1组（P ＜0.05），而与0 组接近（P ＞0.05）。

表4 试鹑血清中营养物质与激素含量

3 讨论

3.1 大米蛋白肽对鹌鹑发病死亡的影响

冬季的低温造成鹌鹑生理机能失衡，免疫机能下降［7］，加上冬季为了保温，通风换气量较小，舍内有害气体浓度升高，致使动物的发病死亡率上升。本试验中，添加1.5%的大米蛋白肽，鹌鹑的眼病发生率、呼吸道发病率和死亡率与冷应激对照组相比明显降低；而添加2.0%的大米蛋白肽时，上述指标降低极为显著，添加2.5%的大米蛋白肽与添加2.0%者相比，上述指标虽然有所改善，但没有统计学上的差异。作者前期的研究表明，饲料中添加大米蛋白肽可以降低冬季鸡舍中有害气体的含量［8］，且能提高猪的免疫机能［9］。本研究在冷应激环境下添加大米蛋白肽显著降低了鹌鹑的发病率和死亡率，其原因可能也在于此。本试验结果还表明，在减少冷应激状态鹌鹑发病死亡率方面，大米蛋白肽的适宜添加量为不少于2%。

3.2 大米蛋白肽对鹌鹑血清酶的影响

血清酶大多是组织特异性的，血清中酶的活性代表着特定组织器官的代谢水平和功能状态。ALT主要来自肝脏、骨骼、胆囊，存在于组织细胞中，参与脂肪代谢；CK主要来自骨骼肌，在体内主要促进磷酸肌酸转化为肌酸和ATP；LDH广泛存在于动物机体的组织器官中，CHE定位于神经突触前后膜上。正常情况下，细胞内的酶由于细胞膜的屏障作用不易逸出，只有细胞受到损伤，才使细胞内酶释放的速度加大，血清酶活性升高。有研究表明，冷应激时细胞膜的通透性升高，致使血清酶活性增强［10］。本试验中添加1.5%的大米蛋白肽只有ALT的含量明显低于冷应激对照组，而添加2.0%和2.5%时，ALT、CK、LDH和CHE都明显低于冷应激对照组，原因可能是大米蛋白肽能够减轻动物的应激，且使血清中蛋白质和脂肪的合成量增加［11］，血清中蛋白质和脂肪的含量增加则有利于维持细胞膜的完整性和机体的内稳态。本研究结果显示，添加大米蛋白肽条件下鹌鹑血清酶活性的变化趋势与鹌鹑发病死亡率一致。

3.3 大米蛋白肽对鹌鹑血清中营养物质与激素含量的影响

有研究表明，血清中TP能够保持血液PH值的稳定，并能在应激的情况下为机体供能，从而提高动物的免疫能力［12］，血清中TG有利于磷脂的合成和保证寒冷时体内生物膜的完整，从而降低其通透性［13］。在本试验中表现出了鹌鹑血清酶的浓度降低；还有研究认为，动物在应激情况下，体内的FC和ALD分泌增多［14］，而FC使蛋白和脂肪分解加强，降低TP和TG含量，ALD过多会打破体内离子平衡，促进钾离子和钙离子的排出［15］，不利于动物维持机体的内稳态；另外，寒冷时动物为维持体温，体内代谢加强，血液中T4浓度升高。本试验中，添加1.5%的大米蛋白肽，仅使血液中的TP含量得到明显改善，而添加2.0%的大米蛋白肽的组则能使TP、FC、T4都得到明显改善，添加2.5%的大米蛋白肽与添加2.0%相比，还能改善血液中的ALD。本试验结果表明，大米蛋白肽具有提高鹌鹑抗冷应激的作用，且从改善鹌鹑血清中营养物质与激素含量的方面考虑，大米蛋白肽的适宜添加量为2%～2.5%。

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Effect of Rice Peptides on Health Condition and Blood
Biochemical Indicators of Quail During Cold Stress

Liu Weidong1Cheng Pu1Wang Zhangcun2Jin Shuangxing1
（College of Animal Science and Technology，Henan Univeisity of Animal Husbandry and Economy1，Zhengzhou 450046）（School of Food＆ Bioengineering，Zhengzhou University of Light Industry2，Zhengzhou 450002）

Six hundred 3-month-old yellow male quails were randomly assigned to five groups （120 for each group）with three replicates and 40 quails for each replicate.Every group quails were fed in different temperature houses.The control group （group 0）was fed in the poultry house with articifical warming（23 ±1）℃.Test group 1～4 were fed in the natural condition house（11±2）℃.Group 0 and group 1 were fed with rice peptides-free basal diet，and test group 2 ～4 were fed with different supplement of 1.5%，2%and 2.5%rice peptides in the control diet，respectively.The experiment lasted for 18 days.The results showed that the supplementation of the rice peptides（2%～2.5%）significantly or very significantly decreases the disease incidence，mortality，serum enzyme，aldosterone（ALD）and cortisal（FC）as well as thyroxine （T4）contents of the quails（P ＜0.05 or P ＜0.01）；nevertheless increases the contents of serum total lipids（TG）and total protein （TP）（P ＜0.05）.In conclusion，this research indicates that the rice peptides could decrease the mortality of the quails under cold stress，and it was conducive for quails to maintain the physiological balance in stress environment.

rice peptides，cold stress，quails，mortality，biochemical index

S831.5

A

1003-0174（2016）11-0081-04

国家自然科学基金（31071517）

2015-04-06

刘卫东，女，1962年出生，教授，动物营养与饲料科学